BJS201703豆芽中植物生长调节剂的测定

1、附件3豆芽中植物生长调节剂的测走BJS 2017031范围本方法规定了豆芽中11种植物生长调节剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于豆芽中6-莘基腺嚓吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、時味乙酸、财味丁酸、2,4-二氯苯 氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺瞟吟、氯毗腺、多效I坐和噬苯隆的检测。2原理试样经含1%甲酸的乙睛溶液匀浆提取，脱水，离心后，上清液经分散固和萃取净化，用高效液 相色谱-串联质谱测定，外标法定量。3试剂和材料GB/T 6682规定的-级水。除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。3.1.2乙膳：色谱纯。3.1.3甲酸：色谱纯。3.1.4

2、乙酸钱：色谱纯。3.1.5无水硫酸镁。3.1.6无水乙酸钠。3.1.7十八烷基键合硅胶吸附剂(C18)：粒径范围为40 u m-60 u m.3.2试剂配制3.2.1含1%甲酸的乙膳溶液：虽取10mL甲酸，加乙脂稀释至1000rnL,混匀。3.2.2含0.1%甲酸的5 nirnoVL乙酸钱溶液：称取0.3S54 g乙酸钱，用水溶解并稀释至1000 niL, 加入ImL甲酸，混匀。3.3标准品6-节基腺瞟吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、财卩朵乙酸、财卩朵丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙 酸、异戊烯腺瞟吟、氯毗虬 多效I坐、噬苯隆标准品，纯度均$90%。标准品的中文名称、英文 名称、CAS登录

3、号、分子式、相对分子质量详见附录A中的衣A.1。3.4标准溶液的配制3.4.1植物生长调节剂标准储备液(lmg/niL)：精密称取6-节基腺瞟吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、 耐味乙酸、财味丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺瞟吟、氯毗甌、多效I坐、變 苯隆标准品(3.3)各10 mg,分别置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制 成浓度各为lmginL标准贮备液，-20C保存。342混合标准中间液A (10 Pg.niL)：分别精密量取11种植物生长调节剂标准储备液(1 mginL) (341)各1 mL,置于同-lOOniL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓

4、度 均为10 U g/mL的混合标准中间液A。3.43混合标准中间液B(1 P&mL)：精密量取混合标准中间液A (10 ug/niL) (3.4.2) 1 rnL, 置于10 niL容虽瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度均为1 M &iiiL的混合标准中间液Be 3.4.4空口基质提取液：称取空白试样各10.0 g(精确至0.01 g),分别置于50 niL具塞离心管中， 自“加入20 mL含1%甲酸的乙膳溶液”起与样品同法处理(6.1和6.2),作为空白基质提取液。3.4.5基质混合标准匚作溶液：分别精密量取混合标准中间液B (1 Ug/rnL) (343) 0 uL、10 PL、20

5、 UL 和 40 UL,及混合标准中间液 A (10 Pg/niL) (3.4.2) 10 uL、15 U L 和 20 U L,用空口基质捉取液(3.4.4)定容至1 .OniL,作为基质混合标准匚作溶液SO、S1S6。浓度 依次为 Ong/mL、lOng/mL、20 ngiiiL, 40 ngmL 100 ngiiiL 150 ng/niL 和 200ng/mL,或依 需要配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。临用新制。4仪器和设备4.1高效液相色谱串联质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI源)。4.2涡旋混合器。4.3 离心机：转速 10000 r/mino4.4电子天平:感量分别为0.01 m

6、g和0.01 g。4.5氮吹浓缩仪。4.6高速匀浆机。4.7具塞离心管：50mL和15mL4.8 QiiECliERS离心管：内含300 mg无水硫酸镁和100mgC18c4.9微孔滤膜：孔径为0.22 um有机相型微孔滤膜。235试样制备与保存将豆芽切碎后用组织粉碎机充分粉碎混匀，均分成两份，作为试样和留样，分别装入洁净容器中， 密封并标记，于18C保存。6测定步骤6.1提取准确称取10.0g (精确至0.01 g)试样置于50niL具塞离心管(4.7)中，加入20111L含1%甲 酸的乙睛溶液(321),高速匀浆2min,加入4g无水硫酸镁(3.1.5)和lg无水乙酸钠(3.1.6), 立

7、即涡旋混合1mm,以10000 r/min离心5 min使乙睛和水相分层。6.2净化精密量取上层乙睛溶液4niL置于QiiECliERS离心管(含300 mg无水硫酸镁和100 mg C18) (4.8)中，涡旋混合2 min.以14000r/nun离心5 min.移取全部上淸液于15 niL 离心管(4.7)中，于45 C水浴中氮吹至近干，用甲醇定容至ImL,涡旋混匀1 min,以14000 r/min离心5 nun,上淸液经0.22 um有机相滤膜(4.9)过滤后,取续滤液供高效液相色谱- 串联质谱测定。6.3色谱测定6.3.1液相色谱-串联质谱检测63.1.1液相色谱条件a) 色谱柱：C

8、18柱，lOOmmX 3.0mm,粒径2.7 um.或性能相当者。b) 流动相:A为含0.1%甲酸的5 nimol/L乙酸镀溶液(322), B为甲醇。梯度洗脱程序见农1。c) 流速：300 u Liiun d) 柱温：35 C。e) 进样量：5 P Lo表1梯度洗脱程序.时间（mm）流动相A（%）流动相B（%）Initial 5 953.00 5 9510903.1019.00 80 2021.00 SO 205 95 21.1059524.00质谱条件631.2源）。a）离了源：电喷雾离了源（ESI b）检测方式：多反应监测（MRM 氟苯氧乙酸、二氯苯氧乙酸、44-氯苯氧乙酸、赤霉素、2,

9、4-c）扫描方式：6-节基腺瞟吟、异戊 烯腺嚓吟、氯毗眠、曝苯隆采用负离（模式扫描：财卩朵乙酸、期喙丁酸、多效I坐采用正离/模 式扫描。）均为高纯氮气或其他合CADGS2）、碰撞气（GS1）、气帘气（CUR）、辅助气（d）雾 化气（。适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敬度达到检测妥求，参考条件详见附录E、 碰撞室出口）、碰撞室入口电压（EPCE）、去簇电压（DP） e）电喷雾电压（IS）、碰撞电压（B 等参数使用前应优化至最佳灵敬度，监测离了对和定量离/对等信息详见附录（电压CXP） B.2。 中的衣B.1和标准工作曲线制作6.3.2）进行测定。以基质混合标准631将基质混合标准丄作溶液（3

10、.4.5）按仪器参考条件（工作溶 液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。定性测定6.3.3在和同试验条件下测定试样和基质混合标准工作溶液,记录试样和标准工作溶液中植物生长调节 剂的色谱保留时间，以相对于最强离/丰度的百分比作为定性离了的相对离了丰度。中植物生 长调节剂保留时间致的色谱峰，且其3.4.5若试样中检出与基质混合标准溶液（规定的范定性 离f与浓度相当的标准溶液中相应的定性离/的相对丰度相比，偏差不超过农2围，则可以确 定试样中检出相应植物生长调节剂。定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差表2 .50W10205010）相对离子丰度（20 25 一50302025）允许的相

11、对偏差（定虽;则定634若试样检出与基质混合标准工作溶液致的植物生长调节剂，根据标准匸作曲线按外标法以峰 面积计算得到其含量。C.lo C中的图空白样品加标试样参考色谱图见附录空白试验6.4除不加试样外，均按试样同法操作。结果计算7 1）计算：结果按式（1）.（式中：）;试样中各待测组分的含量，单位为微克每 千克（ug/kgX 从标准匸作曲线中读出的供试品溶液中各待测组分的浓度，单位为纳克每亳升 c - ）： （ng/niL ）：试样溶液最终定容体积，单位为亳升（mLV -;试样制备过程中的稀释倍数，本方法中为5f g）o 称样虽，单位为克（m计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术

12、平均 值农示，结果保留三位有效数字。 检测方法的灵敏度、准确度 精密度8灵敏度8.1 r氯苯 氧乙2,4-节基腺瞟吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、财味乙酸、财味丁酸、本方法中6-；定虽限均g/kg5 卩酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺嚓吟、氯毗职、多效哇、唾苯隆检岀限均为g/kgo为10 U准 确度8.2 120%o 60%-10100 ug，kg添加浓度范圉内，回收率为一本方法在精密度8.3。20%在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的27A A附录A11种植物生长调节剂的化合物相关信息表A.111种化合物的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质虽存号中文名

13、称CAS英文名称相对分了质量登录号分/式346.37225.25175.18220.25221.04186.59247.68293.79203.24170.14203.241赤霉素2 6-节基腺瞟吟Gibberellic acid 77-06-56-BenzyTlanunopurine 1214-39-7HOC61922 NCH3财味乙酸87-51-4 Indole-3-acetic acid51211 NOCH29104噬苯隆2,4-DichlorophenoxyaceticThidiaziiron 51707-55-2OS CHN4S994-75-7 5 2,4- HCC1 二氯苯氧乙酸

14、O3286acid 6 4-Chlorophenoxyacetic acid122-88-3 4- C1OH 氯苯氧乙酸 Cbs?68 157-60-8 7 Forchlorfemiron O CHC1N 氯毗腮 smoPaclobutrazol 8 76738-62-0 O 多效坐 CHCINjiszoI33-32-4 9 3-IndolebutyTic acid NOC 财味丁酸 H21213IO 405-79-S 4-Fluorophenoxyacetic acid 4- FOH 氟苯氧乙酸 C37sN6-（delta 11 2365-40-4NH 异戊烯腺瞟吟 C5Bio2-Isope

15、ntenyl）-adenine29BB附录B参考质谱条件1）负离子模式扫描质谱条件a）离了源：电喷雾离了源（ESI源：b）检测方式：多反应监测（MRM）：c）电喷雾电压（IS）： 55OOV （ESI-）：d）气帘气（CUR）： 20Urnin；e）雾化器（GS1）： 45 Urnin：f）辅助气压力（GS2）： 35 L/nun：g）离子源温度（TEM）： 500 Cc表B.1负离子模式下8种植物生长调节剂定性、定虽离子对和质谱分析参数序分析物离子对去簇电压碰撞入口电压52 12出口电压8294.2/125.0 阻d 52VVeVin-zV号F -77 -31 224.2/133.0-4 6

16、-荼基腺嚓18 -80 1-9 224.2/106.0 -46 吟J8 224.2/117.0 -47 -9 -76*-12 344.9/142.5-33 -10-79-14-22 2344.9/238.9 -8 -78 赤霉素14 -10 -70 344.9/220.6-35-26 -18 -16 -9218.9/161.0 2,4二氯苯氧5 -34 218.9/125.1 3-37 -6乙酸10 -21 -49 -12 218.9/89.19 4-22 -6 184.8/126.7 -43 氯苯氧乙 4酸9 -39 184.8/110.7-22 -6-15 218.9/99.9 -50-1

17、6-15-10-45 218.9/70.7 -51 -15 5嗟苯隆13 -46 -49 43 218.9/91.9*-14-3 -40 245.9/126.6-116氯毗服-14 245.9/90.9 -37 -40 -3-10 -10 202.0/133.9 23 -58 异戊烯腺嚟 7202.0/106.8 -10 -58 -36 -10 吟10 202.0/157.9 -31 -70 -10-22-53 4-10 169.2/110.9 -16 氟苯氧乙 8酸-17-46-22169.2/94.9-8 8 20 60 10176.2/130.3 2映乙酸 8 78 46 10 176.

18、2/103.245 53 204.1/186.2 9 15204.1/130.4 10 7 58 330 财味丁酸 204.1/144.27671530定虽离子对。2）正离子模式扫描质谱条件a）离了源：电喷雾离了源（ESI源：b）检测方式：多反应监测（MRM）：c）电喷雾电压（IS）： 5500 V （ESI+）：d）气帘气（CUR）： 20Unun：e）雾化器（GS1）： 45 Urnin：f）辅助气压力（GS2）： 35L/min：g）离子源温度（TEM）： 500 C。表B.2正离子模式下3种植物生长调节剂定性、定虽离子对和质谱分析参数.离了对去簇电压 碰撞能量入口电压出口电压 序号分析物VnVzVVeV13