分子实验技术

1、1 分子生物学技术 2 3 分子生物学技术 4 1946 1950 1955 1960 19651970 1975 1980 1985 1990 1995 1944DNA是 遗传物质 1949Hb s贫血 1953双 螺旋 1956Hbs Glu-Val 1966遗传 密码 第一个 R酶 1972重组 质粒 1975DN A杂交 1977DNA 测序 1981转G 小鼠 1983HD 病G定位 1985PC R 1986位置 克隆 1987G剔 除小鼠 1989位置 克隆1990第一个 基因治疗 1995细菌G 组序列 1996酵母基 因组序列 现代分子遗传学发展 重要事件 5 第一节 重组D

2、NADNA技术- -基因工程 6 一、限制酶 7 1 1、限制酶的命名 8 2 2、限制酶识别序列和切割形成 9 10 部 分 常 用 限 制 酶 及 切 点 11 互补末端连接 12 产生相同序列的突出末端的不同片段 可有三种方式： 13 3 3、特点： 14 二、基因运载体及其选择 15 16 （一）. .质粒plasmidplasmid 17 常用的质粒如pUC19pUC19，多连接子MCSMCS。插入外源基因片段长度 约10kb10kb。将外源基因插入到MCSMCS中，随质粒的表达而表达， 增殖而扩增。外源基因插入到MCSMCS后，-半乳糖苷酶的活性 丧失而不显兰色- -白色菌落。如果

3、不插入外源基因，则产生 兰色。从而筛选阳性菌落。 Eco RI HindI II OriOri复制起 点 LacZ APR pUC19 18 （二）.-.-噬菌体(phage)(phage) 19 20 裂 解 途 径 21 （三）. .粘粒(cosmid vector)(cosmid vector) （303040kb40kb） 是将质粒和噬菌体改建的一种载体. .它 含COSCOS序列, ,插入一小plasmid plasmid 而得名 CosmidCosmid。改建后的粘粒含有噬菌体的复 制起点和cos cos 末端。全长8kb8kb。大片段外 源DNADNA插入后，在体外包装进而被克隆

4、。 可包装303045kb45kb长的DNADNA片段，多用于基 因文库构建。 22 ( (四) ) 大片段DNADNA克隆载体 23 1 1、细菌人工染色体（bacterial artificial bacterial artificial chromosome,BACchromosome,BAC） 24 2 2、噬菌体PIPI载体和PACPAC 25 3 3、酵母人工染色体（yeast artificial yeast artificial chromosome, YACchromosome, YAC） 26 YAC YAC 的主要功能成份有三： 27 三、DNADNA重组与分子克隆化 28 基本原理与过程： 29 分离纯化目的基因 目的基因 + vector =重组DNA分子 30 重组 DNADNA 和 分子 克隆 31 重组DNADNA和分子克隆的几种方法： （依目的基因的来源） 32 从基因 组中分 离目的 基因在 细胞中 克隆 33 筛选含有重组DNADNA的细胞细胞克隆（cell clonecell clone） 34 筛查含有目的基因的细胞克隆 35 四、目的基因表达 36 目的基 因表达 37 （一）真核细胞的基因在原核细胞 （细菌）中表达 38 ( (二) )、真核细胞基因在真核细胞中表 达