中西医结合临床专业毕业论文[精品论文]乌骨藤注射液对bel-7402细胞增殖及血管生成作用的实验研究

1、中西医结合临床专业毕业论文 精品论文 乌骨藤注射液对bel-7402细胞增殖及血管生成作用的实验研究关键词：乌骨藤注射液 抗肿瘤活性 血管生成作用 细胞增殖 bel-7402 诱导凋亡摘要：1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中

2、具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。

3、 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluor

4、esenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意

5、义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰

6、总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。正文内容 1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿

7、瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并

8、证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学

9、法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果：

10、 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比

11、均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生

12、成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成

13、，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根

14、据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白

15、的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡

16、率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，

17、随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基

18、础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医

19、药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达ve

20、gf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，f

21、i1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf

22、表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-

23、2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优

24、势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞be

25、l-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌

26、细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、

27、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免

28、疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，

29、抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌

30、骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞b

31、el-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi&a

32、mp;gt;1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情

33、况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤

34、细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性

35、，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌

36、骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不

37、同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(

38、20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计

39、学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗

40、肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效

41、，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同

42、浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对

43、照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞b

44、el-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用

45、，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠

46、久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐

47、(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式

48、细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7

49、402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和m

50、mp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和

51、阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止

52、咳平喘、消炎镇痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效，引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性，从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2以及抑癌基因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2.方法： 2.1 mtt法 采用四氮唑盐(mtt)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌细胞bel-7402细胞增殖的影响，并根据吸光度(od)值作图得到剂量-效应图谱。 2.2 pi单染法检测细胞凋亡和周期 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402凋亡和周期的影响。 2.3 elasi

53、法 利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞bel-7402不同时间段表达vegf的影响。 2.4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学s-p染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后b-fgf和mmp-2蛋白的阳性表达率。 2.5流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细胞bel-7402后p53蛋白的表达情况。p53蛋白荧光指数(fluoresenceindex，fi)表示定量的p53蛋白。绿荧光log收集的荧光强度峰值数转化成线性刻度，对照管作为阴性表达fi=1。fi计算公式如下：

54、fi=检测管细胞平均荧光强度/对照管细胞平均荧光强度。如fi>1.0为阳性表达，fi1.0为阴性表达。 3.结果： 3.1不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对人肝癌细胞bel-7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3.2人肝癌细胞bel-7402经不同浓度的乌骨藤注射液(20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3.3利用elasi试剂盒检测不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、4

55、0mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后vegf的表达情况，随着药物浓度的增加，vegf表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 3.4免疫细胞化学的结果显示，不同浓度的乌骨藤注射液(10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)作用于人肝癌细胞bel-7402后，与阴性对照组相比，b-fgf和mmp-2的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3.5流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强度增加，p53峰总体向右偏移。根据fi计算公式计算出fi值，经不同浓度的乌骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且fi值随剂量的增加而增高。 4.结论： 乌骨

56、藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿瘤细胞vegf、bfgf、mmp-2的表达，从而阻断了肿瘤的血管生成和转移侵袭，另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53的激活又可以抑制vegf的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用的。1.目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。乌骨藤，又叫通光藤，为萝藦科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该药始载于滇南本草，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎