液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解

1、液相色谱法检测苯甲酸、 山梨酸、糖精钠的疑难详解-不能不看的精华生活， 就是面对现实微 笑，就是越过障碍注视未来；生活，就是用心灵之剪，在人生之路上裁出叶绿的枝头；生活，就是面对困惑或黑暗时，灵魂深处燃起豆大却明亮且微笑的灯展。17过去与未来，都离自己很遥远，关键是抓住现在，抓住当前。液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解不能不看的精华液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/, 糖精钠的检测参照 GB/T，即可开展实验。苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在

2、 一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。笔者根据自己多年 该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。2样品前处理的注意事项GB/和GB/在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述 了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱， 影响检测工作。这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品 中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。GB/使用5

3、%硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼 等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。如用10%钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液 （1mol/L） ml ，加入亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后，用滤纸初滤除去沉淀物 ，初滤液过卩m微孔滤膜，收集滤液于样品瓶 中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。用这种方法简单易行，接触有机

4、试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相 色谱法检测，有一定局限。3检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。原因如下：液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。尤其对于高油脂样品（如月饼）若采用碱化-排油-酸化-提取-挥干-溶解等步骤，再上气相色谱仪检 测，工作量大，试剂毒性也大，且结果由于处理步骤太多而难以保证准确。用液相色谱法还可同时完成糖精钠项目的检测，而气相色谱法只能做苯甲酸、 山梨酸的检测。液相色谱仪所用的紫外检测器比气相色谱仪的氢火焰检测器灵敏，可进行更低含量的检测。如用二极管阵列检测

5、器，还可辅助定性，这更是气相色谱氢火焰检测器不可比拟的。4选用气相色谱仪时的注意事项GB/所用的气相色谱柱为 5 % DEGS-1%磷酸固定液的 60 80目Chromosorb W AW,。这种柱有性能稳定、重复性好、保留时间稳定的优点，但同时也有稳定时间较长的缺点。该柱的适用的样品提取溶剂为石油醚或乙醚，如果用甲醇或乙醇，则溶剂峰拖尾效应较大， 对山梨酸的测定有影响。如用毛细管柱，能取得更好的峰形和灵敏度，但其稳定性及特异性不如填充柱。一般可用非极性毛细管柱，内径，10 15m长度。色谱条件可能需用程序升温。在气相色谱仪上的出峰次序为先出山梨酸，后出苯甲酸。糖精钠不能直接用气相色谱进行检测

6、，必须衍生化后才能汽化进样。5选用液相色谱仪的注意事项按照GB/，流动相应为5： 95的甲醇：醋酸铵溶液，但是这个比例仅是个参考值，我们在工 作中应根据实际情况进行调节。为什么用甲醇溶液甲醇有两个作用，（1）防腐，液相色谱柱最怕流动相长菌，尤其霉菌。甲醇可使蛋白质变性，有杀菌作用。（2）调节流动相极性，这是最重要的一点。甲醇在溶液中比例的较小变化都会使苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保留时间发生明显的改变，因此可以通过 改变流动相中甲醇含量，以调节这几个组分的出峰和分离，以得到较理想的色谱图。5: 95是一个通用的比例，如减少甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间变慢扩散效应增大，峰形较差，但这三

7、组分的分离情况较好。如增加甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间提前，扩散效应较小，峰形尖锐，但这三组分的分离情况可能受影响，产生重叠。在选择条件时，只能通过实验手段，如配制3: 97, 4： 96, 5: 95, 6: 96, 7: 93的流动相，综合考虑分离效果和分离时间选择最佳比例。不同柱的最适比例不同，举例来说，色谱科公司的液相柱最适比例为4: 96，而岛津公司液相柱的最佳比例为 7: 93。就是同一根柱，一年前和一年后的极性也会有变化，需调节溶液 配比。为什么使用醋酸铵溶液加入醋酸铵是为了调节离子强度，使待测物的峰形不致于变坏。如果 单独检测苯甲酸和糖精钠，加不加醋酸铵没有什么关

8、系，都可以得到较好的峰形；但是检测 山梨酸时流动相一定要加醋酸铵，否则得不到一个完整的色谱峰，峰形呈破裂状。醋酸铵溶液浓度不需严格控制，、均可。苯甲酸、山梨酸、糖精钠在液相上的出峰次序很有特点。在流动相5： 95及以下比例时，次序是苯甲酸、山梨酸、糖精钠（注意一下气相的出峰次序），逐步增大甲醇含量，苯甲酸、山梨酸的出峰时间逐步提前，而糖精钠是出峰时间迅速提前，随着甲醇比例的逐步增大（15%-30%）,原先在最后出峰的糖精钠集次和前面的山梨酸、山梨酸重叠，并位于最前面，其次序变为糖精钠、苯甲酸、山梨酸。再提高甲醇浓度，次序不变。用高甲醇比例条件（甲醇15%以上）做出的三种标准物质色谱图峰形较好，

9、出峰时间也较快,但做实际样品时干扰较大；因此建议尽量使用低甲醇比例条件（甲醇5%左右）。6苯甲酸、山梨酸超标时的判断苯甲酸、山梨酸超标的样品较多，由于它们往往牵涉到一批货物是否合格，因此责任重大。由于该方法定量较准确，因此遇到超标样品时应将精力集中于定性方面。如同时有气相色谱仪和液相色谱仪，建议用这两种性质相差较大的仪器进行对照，如定量结果差不多，即可确认。如只有气相色谱仪，应利用其在填充柱保留时间稳定的特性，同时进五针标准液和五针样品液（注：峰面积应差不多，否则需对一方按比例稀释），如标准和样品液的保留时间相差时间超过1秒，可认为不是。（如进针的技术不过关，请不要做此实验）如用液相色谱仪，当

10、检测器为二极管阵列检测器时，根据保留时间和紫外吸收图结合定性，当只有紫外检测器时，改检测波长为220nm, 230nm, 250nm,重复进标准和样品液，由标准和样品在不同波长的峰高比值看是否吻合。如有微生物检测手段，可加样品于有菌培养基中，观察有无抑菌现象，如无抑菌现象则无防腐剂。不是很推荐用双柱法，因为有时柱极性相差不大，反而会影响最终判断。7糖精钠超标时的判断当检测糖精钠超标时，除了采用二极管阵列检测器或波长验证，还可以利用糖精钠的荧光特性，用荧光检测器进行验证。荧光条件是激发波长为 277nm荧光波长为410nmo只有当用荧光检测器和用紫外检测器做出的定量结果相差不多，才可以判断为是。

11、还有一个简单粗糙、却也行之有效的验证方法，即感官法。糖精钠是一种甜味剂，用舌头可以感觉到它的甜味，如果含量超标，一定能尝出来。8标准溶液的配制贮存问题。如用苯甲酸、山梨酸、糖精钠的标准溶液如用水、乙醇作基体，一般几个月后会严重降解， 甲醇溶解再放于冰箱冷冻层，可保持稳定一两年。因此推荐用甲醇作溶剂。在配制标准溶液时，初学者常犯的错误多为用甲醇溶解苯甲酸钠，用水溶解苯甲酸，晃了半 天才发现怎么也不没溶解。应该用弱碱性水溶解苯甲酸钠、山梨酸钾，用甲醇溶解苯甲酸、 山梨酸。9苯甲酸、山梨酸的应用范围首先应注意到，并不是所有食品都需要加入防腐剂，只有那些富含营养物质，且需要长时间 暴露于空气的才有这样的需要，否则对厂家来说会增加不必要的成本。酱油、酱料、咸菜、浓缩果汁等由于开封后不可能短期内吃完，月饼等需在货架上摆放，如 不加防腐剂很快会发霉变质，有添加防腐剂的必要。而利乐装或易拉罐装的饮料由于很快可 以食用完毕，即在细菌大量繁殖前己被消化了，因而没有添加的必要。苯甲酸、山梨酸如果要起到防腐的作用，含量就不能太低。如果我们检测样品时只有几个ppm的浓度，有可能是从原料中带来的或由其它添加剂转化来的，而不是厂家出于防腐目的加入的。苯甲酸、山梨酸也只是防腐剂中的两种。 并不是所有需要加入防腐剂的食品都会添加苯甲酸、山梨酸，