中药学毕业论文非标准制剂抗感饮质量标准的研究

1、本科毕业论文非标准制剂抗感饮质量标准的研究二级学院中药学院专 业中药学（中药现代化技术方向）班 级2007级（2）班学生姓名学 号0706506211指导教师2 0 1 1 年 4 月诚 信 声 明我声明，所呈交的毕业论文（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文（设计）中的所有内容均真实、可信。毕业论文（设计）作者（签名）： 年 月 日目 录（大纲一级，三号黑体加粗居中）（空1行）摘要-1前言382材料与仪器39

2、2.1xxx392.2xxx393方法（或实验方法）403.1xxx403.2xxx404结果405讨论41参考文献42综述43致谢44附录（如没有图谱、调查表等要去掉）45注：关于论文目录，我院统一写到二级目录，以上是统一格式。(此为实验论文格式)如非实验论文，目录格式也应一致，但目录名称中“材料与仪器、方法与结果（或实验方法）”可换成相对应的内容。如“资料与方法、结果与分析” ； 或“方法、结果、分析与讨论 ”等。请在上交资料时删除此注。样本3 非标准制剂抗感饮质量标准的研究摘要：目的 研究非标准制剂抗感饮的质量标准；方法 采用薄层色谱法对黄芩药材中黄芩苷及抗感饮中黄芩苷、桔梗和连翘成分进

3、行定性分析，用高效液相色谱法对黄芩药材中黄芩苷和抗感饮中黄芩苷进行定量分析：色谱柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪马公司），预柱为大连依利特（佳杰）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；检测波长为274nm，柱温25；进样量 20l。结果 采用薄层色谱法鉴别，所得图谱清晰，可鉴别出黄芩药材的特征成分及抗感饮中黄芩苷、桔梗、连翘等味药的特征成分；采用高效液相色谱法测定，黄芩药材按干燥品计算，含黄芩苷（c21h18o11）计，为10.24%,符合规定；抗感饮中黄芩苷在8g/ml-48g/ml范围内线性关系良好（相关系数r=0.9998）；经

4、测定，3批抗感饮中黄芩苷的含量均符合南方医院药学部内控质量标准；结论 本方法快速准确可靠，可作为非标准制剂抗感饮质量标准监控方法。关键词：抗感饮；黄芩苷；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准istudy on quality standards for nonstandard preparation kangganyinabstract: objective the study of standard preparations are kangganyin quality standard . methods tlc method of radix scutellariae medical b

5、aicalin and kangganyin in baicalin, balloonflower and forsythia constituents of qualitative analysis, by hplc of radix scutellariae medical baicalin and kangganyin in baicalin quantitative analysis : diamonsil c18 column chromatography column (200mm4.6mm，5m dima company ), advance in accordance with

6、 the special column for the dalian (jia jie) ; mobile phase for methanol-water - glacial acetic acid (60) in the five: velocity 1.0 ml/min ; for 274nm detected wavelength ; column temperature 25 ; enter the sample weight 20 mu l ; results tlc method to identify, income map clarity, can identify radi

7、x scutellariae crude characteristic ingredients and kangganyin in baicalin, balloonflower, such as gout drug characteristics of forsythia bush component; by hplc, radix scutellariae medicinal materials according to the dry matter computation, including baicalin (c21h18o11) plan, for 10.24%, in confo

8、rmity with the provisions, kangganyin symposium in baicalin in 8 muon g/ml - 48 muon g/ml range insider sexual relationship good (correlation coefficient r = 0.9998); according to the mensuration, three batches anti feeling symposium in baicalin content which conform to the southern hospital medicin

9、e division of internal control quality standards, conclution this method is rapid, accurate and reliable as non-standard preparations are resistant to drink quality standard monitoring method. keywords: kangganyin; baicalin, hplc, tlc,quality standard.sii1前言抗感饮是南方医科大学南方医院自产的制剂，是由黄芩、金银花、连翘、生地、桔梗等多味中药

10、经提取制成的非标准制剂，具有辛凉解表、清热解毒之功效，适用于病毒和细菌感染引起的肺炎、气管炎、支气管炎、咽炎，扁桃体炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的发热，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病的治疗，是抗病毒、抗菌的中成药。该方中黄芩为君药，其主要作用为抗炎、抗变态反应、抗菌解热等。本课题对抗感饮中的中药材及其主要成分进行定性、定量试验，以黄芩苷、黄芩药材、连翘药材和桔梗药材为对照品，采用薄层色谱法，对黄芩药材及抗感饮中的黄芩苷、连翘和桔梗成分进行定性分析；采用高效液相色谱法对黄芩药材及抗感饮中的黄芩苷进行定量分析。随着人类社会的发展，气候也发生了变化，空气的质量也降低，各类疾病也逐渐登上人类的

11、舞台，人们难免不受其侵犯，如病毒、细菌感染引起的肺炎、气管炎、支气管炎、咽炎，扁桃体炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的发热，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病。通过查找和分析文献得知，类似抗感饮功效的制剂的研究非常热门，主要包括药物的疗效，制剂中有效成分含量的测定，制剂的质量标准研究等等方面。抗感饮虽为南方医科大学南方医院自制的非标准制剂和只限于院内医疗机构使用，但其使用范围广及临床疗效显著，销量较大，故产量相对也高。自2005年8月，国家食品药品监督管理局颁布的医疗机构制剂注册管理办法开始实施，该办法规定医疗机构制剂只能在本医疗机构内凭执业医师的处方使用。这对于医疗机构制剂来说是个沉重的打击

12、，但院内制剂良好的治疗效果，以及相对低廉的价格又让其具有蓬勃的生命力。所以当前的形势下，确保院内制剂效果显著、质量合格就尤为重要。抗感饮是南方医院根据药典规定，结合自身临床实践所配制的一种经典药物，临床疗效显著。所以对其建立适当的检测方法，控制产品质量，保证用药的安全和有效，改善产品的制备工艺具有十分重要的意义。本课题对抗感饮质量标准的研究是从原料开始跟踪研究，先对其原料进行检测，符合中国药典（2010年版）的相关规定者，再投料生产制剂，最后又对该制剂中的主要有效成分进行定性、定量分析，旨在确定在黄芩苷和抗感饮中的有效检测方法，并制定黄芩苷的检测标准，为抗感饮中黄芩苷含量检测提供有效根据，对有

13、效地保证抗感饮含量检测的准确性具有相当的意义。2材料与仪器2.1材料2.1.1药品：黄芩对照药材，黄芩苷对照品，黄芩素对照品，汉黄芩素对照品，连翘对照药材，桔梗对照药材，以上药品均由中国药品生物制品鉴定所提供。2.1.2试剂：甲醇、磷酸和冰醋酸是色谱纯；甲苯、乙酸乙酯、甲酸、乙醇、氯仿、无水硫酸钠、10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液等均为分析纯；纯化水为本院制剂2.2主要仪器996型waters液相色谱仪；empower色谱处理系统；天津奥特赛恩斯at-330柱温箱；sartorius公司r200d电子天平；超声仪（上海科导超声仪器有限公司）； 超纯水仪（mill-qplus usa）；半

14、自动点样仪linomat-5，数码相机系统digistore；电热恒温水浴锅dzkw-d-2。3实验方法3.1黄芩药材的鉴别 tlc鉴别：取本品药材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇（3:1）的混合液30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml是溶解，取上清液作为供试品。另取黄芩对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，黄芩素对照品，汉黄芩素对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录b）试验，吸取上述供试品溶液，对照药材溶液各2ul及上述三种对照品溶液各1ul，分别点于同一用聚酰胺薄膜

15、上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:3：1：2）为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显示三个相同的暗斑点。3.2黄芩药材的含量测定 hplc测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录d）测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。对照品溶液制备：取60c减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含黄芩

16、苷60ul的溶液，即得。供试品溶液制备：取黄芩粉末约0.3g，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含黄芩苷（c21h18o11）计，不得少于9.0%。3.2抗感饮主要有效成分的鉴别3.2.1黄芩的tlc鉴别：供试品溶液制备：取本品1ml，置10ml容量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。对照品

17、溶液制备：另取黄芩苷对照品，加乙醇制成1ml含0.1ml的溶液。按薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录b）试验,吸取上述2种溶液各5l，分别点于同一用聚酰胺薄膜上，以36%乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的褐色斑点。3.2.2连翘的tlc鉴别：取本品10ml，加乙酸乙酯充分振摇提取3次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸发至干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，置水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液在水浴锅上浓缩至5ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典201

18、0年版一部附录b）试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸（17：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3.2.3桔梗的tlc鉴别：取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合液20 ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水30ml洗涤，弃去洗液，三氯甲烷用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典20

19、10年版一部附录b）试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3.3抗感饮中黄芩苷的含量测定（照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录d）测定。）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使

20、溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含黄芩苷0.1mg）。供试品溶液的制备：精密量取装量项下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每支含黄芩按黄芩苷（c21h18o11）计，不得少于81mg。3.4方法学验证1）仪器与试药仪器：996型waters液相色谱仪；empower色谱处理系统；天津奥特赛恩斯at-330柱温箱；sartorius公司r200d电子天平；超声仪（上海科导超声仪器有限公司）； 超纯水仪（mill-qplus

21、usa）。试药：黄芩苷对照品（715-200111）（置五氧化二磷减压干燥中干燥12小时以上使用，）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；冰醋酸为色谱纯。2）色谱条件 色谱柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪马公司），预柱为大连依利特（佳杰）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；检测波长为274nm。柱温25；进样量 20l。3）系统适用性试验 按1）项下进样对照品溶液，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。4）标准溶液的配制 精密称取（置五氧化二磷减压干燥中干燥12小时以上）黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇

22、适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液，取储备液5ml置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。5） 供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得供试品储备液，取供试品储备液1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。6） 线性试验 精密量取黄芩苷对照品储备液各2、4、6、8、10和12ml,一一对应置于25ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，超声，即得系列对照品溶液，按“1）”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰面积

23、。以峰面积的积分值a为纵坐标，以黄芩苷的浓度c（g/ml）为横坐标作标准曲线，求回归方程.7）空白试验 按处方比例，取按本品制备工艺制成的不含黄芩苷药品的阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，精密吸取10l，注入液相色谱仪。8) 精密度试验 精密量取黄芩苷对照品溶液20l，按“1）”项下色谱条件重复进样6次，测定黄芩苷的吸收面积。 9）稳定性试验 精密量取供试品溶液，分别于0h、4h、8h、16h、24h进样测定，记录峰面积。10）加样回收率试验 精密量取已知含量的样品1.0ml，分别准确加入黄芩苷对照品溶液各7.0ml、9.0ml、11.0ml，每个浓度2份，分别置于25m

24、l量瓶中加50%甲醇至刻度，摇匀，超声。按“1）”项下的色谱条件下进样，测定峰面积，以回归方程计算各自的回收率。11）重复性实验 取批号为20101101抗感饮口服液，按上述方法制备成6份供试品溶液，并照上述色谱条件平行测定，12） 样品测定 精密量取供试品溶液，分别测定3个批号的抗感饮的黄芩苷的含量。4 实验结果4.1黄芩药材鉴别的结果4.2黄芩药材含量测定的结果4.2.1 黄芩苷对照品的色谱峰及色谱峰结果如下图： 图1. 黄芩苷对照品a的色谱峰图2. 黄芩苷对照品b的色谱峰图3. 黄芩苷对照品c的色谱峰表4-1.黄芩苷对照品的色谱峰结果 试 样 保留时间（分钟） 面积（微伏*秒） 高度（微

25、伏） 含（ug/ml）黄芩苷对照品a 12.937 5501657 131274 60.000黄芩苷对照品b 12.916 5597879 134980 60.000黄芩苷对照品c 12.840 5603925 136188 60.0004.2.2黄芩药材供试品色谱峰及色谱峰结果如下图：图4.黄芩药材供试品a的色谱峰图5.黄芩药材供试品b的色谱峰表4-2.黄芩药材供试品的色谱峰结果试 样 保留时间 面 积 高 度 含 量（分钟） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黄芩药材供试品a 12.833 2598511 57459黄芩药材供试品b 12794 2560295 592284.2抗感饮主

26、要有效成分鉴别的结果4.2.1黄芩的tlc鉴别 4.2.2连翘的tlc鉴别4.2.3桔梗的tlc鉴别4.3抗感饮中黄芩苷含量测定的结果4.3.1 黄芩苷对照品色谱峰及色谱峰结果如下图：图6.黄芩苷对照品1的色谱峰图7.黄芩苷对照品2的色谱峰图8.黄芩苷对照品3的色谱峰表4-3.黄芩苷对照品的色谱峰结果试 样 保留时间 面 积 高 度 含 量 （分钟） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黄芩苷对照品1 5.314 9065792 687986 101.000黄芩苷对照品2 5.272 8939025 695063 101.000黄芩苷对照品3 5.276 8975515 703097 101

27、.0004.3.2抗感饮中黄芩苷色谱峰及色谱峰结果如下图：图9.抗感饮供试品中黄芩苷1的色谱峰图10.抗感饮供试品中黄芩苷2的色谱峰表4-4. 抗感饮供试品中黄芩苷的色谱峰结果试 样 保留时间 面 积 高 度 含 量 （分钟） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黄芩苷供试品1 5.216 16367832 1341897 101.000黄芩苷供试品2 5.216 16428816 1333989 101.0004.4方法学验证 4.4.1系统适用性试验结果下图：图11. 黄芩苷标准品4.4.2线性试验以峰面积的积分值a为纵坐标，以黄芩苷的浓度c（g/ml）为横坐标作标准曲线，得回归方程，为

28、：y=75449x+2619.2，r=0.9998结果表明，黄芩苷在8.552g/ml51.312g/ml范围内线性关系良好。图12 线性 1图13 线性 2图14 线性 3图15 线性 4图16 线性 5表4-5抗感饮线性曲线（n=6）4.4.3精密度试验 精密量取黄芩苷对照品溶液20l，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定黄芩苷的吸收面积，计算其rsd为1.51%，符合要求，表明精密度良好。图17 精密度 1图18精密度 2图19 精密度 3图20 精密度 4图21 精密度 5图22 精密度 64.4.4稳定性试验 精密量取供试品溶液，分别于0h、4h、8h、16h、24h进样测定，

29、记录峰面积，结果黄芩苷面积的rsd为 2.49%，表明溶液在24h内稳定性良好。图23 稳定性1图24稳定性2图25 稳定性3图26 稳定性4图27 稳定性54.4.5加样回收率试验图 28 加样回收试验 1图 29 加样回收试验 2图 30 加样回收试验 3图 31 加样回收试验 4图 32 加样回收试验 5图 33加样回收试验6表4-6.黄芩苷的加样回收率实验（n=6）样品量/g加入量/g测得量/g回收率/%/%rsd/%16.2149.66176.03106.13106.401.5516.2149.66176.19106.2316.2192.42221.28106.5816.2192.4

30、2224.31107.5216.2235.18271.09108.3816.2235.18259.67103.534.4.6重复性实验据试验所得数据（下图）计算知黄芩苷含量的rsd为1.78%（n6），表明方法重现性良好。图 34 重复性 1图 35 重复性 2图 36 重复性 3图 37 重复性 4图 38 重复性5图 39 重复性 644.7样品测定精密量取供试品溶液，分别测定3个批号的抗感饮的黄芩苷的含量。结果表4-7表4-7.样品测定结果批号 黄芩苷 rsd%20101101 8.315mg/ml20101101 8.114mg/ml 1.22%20101101 8.218mg/ml5

31、讨论 参考文献引用，序号在右上角标注5.1影响产物的条件分析5.1.1反应介质碱性强度的影响本反应类似willamson法制备醚的反应，即壳聚糖分子中羟基首先要和氢氧化钠键合，形成活性中心（chitosan-o-na+）后和氯乙酸反应8, 10-14。因此碱化步骤是整个反应的关键。碱化程度越高，约有利于反应的进行。实验中，强碱条件下，同时提高氯乙酸的量有利于提高取代度。样本9参考文献1 高怀生，黄是是，张世达，等. 壳聚糖的结构分析j. 天津化工，1996，14(2): 21-22.2 x.-g. chen, h.-j. park. chemical characteristics of o-

32、carboxymethyl chitosans related to the preparation conditions j. cacinogtnesis, 1996,17(2) :135-140.样本103 陈文娟.姜黄素对恶性肿瘤细胞的调控j. 临床血液学杂志，1999， 12(5)：238-241综 述浅谈黄芩苷含量测定方法研究进展前言 黄芩( s cutel l ari a baicalensis georgi) 为唇形科黄芩属多年生草本植物黄芩的干燥根,又名山茶根、烂心草、黄金茶、子芩、条芩、枯芩等，是我国著名的传统中药，始记于神农本草经，列为中品。主产于河北、山西、内蒙古、辽宁等

33、地区，以山西产量最大，河北承德质量最好。其性寒、味苦,归肺、胆、脾、大肠和小肠经,具有清热燥湿,凉血安胎,止血,泻火解毒等功效,用于治疗发热烦渴、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、胎动不安和痈肿疮毒等症。黄芩的有效成分是黄酮类化合物，迄今分离出近约40种黄酮，黄酮类成分是其发挥药理作用的基础，其中黄芩苷（c21h12o11，baicalimai）、黄芩素(baacalien)、汉黄芩素(wogonin)、黄芩苷元(wogonoside)是最主要的活性成分，其中以黄芩苷的有效成分最强，是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分，黄芩苷具有抗微生物、抗变态反应、降压和镇静、利胆、保肝和解痉等作用。现代药理学

34、研究表明黄芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、保护神经元细胞、抑制醛糖还原酶活性、阻止钙离子通道及细胞凋亡等作用。黄芩苷已受到国内外医药界越来越多的关注,需求量也随之剧增, 是一种很有发展前途的抗氧化、抗肿瘤、抗病毒的生物化学成分1-2 。测定黄芩苷含量常在中药制剂中作为质量控制标准之一。目前发展的黄芩苷测定方法有分光光度法、薄层扫描法、液相色谱法、红外光谱分析法、色谱-质谱联用法、高效毛细管电泳法等7-9。1.分光光度法( spectrophotometry) 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。常用

35、的波长范围为: 200400 nm的紫外光区; 400760nm的可见光区; 2.525 um (按波数计为4000cm-1400cm-1 )的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计) 、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。操作简单、准确度高、重现性好3。应用于黄芩苷测定得分光光度法主要是紫外分光光度法。1.1紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometry)紫外分光光度法是利用分子结构具有双键、共轭双键、苯环、芳香稠环、芳香杂环或共轭烯烃的物在一定波长(220350 nm)的范围内的吸收度来测定该物质含量的一类光学方法，其灵敏度高、操作简单、

36、仪器要求不高，易于普及。黄芩苷具有不饱和结构，对紫外光具有选择性吸收，可用该法测定含量。对于黄芩苷的复方制剂,多用色谱分离法去除干扰后再用紫外分光光度法进行含量分析。冯敏等4采用紫外分光光度法测定了清热口服液中黄芩苷含量。样品经过浓盐酸(hcl)调节ph值,沉淀加氯仿提取, 75%乙醇洗脱沉淀,得到黄芩苷,在= 278100 nm波长处测定,得到良好线性关系。邓顺甫5采用三波长分光光度法测定清热解毒合剂中黄芩苷含量，3，黄芩苷在3.96849.60ug/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.9983）；方法平均回收率为9896%，rsd=1.14.2. 薄层扫描法薄层扫描法主要利用薄层板将待测药

37、物与其他干扰药物分开,然后根据展开后薄层板上确定待测组分的斑点位置,用薄层扫描仪测定斑点的峰面积或吸收度来定量，是2000版药典黄芩苷的含量测定方法,方法较紫外分光光度法简便,避免了人手刮取斑点洗脱的缺点,但该法精密度较低,而且回收率较差，但其也有独特的优点,如仪器价廉,薄层层析的流动相选择余地较hplc大得多,每次测定更新薄板,不会造成柱效下降等。薛满，闵春艳6采用薄层扫描法测定金蝉口服液中黄芩苷的含量，黄芩苷点样量(cr)在0.217-1.083ug/ml范围内与峰面积响应值（a )呈良好的线性关系。3.液相色谱法3.1高效液相色谱法（hplc）高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相

38、泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。高效液相色谱法具有灵敏度、特异性高,分离效能高，分析速度快,高度自动化,进样前样品处理简单,样品易回收,样品经色谱柱可不被破等优点,是目前黄芩苷定量分析方法中较为优越的方法,也是质量控制中较常用的方法。但hplc存在分析时间长,分离效率低,色谱柱易污染难清洗的缺点。高效液相色谱法最常用的hplc多应用紫外检测器: c18色谱柱,流动相甲醇-水-磷酸,检测波长270280 nm。测得线性关系、r、rsd、平均回收率、最低检测度等均

39、符合标准，是黄芩苷含量测定的药典测定方法。李美月等10采用高效液相色谱法测定小儿清肺化痰口服液中黄芩苷的含量，黄芩苷在0.1211 2.4220ug 范围内线性关系良好,相关系数r=0.9997, 平均回收率为98.4%,rsd=0.85%。刘坚华11采用hplc-dad法测定肺力咳合剂中黄芩苷的含量，黄芩苷进样量在0.090.72ug范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9995);平均回收率为99.8%(rsd=0.77%（n=6)。3.2 超高效液相色谱法（uplc）超高效液相色谱法对原高效液相色谱方法进行转换并优化液相色谱方法。该方法加快了分析速度，提高了分析效率，减少了有机溶剂

40、的使用，并且得到了更高的分析灵敏度。李强，巴小翠12采用uplc法测定黄芩药材中黄芩苷的含量，芩苷的线性范围为29.86238.85ng(r=0.9999)；平均回收率(n=6)为101.2，rsd为1.8，1个分析流程大约需要3min。李强等13采用uplc法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量，黄芩苷的线性范围为01190358ug(r=09992)，平均回收率(n=6)为101.2，rsd为18；1个分析流程大约需要3min。3.3 高分离度快速液相色谱法(rrlc)rrlc目前广泛运用于中药化学成分，中药制剂，中药复方成分的研究分析中，具有分析时间短，柱效高等优点，为复杂体系的分离分析提供了

41、良好的平台. 尔西丁买买提等14采用高分离度快速液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，黄芩苷在0.15一1.35ug(r=09999)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系，加样回收率为100.41%，rsd= 1.42%。3.4 反相高效液相色谱法(rphplc) rp-hplc法是在hplc法的基础上改变固定相和流动相的极性的液相色谱法。吴佳等15采用反相高效液相色谱法测定当归拈痛丸中黄芩苷含量黄芩苷选样量在0.060841.8252 ug范围内与峰面积线性关系良好，r=l.00，平均加样回收率为97.0% ，rsd为1.1% (n=9)。李卓、李湘斌16采用反相hplc法测定咽喉炎合剂中黄

42、芩苷的含量，黄芩苷进样量在o.141.20 ug 范围内与峰面积呈良好线性关系(r =0.99998)；平均加样回收率为99.78%(rsd=055%，n=6)。林启凰等17采用反相流动注射化学发光法测定黄芩苷，在优化的条件下，黄芩苷浓度在1.010-81.010-7和3.010-74.0 10-6 moll范围内与化学发光抑制强度i，呈良好的线性关系，检出限为1.0 x 109 moll，对30107 moll的黄芩苷进行平行测定lo次，得相对标准偏差(rsd)为1.7。4. 红外光谱分析法红外光谱分析法(n ir)首先通过样品测定校正集的光谱、组成或性质数据(组成或性质数据需通过其它认可的

43、标准方法测定) ,采用合适的化学计量学方法建立校正模型,再通过建立的校正模型与未知样品进行比较,实现定性或定量分析，可使用傅里叶变换红外光谱仪或色散型红外分光光度计。用聚苯乙烯薄膜（厚度约为0.04mm）校正仪器，绘制其光谱图，用3027cm-1，2851cm-1，1601cm-1，1028cm-1，907cm-1 处的吸收峰对仪器的波数进行校正。该法具有操作简便、快速、准确度高、无损、原位与无消耗等特点。王东，王玲18采用近红外光谱法测定黄芩药材中黄芩苷的含量，利用 3o个样品经内部交叉验证建立预测模型，内部交叉验证决定系数r2=86.24，内部交叉验证均方差rmsecv=0.8220。用9

44、个样品进行外部验证，外部验证预测均方差rmsep=0.3667，预测值与真实值的相关系数为0.9833。预测值的平均回收率为99.37。杨欣等19对黄芩近红外漫反射光谱法对定量模型的建立及应用进行研究，所建立的定量模型，其内部交叉验证相关系数r一0971 2，内部交叉验证的均方差(rmsecv)为0.677；外部验证相关系数r一0.96l8，外部验证的均方差(rmsep)为0.396。5.色谱-质谱联用法质谱法是使待测化合物产生气态离子，再按质荷比（m/z）将离子分离、检测的分析方法，检测限可达10-1510-12 mol 数量级。质谱法可提供分子质量和结构的信息，定量测定可采用内标法或外标法

45、，是分析纯有机化合物的最强有力的分析工具。色谱法是根据不同组分之间性质如(溶解度、吸附能力、挥发度等)的不同,使样品经过色谱柱后差速分离而分开的方法。ms作为质谱检测器，其灵敏度优于紫外分光光度法，质谱在检出峰的同时还能给出分子量和结构信息,使检测具二维性。但ms不适合分析复杂的混合物。经典的色谱-质谱联用法包括气相色谱/质谱联用(gc/ms)、液相色谱/质谱联用(lc/ms)、超临界流体色谱/质谱联用(sfc/ms)、毛细管电泳/质谱联用(ce/ms)。焦燕等20采用lc - ms/ms法同时测定不同产地半枝莲中野黄芩苷和芹菜素含量，野黄芩苷浓度在2167217 mg/l范围内线性关系良好，

46、含量范围为0103%0139%，平均回收率( n = 5)为9911%，rsd为1.4%。6. 高效毛细管电泳法（hpce）高效毛细管电泳是80年代发展起来的一类分离分析方法，将经典电泳技术和现代微柱分离相结合，具有高效、高速、微量、操作简单和低耗的优点，在药物分析方面逐渐得到重视，有了较广泛的应用，但检出度和精密度均逊色于hplc。杨慧文等21采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量，黄芩苷质量浓度在7.552.5.ug/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9996)，黄芩苷平均回收率为96.7，rsd值为1.62(n=6)。林凌等22采用毛细管区带电泳法测定黄芩中黄芩苷的含量，黄芩苷

47、峰形良好，同时分离出多个峰有待进一步研究。时存义等23的黄芩的毛细管电泳指纹图谱和黄芩苷含量测定研究，以萘普生峰为参照物峰，确定了8个共有峰，l0个产地黄芩的cefp与黄芩苷的cefp具有良好相似性，含量测定结果表明不同产地黄芩中黄芩苷含量有明显差异。结束语 随着药动学的发展和完善，以及联用技术、新方法的出现，黄芩苷的含量测定不断朝着准确、方便、快速、低成本、低污染的方向发展。应用于黄芩苷含量测定的各项方法技术都有其独特的优点，但由于hplc法技术已很成熟在测定黄芩苷上得到普及，是目前黄芩苷定量分析方法中较为优越的方法，也是质量控制中较常用的方法。其中hpce法因其有独特的优势，其发展潜力非常大，将来为我们制定药品质量标准，分析化学成分等提供更好的平台。 参考文献1.李艳荣，潘海峰，魏红，李守拙. 中药材黄芩的研究近况. 承德医学院学报. vol.26 no.4 2009.418-