高效液相色谱仪操作及维护保养规程

1、题 目：spd-10a型高效液相色谱仪操作及维护保养规程1.目的本文件规定了spd-10a型高效液相色谱仪的操作及维护保养程序。以规范高效液相色谱仪的操作及维护和保养，保证仪器正常使用，延长仪器使用寿命。2.适用范围适用于spd-10a型高效液相色谱仪的操作及维护保养。43.内容3.1 方法简述3.1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。3.1.2 由于应用了各种特

2、性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。3.1.3 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。3.2 仪器组成本仪器由公司泵，uvd检测器(190600nm)和n-2000工作站组成。3.3 使用前准备3.3.1 接入稳压电源 将稳压电源的交流电源的输入插口插在固定的插板上。打开稳压电源工作电源开关。3.3.2 更换泵头里清洗瓶中纯化水更换蠕动泵清洗瓶中的纯化水(如果仪器经常使用则建议每周更换两次，如果仪器使用很少则每次使用前必须更换)。3.3.3 清洗手动进样阀的定量环 首先将手动进

3、样阀的扳手反时针扳到头，手动进样阀将处于“load”状态，用平头医用注射器吸入约12ml的50%的甲醇后，从手动进样阀的进样口注入，进行手动进样阀的清洗。3.3.4 流动相的混匀与过滤3.3.4.1 若流动相为非单一溶剂，配好后要用玻璃棒或其它工具搅匀。3.3.4.2 如果使用的流动相非色谱纯的、水相或配好的混合溶液，需要用0.45m的一次性过滤膜过滤(纯有机相或含一定比例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜)。3.3.5 流动相的超声脱气 过滤后的流动相需要超声脱气，一般超声约1020分钟。超声波清洗器的功率不宜太小，且长、宽、高不宜过小。3.4排泵内的气泡3.4.1打开

4、仪器后面板的电源，拧松泵右侧的快速清洗阀(反时针两圈左右)。3.4.2按下泵前面板右下方的“purge”键，仪器将以6.0ml的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止。若想手动停止，则再按“purge”键，将停止清洗。3.4.3将每个需要使用的通道分别排完气泡后，拧紧快速清洗阀(顺时针拧紧，注意不要拧得过紧)。3.5 软件的使用参考相关说明书，关于参数的设置和数据的处理。3.6 分析样品前的准备工作3.6.1系统的准备3.6.1.2分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分。3.6.1.3若流动相为有机相与水相的混合物，则第1步完成后，按照分

5、析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后方可进样。3.6.1.4若流动相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则第1步完成后用95%的纯化水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟，待基线走平后方可进样。3.6.2分析样品的准备3.6.2.1按照样品的前处理要求处理好样品。如甲醇/水溶、超声、萃取、索氏提取、过c18小柱等前处理方法。3.6.2.2注意：大约估计一下待测样品所测成分的浓度或含量，将待测样品与标准品配成浓度大致相当的溶液，以满足线性的要求，以保证所测样品的含量或浓度准确无误。3.6.2.3洗针：将进样阀处的扳手反

6、时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇，从进样口注入，清洗定量环和管路。3.7 进样与数据处理 参考液相使用说明书关于序列进样与数据处理部分。3.8 分析完样品后的维护工作3.8.1 流路的清洗3.8.1.1若流动相为有机相与水相的混合物，则直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，等基线走平且无杂质峰出现后即可停泵关机。3.8.1.2若流动相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则先用95%的纯化水冲洗流路约40分钟后，再用50%甲醇冲洗流路约30分钟后，再用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即可停泵关机。3.8.2洗针 将进样阀处的扳手反时针扳到头后

7、，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇，从进样口注入，清洗定量环和管路。3.8.3关机 系统平衡好后，如果不再使用仪器和电脑。关闭检测器的紫外灯和氘灯，将泵的流速降为0。然后关闭电脑，最后关闭仪器各部件的电源。3.9日常维护保养及注意事项3.9.1泵3.9.1.1放置了一天或以上的水相或含水相的流动相如需再用，需用微孔滤膜重新过滤。3.9.1.2蠕动泵清洗瓶中的95% 的水要求每周至少换二次。若液相使用频率不高，建议每天使用前更换，以免水长细菌损坏泵中各组件。3.9.1.3为了保证系统的安全运行，必须设定高、低压极限(一般安装已设置好)。3.9.1.4流动相禁止使用氯仿、三氯(代)苯、亚甲基

8、氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。若需要使用正相系统分析样品，需要另行安装耐腐蚀的正相密封圈。3.9.1.5拧松快速清洗阀时，不宜拧得过松。一般拧松2圈左右即可。拧得过松流动相容易从清洗阀部位流进泵头中引起报警。3.9.2手动进样阀：手动进样阀每天做完样后，一定要用甲醇冲洗定量环中的杂质。若样品为水系，则先用纯化水冲洗定量环再用甲醇冲洗。3.9.3柱温箱3.9.3.1柱温一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室相对湿度太高，则需采取相应的除湿措施。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱

9、中的传感器。3.9.3.2若实验中使用了缓冲盐或其它电解质，在做完实验后，色谱柱一定要先用95%的纯化水清洗约60分钟，再用50%甲醇冲洗约30分钟，最后再用纯甲醇冲洗约40分钟。3.9.4检测器3.9.4.1检测器的紫外或可见灯在长期打开的情况下，一定要保证有溶液流经检测池。若不需要做样，可设置一个较低的流速(0.05ml/min)或关闭灯的电源。3.9.4.2检测器的灯一般是在流通池有溶液连续流动几分钟后才开的。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。3.9.4.3检测器的氘灯或钨灯不要经常开关，每开关一次灯的寿命约损失30小时。若仪器经常使用，可几天开关灯一次。3.9.5

10、整个系统3.9.5.1缓冲溶液与有机溶剂互相转换前一定要用95%的纯化水清洗泵，防止盐在有机相中结晶损坏泵中各组件。3.9.5.2缓冲溶液的浓度不能高于0.5mol/l，ph范围212，cl-的浓度要小于0.1mol/l(防止腐蚀流路)。3.9.5.3仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免结晶或造成污染。3.9.5.4待测样品或标样在流动相中一定要易溶，否则进样后会结晶造成定量不准确或堵塞色谱柱。3.9.6软件3.9.6.1不要轻易地在windows窗口下删除软件所在根目录或子目录下的文件，以免造成软件无法正常使用。3.9.6.2仪器不使用时，密码狗不要经常拆来拆去，容易导致密码狗损坏。3.9.6.3采集紫外信号时，若分析物质的最大波长已知，则尽量减少采集的通道个数，以免战胜电