沙门菌属和志贺菌属检验

1、沙门菌属和志贺菌属检验步骤和方法1. 形态观察(1) 革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌，散在分布。(2) 观察鞭毛染色标本片：镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛。志贺菌属细菌无鞭毛。2菌落观察(1) 沙门菌属：将本菌接种在 SS MAC平板上经35C孵育1824h。由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。(2) 志贺菌属：将本菌接种在 SS和MAC平板上经35 C孵育1824h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内 志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在SS平板和MAC

2、平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内 志贺菌菌落外均为光滑型菌落。3.生化反应氧化酶试验：方法同大肠埃希菌。沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性。初步试验鉴定：挑取志贺菌和沙门菌的单个菌落分别接种在KIA、MIU和硝酸盐培养基上，经35C孵育1824h,同时做触酶试验其结果见表2 4。表2-4志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应KIAMIU氧化酶触酶硝酸盐还 原斜 面底层产气H2S、动力吲 哚脲酶志贺菌KA-/+IL-+/-+伤寒沙门菌KA-+/-+-+乙型副伤寒 菌KA+-+最终鉴定：须做全面生化反应和血清学试验。4 .血清学试验(1)志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志贺菌属者均需

3、做血清学鉴定。取1环志贺菌四种多价血清于载玻片一端，再取少许待测菌与之混合，同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果：对 照呈均匀混浊，待检菌与志贺菌四种多价血清混合后，数分钟内岀现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。 继之用A、B、C、D群最常见的单价血清凝集定种。结果判断、解释和报告：分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细困 。经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告“分离岀XX志贺菌”，若进一步做多种生化反应及因 子血清分型后，可报告：“分离岀XX志贺菌X型”。(2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进

4、行玻片凝集。首先选用 AF组多价“O诊断血清做玻片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清 凝集试验在510min内不岀现凝集者可确定为阴性。但若生化反应比较典型，应考虑选用Vi凝集试验若凝集，则用无菌生理盐水将菌洗下，制成浓厚的悬液，加热100C、30min，再与AF组多价“ O诊断血清做凝集试验。若与AF组多价“ O血清发生凝集，应再与沙门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验，以确定该菌株属于哪一组。一般先选用本地区检岀率最高菌型的 相应血清做玻片凝集反应。若已确定哪一沙门菌种后，再分别先用H因子血清检查第I相抗原，然后检查第H相抗原，最后确定该菌种属于哪一型沙门菌。结果判断、解释和报告：

5、分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定依据者，可报告“未分离岀沙门 困 。 生化反应符合沙门菌、 玻片凝集试验结果阳性， 可初步报告为：“分离到XX沙门菌”， 或“X 群沙门菌”。5 肥达试验(1)原理：用已知的伤寒沙门菌 O H抗原，甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验，以岀现“ 2+”凝集的最高血清稀释度为效价，测定相应抗体含量，用以辅助诊 断肠热症。(2)试验方法：为单管稀释法。准备 4排小试管，每排7支并标记，另取中号试管 1支，加生理盐水3. 8ml及被检血清O. 2ml，混匀，即为1: 20稀释，总量为4ml。然后取出2ml按每

6、管0.5m1分别放人各 排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀，此种血清即为1： 40稀释，吸取此稀释度血清2ml，按每管0.5m1分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止，第7支小试管只加入0.5ml生理盐水做阴性对照。然后按表2-5操作。表2-5血清学试验(肥达试验)方法试验管(每管0.5ml稀释血清)对照管1： 201： 401： 801： 1601： 3201： 640生理盐 水0抗原0.50.50.50.50.50.50.5H抗原0.50.50.50.50.50.50.5PA抗原0.50.50.50.50.50.50.5

7、PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀 释1： 401： 801： 1601： 3201： 6401： 1280-振荡片刻，置于45C水浴箱中2h或37C水浴箱4h,取出置室温或放冰箱中过夜，次日观察并记录 结果。(3) 结果判断解释和报告：先观察对照管，正确结果应无凝集反应，再分别与对照管比较观察各试管凝集情况。根据液体透明度和凝集块多少，以4+、3+、2+、+、-符号记录4+： 上清液完全澄清，细菌凝集块全部沉于管底。3+：上清液澄清度达75%，大部分细菌凝集成块沉于管底。2+：上清液澄清度达50%，约50 %细菌凝集成块沉于管底。25 %+ ： 上清液体混浊，管底仅有少部分细菌凝集成块，上清液澄清度仅有-:液体均匀昆浊，无凝集块。以呈现2+凝集现象的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。一般认为，伤寒沙门菌0抗体凝集价在1： 80以上，H抗体在1: 160以上，甲、乙、丙型副伤寒沙门菌凝集价在1 : 80以上才有诊断意义。注意事项1 加入诊断菌液时，由对照管开始往前，每管各加O. 5ml。2. 结果观察时不要振荡试管，先观察，必要时再轻摇试管使凝块从管底升起，最后按液体的清浊，凝 块的大小进行记录，对照管（不凝集）与试验管同时对着光线往暗处看液体透明度和凝集块。3. “H凝集呈絮状，以