现代生物相关技术06蛋白质工程

1、6 6 蛋白质工程蛋白质工程 学习目的学习目的 初步了解蛋白质结构，以及蛋白质分子设计初步了解蛋白质结构，以及蛋白质分子设计 和蛋白质修饰和表达等的基本原理。了解如何利和蛋白质修饰和表达等的基本原理。了解如何利 用蛋白质工程技术和其他相关技术获得更加符合用蛋白质工程技术和其他相关技术获得更加符合 人类需求且比天然蛋白质更优良的蛋白质。人类需求且比天然蛋白质更优良的蛋白质。 6 6 蛋白质工程蛋白质工程 6.1 6.1 蛋白质结构基础蛋白质结构基础 6.1.1 6.1.1 蛋白质结构的基本构件蛋白质结构的基本构件 蛋白质、核酸蛋白质、核酸 、多糖和脂类等生物大分子的结、多糖和脂类等生物大分子的结

2、 构与功能。构与功能。 蛋白 质工 程 6.1.1 6.1.1 蛋白质结构的基本构建蛋白质结构的基本构建 6.1.1.16.1.1.1蛋白质的化学组成蛋白质的化学组成 基本元素基本元素: 有机元素有机元素: 碳、氢、氧和氮碳、氢、氧和氮 无机元素无机元素: 碱金属、碱土金属碱金属、碱土金属 和重金属和重金属 蛋白质蛋白质: 、胨、肽、胨、肽 氨基酸分类氨基酸分类: : 非极性非极性R R基氨基酸基氨基酸、不带电荷的不带电荷的 极性极性R R基氨基酸基氨基酸 、带正电荷的带正电荷的R R 基氨基酸基氨基酸 、带负电荷的带负电荷的R R基酸性氨基酸性氨 基酸基酸 蛋白质工程 6.1.1 6.1.1

3、 蛋白质结构的基本构建蛋白质结构的基本构建 6.1.1.2 氨基酸的物理性质氨基酸的物理性质 无色结晶无色结晶 特殊晶型特殊晶型 溶点极高溶点极高 两性离子形式存在两性离子形式存在 氨基和羧基氨基和羧基 接受质子和释放质子接受质子和释放质子 两性电解质两性电解质 蛋白质工程 6.1.1.3 6.1.1.3 蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构 各种氨基酸的简写符号各种氨基酸的简写符号 名称 三字母符号 单字母符号 名称 三字母符号 单字母符号 丙氨酸 Ala A 异亮氨酸 Ile I 精氨酸 Arg R 亮氨酸 Leu L 天冬酰胺 Asn N 赖氨酸 Lys K 天冬氨酸 Asp D 蛋氨酸 M

4、et M Asn或Asp Asx B 苯丙氨酸 Phe F 半胱氨酸 Cys C 脯氨酸 Pro P 谷氨酰胺 Gln Q 丝氨酸 Ser S 谷氨酸 Glu E 苏氨酸 Thr T Gln或Glu Glx Z 色氨酸 Trp W 甘氨酸 Gly G 酪氨酸 Tyr Y 组氨酸 His H 缬氨酸 Val V 6.1.1 6.1.1 蛋白质结构的基本构建蛋白质结构的基本构建 蛋白 质工 程 6.1.1.3 6.1.1.3 蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构 多肽链多肽链 :由由许多氨基酸按一定的排列顺序通许多氨基酸按一定的排列顺序通 过肽键相连而成。过肽键相连而成。 酰胺键酰胺键 : :一个氨基

5、酸的氨基与另一氨基酸的一个氨基酸的氨基与另一氨基酸的 羧基缩合失去一分子水。羧基缩合失去一分子水。 肽键结构肽键结构 蛋白质工程 多肽主链的空间限制 (一)酰胺平面与-碳原子的二面角(和) (二)可允许的和值：拉氏构象图 二面角二面角 (和和)所规定的构象能否所规定的构象能否 存在取决于两个相邻肽单位中非共存在取决于两个相邻肽单位中非共 价键合原子之间的接近有无阻碍。价键合原子之间的接近有无阻碍。 6.1.1.3 6.1.1.3 蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构 X Y Z 人人 Thr Thr Ile 猪猪 Ala Thr Ile 牛牛 Ala Ala Val 图图6-2 猪、牛和人的胰岛素

6、的一级结构猪、牛和人的胰岛素的一级结构 蛋白质工程 6.1 6.1 蛋白质结构基础蛋白质结构基础 6.1.2 6.1.2 蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构 u分子结构分子结构: : 一级结构、二级结构、三级结构一级结构、二级结构、三级结构 和四级结构。和四级结构。 u分子构象分子构象: : 空间结构、高级结构、立体结构、空间结构、高级结构、立体结构、 三维结构。三维结构。 u二级结构二级结构 : :指多肽链主链骨架中的若干肽段，各指多肽链主链骨架中的若干肽段，各 自沿着某个轴盘旋或折叠，并以氢键自沿着某个轴盘旋或折叠，并以氢键 维系，从而形成有规则的构象。维系，从而形成有规则的构象。 螺旋、螺

7、旋、折叠和折叠和转角转角 蛋白 质工 程 6.1.2 蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构 螺旋结构螺旋结构 折叠结构折叠结构 蛋白质工程 6.1.2 6.1.2 蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构 u三级结构三级结构: :在三维空间中沿着多方向进行卷在三维空间中沿着多方向进行卷 曲、折叠、盘绕而成的近似球形的曲、折叠、盘绕而成的近似球形的 结构。结构。 u蛋白质构象蛋白质构象作用力作用力: : R R基之间的氢键基之间的氢键 非极性非极性R R基之间的疏水基相互作用基之间的疏水基相互作用 螺旋和螺旋和折叠中的肽链内或肽链间的氢键折叠中的肽链内或肽链间的氢键 带正负电荷的带正负电荷的R R基之间的离

8、子键基之间的离子键 蛋白质工程 稳定蛋白质三维结构的作用 力 a 离子键离子键 b 氢键氢键 c 疏水键疏水键 d 范德华引力范德华引力 6.1.2 蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构 u亚基亚基 ( (三级结构三级结构) ) 一条多肽链组成。一条多肽链组成。 数条多肽链组成，这些多肽链通常以二硫键数条多肽链组成，这些多肽链通常以二硫键 相连接成为亚基。相连接成为亚基。 u四级结构四级结构 亚基聚合而成亚基聚合而成 亚基之间亚基之间非共价键结合非共价键结合 均一四级结构均一四级结构 非均一四级结构非均一四级结构 蛋白质工程 6.1.2 蛋白质的高级结构蛋白质的高级结构 u维持维持四级结构四级结构

9、的主要力的主要力: : 疏水键、氢键、离子键和范德华引力疏水键、氢键、离子键和范德华引力 u常见的聚合体常见的聚合体: 二聚体、三聚体、四聚体、五聚体，最多二聚体、三聚体、四聚体、五聚体，最多 可聚合成六十聚体可聚合成六十聚体 蛋白质工程 6.1 蛋白质结构基础蛋白质结构基础 6.1.3 6.1.3 蛋白质分子之间的相互作用蛋白质分子之间的相互作用 蛋白 质工 程 6.1.3 蛋白质分子之间的相互作用蛋白质分子之间的相互作用 钼铁蛋白和铁蛋白相互作用示意图(引 自Schlessman et al.) 铁蛋 白 钼铁 蛋白 蛋白 质工 程 6.1 蛋白质结构基础蛋白质结构基础 6.1.4 6.1

10、.4 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 蛋白质必须具备特定的结构，才能表现特定的蛋白质必须具备特定的结构，才能表现特定的 功能，在蛋白质肽链中有一些基团对特定功能功能，在蛋白质肽链中有一些基团对特定功能 而言是必需基团，另一些是非必需基团。而言是必需基团，另一些是非必需基团。 在体内，蛋白质分子是如何利用它的特定结构在体内，蛋白质分子是如何利用它的特定结构 执行特定的生物功能的。执行特定的生物功能的。 蛋白质工程 6.1.4 6.1.4 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 u同源蛋白质同源蛋白质 指在不同的有机体中实现同一功能的蛋白质，指在不同的有机体中实现同一功能的蛋白

11、质， 但这些同源蛋白质中的氨基酸序列存在着种属的差但这些同源蛋白质中的氨基酸序列存在着种属的差 异性。异性。 u结构域结构域 多肽链之间以共价键方式连接多肽链之间以共价键方式连接 功能区域功能区域 蛋白质工程 6.1.4 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 铁蛋白的分子结构是由铁核和蛋白质壳组成的。铁蛋白的分子结构是由铁核和蛋白质壳组成的。 铁蛋白的隧道可分为电子隧道和物质交换隧道，铁蛋白的隧道可分为电子隧道和物质交换隧道， 前者起着传递电子的作用，后者起着物质交换的通前者起着传递电子的作用，后者起着物质交换的通 道作用。道作用。 铁蛋白蛋白质壳通过柔性调节产生电子传递现铁蛋白蛋白质

12、壳通过柔性调节产生电子传递现 象。象。 蛋白质工程 6.1.4 6.1.4 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 铁蛋白分子结构图 A：蛋白质壳； B： 铁核； C：三相物质交换隧道 A 蛋白质工程 6.1.4蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 protease inhibitor-proteasecomplex inhibitor 丝氨酸蛋白酶抑制剂丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)抑制蛋抑制蛋 白酶活性的途径与机理白酶活性的途径与机理 蛋白质工程 6.1.4 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 模拟核小体分子 蛋白质工程 6 6 蛋白质工程蛋白质工程 6.2

13、6.2 蛋白质工程的研究方法蛋白质工程的研究方法 6.2.1 6.2.1 蛋白质工程的研究策略蛋白质工程的研究策略 蛋白质工程的基本途径：蛋白质工程的基本途径： 从预期功能出发，设计期望的结构，合成目从预期功能出发，设计期望的结构，合成目 的基因且有效克隆表达或通过诱变、定向修饰和的基因且有效克隆表达或通过诱变、定向修饰和 改造等一系列工序，合成新型优良蛋白质。改造等一系列工序，合成新型优良蛋白质。 蛋白质工程 基因工程在原则上只能生产自然界已存基因工程在原则上只能生产自然界已存 在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在 长期进化过程中形成的，它们的结构和长期进化过

14、程中形成的，它们的结构和 功能符合特定物种生存的需要，却不一功能符合特定物种生存的需要，却不一 定完全符合人类生产和生活的需要。定完全符合人类生产和生活的需要。 一、蛋白质工程崛起的缘由一、蛋白质工程崛起的缘由 6.2.1蛋白质工程的研究策略蛋白质工程的研究策略 蛋白质工程的主要研究手段蛋白质工程的主要研究手段: : 利用所谓的反向生物学技术，其基本思路利用所谓的反向生物学技术，其基本思路 是按期望的结构寻找最适合的氨基酸序列，通是按期望的结构寻找最适合的氨基酸序列，通 过计算机设计，进而模拟特定的氨基酸序列在过计算机设计，进而模拟特定的氨基酸序列在 细胞内或在体内环境中进行多肽折叠而成三维细

15、胞内或在体内环境中进行多肽折叠而成三维 结构的全过程，并预测蛋白质的空间结构和表结构的全过程，并预测蛋白质的空间结构和表 达出生物学功能的可能及其高低程度。达出生物学功能的可能及其高低程度。 蛋白质工程 6.2.1 6.2.1 蛋白质工程的研究策略蛋白质工程的研究策略 蛋白质工程 三、蛋白质工程的基本原理三、蛋白质工程的基本原理 基因基因 DNA 氨基酸序列氨基酸序列 多肽链多肽链 蛋白质蛋白质 三维结构三维结构 预期功能预期功能 生物功能生物功能 mRNA 转录转录翻译翻译 折叠折叠 DNA合成合成分子设计分子设计 实例实例1 1：干扰素的保存：干扰素的保存 天然的干扰素在体外保存相当困难。

16、天然的干扰素在体外保存相当困难。 如果将其分子上的一个如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸半胱氨酸变成丝氨酸，那么，那么 在在7070的条件下，可以保存半年的条件下，可以保存半年。 蛋白质工程实例：蛋白质工程实例： 实例实例2 2：玉米中赖氨酸的含量比较低：玉米中赖氨酸的含量比较低 如果对赖氨酸合成过程中的两个关键酶进如果对赖氨酸合成过程中的两个关键酶进 行改造行改造, ,可以使玉米叶片和种子中的游离赖可以使玉米叶片和种子中的游离赖 氨酸分别提高氨酸分别提高5 5倍和倍和2 2倍。倍。 原因：赖氨酸合成过程中两个关键酶原因：赖氨酸合成过程中两个关键酶 天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶天冬氨

17、酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的的 活性，受细胞内赖氨酸浓度的影响。当赖活性，受细胞内赖氨酸浓度的影响。当赖 氨酸浓度达到一定量时，就会抑制这两种氨酸浓度达到一定量时，就会抑制这两种 酶的活性。酶的活性。 实例实例3:3:工业用酶工业用酶 许多工业用酶是在改变天然酶的特性后，许多工业用酶是在改变天然酶的特性后， 才使之适应生产和使用需要的。才使之适应生产和使用需要的。 在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以应用在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以应用 于工业生产，于工业生产，绝大多数酶都不能应用于工业生产绝大多数酶都不能应用于工业生产，这，这 些酶虽然在自然状态下有活性，但在工业生产中没有些酶

18、虽然在自然状态下有活性，但在工业生产中没有 活性或活性很低。这是因为工业生产中每一步的反应活性或活性很低。这是因为工业生产中每一步的反应 体系中常常会有体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较 高，在这种条件下，大多数酶会很快变性失活高，在这种条件下，大多数酶会很快变性失活。提高。提高 蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常重要的课题。蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常重要的课题。 一般来说，一般来说，提高蛋白质的稳定性提高蛋白质的稳定性包括：延长酶的半衰包括：延长酶的半衰 期，提高酶的热稳定性，延长药用蛋白的保存期，抵期，提高酶的热稳定性，延长药用蛋白的保存

19、期，抵 御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧失等。御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧失等。 3 3、蛋白质工程产物：、蛋白质工程产物： 是自然界原本是自然界原本不存在不存在的新的蛋白质。的新的蛋白质。 6.2 6.2 蛋白质工程的研究方法蛋白质工程的研究方法 6.2.2 蛋白质的全新设计蛋白质的全新设计 6.2.2.1 设计目标的选择设计目标的选择 蛋白质全新设计蛋白质全新设计 功能设计、结构设计。功能设计、结构设计。 研究重点和难点研究重点和难点 从结构设计出发，从蛋白质的从结构设计出发，从蛋白质的二级结构二级结构开始，开始， 以摸索蛋白质结构的稳定性。以摸索蛋白质结构的稳定性。 蛋白质工程 6.

20、2.2 6.2.2 蛋白质的全新设计蛋白质的全新设计 6.2.2.2 蛋白质设计技术与方法蛋白质设计技术与方法 常用的蛋白质设计思路常用的蛋白质设计思路 是否存在蛋白质多聚体状态；二级结构与预是否存在蛋白质多聚体状态；二级结构与预 期目标是否吻合。期目标是否吻合。 是否具有预定的三级结构。圆二色谱和核磁是否具有预定的三级结构。圆二色谱和核磁 共振技术可用于研究蛋白质。共振技术可用于研究蛋白质。 是否以单分子或多聚体形式存在。三级结构是否以单分子或多聚体形式存在。三级结构 测定目前主要依靠荧光和核磁共振技术。体积排测定目前主要依靠荧光和核磁共振技术。体积排 阻色谱法也可以用于判断分子体积大小、聚

21、合体阻色谱法也可以用于判断分子体积大小、聚合体 数目和蛋白质结构是处于无规则状态或三级结构数目和蛋白质结构是处于无规则状态或三级结构 等生化参数。等生化参数。 蛋白质工程 6.2.2 6.2.2 蛋白质的全新设计蛋白质的全新设计 天然的锌指多肽 FSD-1多肽(从头设计) 蛋白质工程 6.2 6.2 蛋白质工程的研究方法蛋白质工程的研究方法 6.2.3 改变现有蛋白质的结构改变现有蛋白质的结构 分离纯化目标蛋白质。分离纯化目标蛋白质。 分析目标蛋白质的一级结构；分析目标蛋白质的三维分析目标蛋白质的一级结构；分析目标蛋白质的三维 结构以及结构与功能的关系。结构以及结构与功能的关系。 根据蛋白质的

22、一级结构设计引物，克隆目的基因。根据蛋白质的一级结构设计引物，克隆目的基因。 根据蛋白质的三维结构和结构与功能的关系以及蛋白根据蛋白质的三维结构和结构与功能的关系以及蛋白 质改造的目的设计改造方案。质改造的目的设计改造方案。 对目的基因进行人工定点突变。对目的基因进行人工定点突变。 改造后的基因在宿主细胞中表达。改造后的基因在宿主细胞中表达。 分离纯化表达的蛋白质并分析其功能，评价分离纯化表达的蛋白质并分析其功能，评价是否达到是否达到 设计目的。设计目的。 蛋白质工程 6.2.3 6.2.3 改变现有蛋白质的结构改变现有蛋白质的结构 改变蛋白质结构的改变蛋白质结构的核心技术核心技术 基因人工定

23、点突变技术基因人工定点突变技术 M13M13载体法载体法 PCRPCR扩增法扩增法 蛋白质工程 Consequences of point mutations within a coding sequence (gene) for the protein Silent mutations: - change in nucleotide sequence with no consequences for protein sequence - Change of amino acid - truncation of protein - change of c-terminal part of pr

24、otein - change of c-terminal part of protein 6.2.3 6.2.3 改变现有蛋白质的结构改变现有蛋白质的结构 6.2.3.1 M136.2.3.1 M13载体法载体法 该法的原理是利用人工合成带突变位点的寡该法的原理是利用人工合成带突变位点的寡 聚核苷酸作为引物，利用聚核苷酸作为引物，利用M13M13噬菌体载体系统合成噬菌体载体系统合成 突变基因。突变基因。 蛋白质工程 6.2.3.1 M136.2.3.1 M13载体法载体法 M13载体法基因人工定点突变示 意图（引自吴乃虎，1998） 蛋白质工程 6.2.3.26.2.3.2扩增法扩增法 该法的

25、原理也是利用人工合成带突变位点该法的原理也是利用人工合成带突变位点 的诱变引物，通过扩增而获得定点突变的诱变引物，通过扩增而获得定点突变 的基因。的基因。PCRPCR定点诱变法可分为重组定点诱变法可分为重组PCRPCR定点诱定点诱 变法和大引物诱变法两种。变法和大引物诱变法两种。 蛋白质工程 6.2.3 6.2.3 改变蛋白质的现有结构改变蛋白质的现有结构 重组PCR定点突变法示 意图（引自吴乃虎，1998） 蛋白质工程 6.2.3.2 PCR6.2.3.2 PCR扩增法扩增法 大引物诱变法示意图（引自吴乃虎，1998） 蛋白质工程 6.2.3.2 PCR6.2.3.2 PCR扩增法扩增法 P

26、CRPCR技术适合进行基因的定点诱变技术适合进行基因的定点诱变 5 5 3 3 5 5 3 3 a b c d 5 3 3 5 变性、退火 5 5 3 3 加klenow DNA聚合酶 5 3 53 加入引物a、d 5 3 5 3 3 5 3 6 蛋白质工程蛋白质工程 6.3蛋白质工程的应用实例蛋白质工程的应用实例 6.3.1胰蛋白酶胰蛋白酶 223个氨基酸残基和以异亮氨酸为个氨基酸残基和以异亮氨酸为N端的单肽端的单肽 链。链。 Arg117位自溶点的缺失突变，得到缺失突变位自溶点的缺失突变，得到缺失突变 体，其结果表明该突变体的稳定性明显提高。体，其结果表明该突变体的稳定性明显提高。 将酶分

27、子表面的正电荷改变成负电荷，以提高将酶分子表面的正电荷改变成负电荷，以提高 胰蛋白酶催化活性中心胰蛋白酶催化活性中心His57的的pKa值，在值，在pH较较 高的条件下显示出对精氨酸具有更高的专一性。高的条件下显示出对精氨酸具有更高的专一性。 蛋白质工程 6.3 蛋白质工程的应用实例蛋白质工程的应用实例 6.3.2 6.3.2 人白细胞介素人白细胞介素-2-2 由由133133个氨基酸残基组成，共有三个半胱氨酸。个氨基酸残基组成，共有三个半胱氨酸。 二硫键的错误配对将降低其生物学活性并对人二硫键的错误配对将降低其生物学活性并对人 具有抗原性。具有抗原性。 用基因定点突变方法可将用基因定点突变方

28、法可将IL-2IL-2的的125125位位CysCys改为改为 丝氨酸（丝氨酸（SerSer）或丙氨酸（）或丙氨酸（AlaAla），避免错误配对的），避免错误配对的 产生，而且其热稳定性等方面也有较明显的改善。产生，而且其热稳定性等方面也有较明显的改善。 蛋白质工程 Stability and Activity of Various Modified Versions of tPA Modifying Metal Requirements Serine protease for laundry detergent Require calcium Calcium induces conforma

29、tion change necessary for activity Modify amino acid sequence to achieve conformation and stability without calcium 蛋白质高级结构的预测 Homology Modeling p 1. 搜索已知三级结构的同源蛋白质序列搜索已知三级结构的同源蛋白质序列 (模板模板) PSI-BLAST multiple sequence alignment (MSA) p 2. 选取与给定序列相似性最高的结构作为模板选取与给定序列相似性最高的结构作为模板 p 3. 将氨基酸残基替换到结构模板中对应的

30、位置将氨基酸残基替换到结构模板中对应的位置 上，降低自由能上，降低自由能 p 4. 准确性好准确性好 序列相似性高序列相似性高 模型可靠性高模型可靠性高 30% sequence identity 5. 常用工具：常用工具：MODELLER，Swiss-model 截至截至2008年年6月，与迅速增长的庞大基因组核酸数据相反，已知三级结构的蛋白数量还月，与迅速增长的庞大基因组核酸数据相反，已知三级结构的蛋白数量还 不到不到6万个。（来自蛋白结构数据万个。（来自蛋白结构数据PDB的统计）的统计） 从待测蛋白质序列出发，搜索蛋白质结构数据库（如从待测蛋白质序列出发，搜索蛋白质结构数据库（如 PDB

31、,SWISS-PROT等），得到许多相似序列（同源序列），选等），得到许多相似序列（同源序列），选 定其中一个（或几个）作为待测蛋白质序列的定其中一个（或几个）作为待测蛋白质序列的模板模板； 待测蛋白质序列与选定的模板进行再次待测蛋白质序列与选定的模板进行再次比对比对，插入各种可能的空，插入各种可能的空 位使两者的保守位置尽量对齐；位使两者的保守位置尽量对齐； 建模建模：调整待测蛋白序列中主链各个原子的位置，产生与模板相：调整待测蛋白序列中主链各个原子的位置，产生与模板相 同或相似的空间结构，待测蛋白质空间结构模型；同或相似的空间结构，待测蛋白质空间结构模型； 利用能量最小化原理，使待测蛋白质

32、侧链基团处于利用能量最小化原理，使待测蛋白质侧链基团处于能量最小能量最小的位的位 置。置。 同源建模法预测蛋白质三级结构一般由四步完成：同源建模法预测蛋白质三级结构一般由四步完成： SWISS-MODEL 蛋白质结构预测蛋白质结构预测 SWISS-MODEL利用同源建模的方法实现对一段未知序列的三级结构的预测。该服务创利用同源建模的方法实现对一段未知序列的三级结构的预测。该服务创 建于建于1993年，开创了自动建模的先河，并且它是讫今为止应用最广泛的免费服务之一。年，开创了自动建模的先河，并且它是讫今为止应用最广泛的免费服务之一。 First Approach mode(简捷模式）简捷模式） 这种模式提供一个简捷的用户介面：用户只需要输入一条氨基酸序列，服务器就会自动这种模式提供一个简捷的用户介面：用户只需要输入一条氨基酸序列，服务器就会自动 选择合适的模板。如果一条模板与提交的目标