实验五、叶绿素含量的测定

1、深圳 大学实 验报告课程名称：植物学生理实验实验项目名称：五、叶绿素含量的测疋学院：生命科学专业：生物科学指导教师：邹永东报告人：张嘉慧学号：2010300077班级：3实验时间：2012年4月12日实验报告提交时间：2011年4月19日教务处制一、实验目的：1熟悉使用分光光度计。2、学会如何测定叶绿素的含量。二、实验原理：叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或 二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长 的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度（也称为光密度）,再根据叶绿素在该波的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据

2、色素分子在长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。根据比尔定律，利用叶绿素a和b吸收光谱该波长下的消光系数，计算出浓 度叶绿素a的80%丙酮提取液的最大吸收峰为663nm,叶绿素b的吸收峰为 645nm.这样,叶绿素a和b在两种波长下浓度与光密度的关系可用下式表示：D663= 82.04 Ca + 9.27 CbD645= 16.75 Ca + 45.60 C（单位:毫克 /升）解得：Ca = 12.7 D663 - 2.69 D645Cb = 22.9 D645 - 4.68 D663Ct = Ca + Cb = 20.2 D645 + 8.02 D663Ck =4.7D440 -0.27 C a

3、+b式中：Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度，Ct为叶绿素总浓度，Ck为类胡萝卜素浓度.式中单位:毫克/升三、实验设备与材料:天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、表面皿、剪刀、90-95%乙醇、漏斗、滴管新鲜菠菜叶、层析液配方：石油醚：乙醚：4： 1（V/V）四、实验步骤：1、叶绿体色素的提取及叶绿体色素的含量测定：取菠菜（或其他植物）叶子2g,剪碎，放在研钵中，加石英砂和碳酸钙少 许，80%丙酮约2-3ml，研磨成匀浆，再加80%丙酮定容至25ml，用漏斗过 滤，即为色素提取液。叶片洗净、吸干、去大叶脉称1g叶用丙酮研磨匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液）滤液用80%丙酮定容至25mL适

4、当稀释后测 A645 A663、A652、A4402、叶绿体色素的分离：（1）点样。取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液。点样后 晾干，再重复操作数次。（2）分离。在烧杯中加入推动剂，然后将滤纸插入试管中，使尖端浸入溶剂内（点样原点要高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁）。（3）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。五、实验现象：测得：D44o=1.85 D645=0.301D663=0.688六、分析与讨论：Ca=12.7D663-2.69D645=12.7*0.688-2.69*0.301=8.7376-0.80969=7.92791Cb=22.9D64&4

5、.67D663=22.9*0.301-4.68*0.688=6.8929-3.21984=3.67306Ct =Ca+Cb=20.2D645+8.02D663=20.2*0.301+8.02*0.688=6.0802+5.51776=11 .59796Ck = 4.7D440 -.27 C a+b=4.7*1.85-0.27*11.59796=8.695-3.131=5.564CT+Ck=11.59796+5.564=17.162色素在叶片中的含量（）=色素浓度（mg /I ）提取液总体积（L）稀释倍数重量（g） x 1000=17.162*0.025*3/（2*1000）=0.064%七、实

6、验结论：1、叶绿素a的浓度为7.928 mg/l。2、叶绿素b的浓度为3.673 mg/lo3、叶绿素总量为11.598 mg/lo4、类胡萝卜素的浓度为5.564 mg/lo5、色素在叶片中的含量为 0.064%。&色素带上蓝绿色为叶绿素 a,黄绿色为叶绿素b,黄色为叶黄素，橙黄色 为胡萝卜素。八、思考题：1、为什么植物在不同生长环境下其 Chi含量有差异？ Chia /Chib有何适应 意义？答：不同的生境下营养元素是有差异的，会影响叶绿素的含量。Chi含量受自然环境的影响，Gs、Ci、Ls上升或轻微变化，Chia、Chib含量均明显下降， 表明叶绿素含量下降是其净光合速率下降的原因之一，

7、同时可能不存在气孔 限制。让植物更适应环境而生长，例如适应干旱沙漠生活条件。那是心与心的交汇， 是相视的莞尔一笑，是一杯饮了半盏的酒，沉香在喉，甜润在心。红尘中，我们会相遇一些人，一些事，跌跌撞撞里，逐渐懂得了这世界，懂得如何经营自己的内心，使它柔韧，更适应这风雨征途，而不会在过往的错失里纠结懊悔一生。时光若水，趟过岁月的河，那些旧日情怀，或温暖或痛楚，总会在心中烙下深深浅浅的痕。生命是一座时光驿站，人们在那里来来去去。一些人若长亭古道边的萋萋芳草，沦为泛泛之交;一些人却像深山断崖边的幽兰，只一株，便会馨香满谷。人生，唯有品格心性相似的人，才可以在锦瑟华年里相遇相知，互为欣赏，互为懂得，并沉淀下来，做一生的朋友。试问，你的生命里，有无来过这样一个人呢？张爱玲说 因为懂得，所以慈悲”.于千万人群中，遇见你