总多酚的测定

1、、实验原理 多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。多酚类物 质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。由以 上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液）， 不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有 : 酒石酸亚铁比色法、FD法、FC法、普鲁士蓝法等。其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应 生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与

2、溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定， 比如测定茶叶中茶多酚含 量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时， 则以没食子酸作标准物较合适。、实验材料、试剂与仪器 材料：茶叶； 仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等； 试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取I.OOg硫酸亚铁（FeS04 7H2O和5.00g酒石酸钾 钠（C4H4O6NaK 4H20混合后加蒸馏水溶解定容到 1000mL（2） pH7.5 磷酸盐缓冲液：称取 60.20g Na2HPO412H2O和 5.00g NaH2PO412H2O 混合后加蒸馏水溶解定

3、容到 1000ml。三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用标准曲线的制作参照GB-8313-87茶一茶多酚测定方法。为简化操作，可用 在一定操作条件下吸光度值为 1.00 时，供试液中茶多酚的浓度为 7.826 mg/mL” 这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。1.福林试液的配制：取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85%磷酸5ml与盐酸10ml,置200ml烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、 水 5ml 与溴滴定液 1 滴煮沸约 15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成 100ml。 滤过, 滤液作为贮备液。置棕色瓶中 ,

4、 于冰箱中保存。临用前，取贮备液 2.5ml ，加水稀释至10ml,摇匀，即得。用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL分别移取3.0mL到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福 林薛卡多(Folin-Ciocalteu )试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。每个 浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。取样品溶液1mL按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样 品中的多酚含量。反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。2.酒石酸亚铁比色法。其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品 0.2500g,加水溶解定容至250mL混匀,即 为每毫升含1mg提取纯品的标准溶液(mg/mL)。茶多酚的含量。茶多酚标准曲线的绘制。分别吸取茶多酚标准溶液 1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL于 4个50mL容量瓶中,各加水至10mL再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7. 5 的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用1 c