病理制片技术

1、病理制片技术一、方法石蜡切片，苏木精伊红染色二、试剂配制苏木精和伊红染液： 配制方法很多， 现介绍一种既省染料又比较耐用， 而且染色效果较 稳定的配制方法Gili 苏木精配方：甲液：苏木精 2g碘酸钠 0.2g乙二醇 250ml乙液：硫酸铝铵 17.6g蒸馏水 730ml将甲、乙液混合后加冰乙酸20ml，即可使用。1%酸性伊红染液：称取伊红20g，加入蒸馏水500ml，溶解后加HCL110ml，用蒸馏水反复洗 3次，过滤，渣烤干，溶于 95%酒精 1000ml 备用。可长期保存，用时取备用液和 95%酒精等量混合。三、操作步骤1 、 固定 手术活检下的组织应立即放入固定液中固定。常用的固定液为

2、10%甲醛。配方如下：40%甲醛 1份自来水 9份2、脱水将固定好的组织， 根据检验要求， 切成适宜制作切片的小组织块， 经流水冲洗后放入各 级酒精脱水，一般从 70%酒精开始t 80%酒精t 95% I酒精t 95%酒精 m 100% I酒精宀 100% n酒精。时间各为 1-3小时。3、透明组织经脱水后，入二甲苯I、二甲苯n各3060分钟透明。4、浸蜡组织从二甲苯中出来后，入石蜡 2次或3次，以熔点较低的作为石蜡I,然后再换熔 点较高的。整个浸蜡过程约 3-4 小时。5、包埋将已熔化的石蜡倾入金属的组织包埋框内, 随机将浸蜡组织块用加温的镊子送置于包埋 框内, 将切面朝下, 放平放正。 等

3、石蜡凝固, 用刀片把已经包好组织的石蜡块的周边修切完 整。组织外围的石蜡不宜留的过多。6、切片 将包埋好的石蜡组织块的底部加热固定在金属的或木制的支持器上,然后放入冰箱冷冻室内稍冻片刻, 增强硬度。 再将组织块固定在切片机上进行修整, 真正组织全部暴露在 切面时,即可进行切片。切片时应根据需要调整切片的厚度。7、贴附将切下的切片先放入 50%左右的酒精中，再用玻片将其捞入 45 C左右的温水中，使 切片伸展于水面上, 如仍有细小的皱褶, 可用镊子细心地将皱褶拨开。 选择切面最完整、 最 薄的、没有皱褶的、没有破碎的部分贴附于载玻片略微偏右的中间。切面贴附后需在60C左右的温箱内放置 30 分钟

4、以上或放于温度较高一些的烘片器中 10分钟左右。8、染色苏木精伊红染色法（ H.E 染色法） 料脱蜡：将切片入 二甲苯I 二甲苯n 无水酒精12 分钟 12 分钟 1 分钟1 分钟95%酒精70%酒精1 分钟自来水洗片刻蒸馏水洗片刻 染色：苏木精染液浸染215 分钟自来水洗片刻1%盐酸分化35 分钟自来水洗片刻碳酸锂饱和水溶液 1分钟自来水洗 10分钟至数小时1%酸性伊红染液浸染 13分钟 脱水、透明、封固：70%酒精 1分钟95%酒精I 12分钟95%酒精n无水酒精I无水酒精n12 分钟12 分钟12 分钟电吹风吹干切片 12分钟中性树胶封片粘帖标签 结果：胞核呈蓝色，胞浆淡红色，结缔组织鲜

5、红色，肌纤维深红色，红细胞橙 红色。三、注意事项1 、 组织必须及时固定，固定液一般不应少于组织块总体积的4 倍。2、组织脱水、透明过程既要充分，又要防止过度，即脱水剂的纯度一定要保证不能 含水分，这样组织中的水分才能脱干净。同时又要防止组织在脱水剂、透明剂中 放置时间过长，造成组织过度硬化收缩。脱水透明不够或过度，都将造成切片困 难。3、浸蜡时间的长短和浸蜡温度的高低，都直接影响切片的质量。4、组织包埋时要注意包埋蜡和组织块本身的温度。温度不一，会造成组织与周围石 蜡脱裂的现象。所用的镊子等应避免烧得过烫，以免灼伤组织，造成不良后果。5、切片时注意事项 切片刀要锋利，要避开缺口。切片刀放置的角度大小要合适，切片机各部位的零 件螺丝要旋紧。 切片时用力要均匀一致，不宜过重过猛，以免造成切片厚薄不均。应将组织较硬 脆难切的部分放在上端，如皮肤组织，应将表皮放在上端，胃、肠组织应将浆膜 放在上端，以减少或防止出现断裂破碎现象。6、染色：首先应注意染液的配制一定要准确，这是染色成败的关键。染色过程中各 个步骤的时间仅供参考，必须视具体情况即气候的冷暖、染液的新旧和组织的差别决定。在 H.E 染色中，盐酸分化是一个关键步骤，难以用一个准确的时间来说