食用菌制种工艺流程工艺

1、食用菌制种工艺流程 v随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需要量随之增 加，而现有菌种生产单位明显偏少，许多菇农不 得不向外引种。长途购运菌种不仅花费大，成本 高而且菌种因破瓶而易引起杂菌污染，从而严重 影响栽培食用菌的经济效益。菇农若能掌握菌种 生产程序和制种技术，自行制种，逐步发展成制 种专业户，也是一项很好的致富门路。 菌种生产 程序，通常分为母种、原种和栽培种，也就是通 常所说的一级、二级、三级菌种。其中母种的分 离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的 制作则比较简单。 一、母种的分离选育 v母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育 种和原生质融合等手段获得。作为一般制种 专业户，可以采用

2、人工选择方式分离培育母 种。 1、采集种源 v从野生或人工栽培群体中，选择有代表性的 优良菇体作为种源。种菇的标准是：八成熟， 朵形圆正、肉质肥厚，无病虫害。采集1-2 朵符合上述标准的种菇编上号码，作为分离 母种的材料。从栽培室采集的应标有原菌株 代号。 2、培养基配制琼脂培养基（ PDA培 养基） v马铃薯200-250克，琼脂15-20克，葡萄糖20-25克，清水 1000毫升。也可以加硫酸镁1-15克，维生素B1微量，磷 酸二氢钾2-3克。先将马铃薯洗净去皮，挖去芽眼，切成薄 片，置于铝锅内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱布过滤， 取汁。然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让琼脂充分溶

3、化；再将葡萄糖等加入，稍煮几分钟后，同样用4层纱布过 滤，取其汁液。将汁液趁热装入玻璃试管内。装至管长的1 5，管口用棉花塞紧，或将汁液装入玻璃三角瓶内，装量 20毫升。然后置于高压锅内，在98-108千帕厘米的压力 下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌 面上，冷却后即成为固体斜面培养基。 3、母种分离方法 v(1)孢子弹射法。将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼脂 培养基的三角瓶内，让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝。也 可以剪取一小块菇体，贴附在试管斜面培养基表面，让孢子散落在培养 基上萌发菌丝，即能获得母种。 v(2)组织分离法。将消毒过的种菇，在接种箱

4、内用手从菇柄处对半掰开， 或用刀片切开，使菇体形成对开。在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，用接 种刀切取一小块菇体，然后纵切成5毫米x10毫米的小薄片，用接种针挑 取一小块，接入斜面培养基的中央，待其萌发菌丝，即可得到母种； v(3)基内分离法。选择已长菇的木段，削去树皮及表层木质部，用75的 酒精消毒后，锯成1厘米厚的薄片，放入01的升汞水中消毒1-2分钟， 再用灭菌水洗去残液。然后再将小薄片劈成05-1厘米宽的小条，接入 斜面培养基中央，待长出菌丝后即得母种。也可以在已长菇的菌袋中， 经消毒处理后，用接种针钩取袋内色泽纯、长势旺的菌丝体，接种在试 管斜面培养基中央，待萌发菌丝后，同样获得菌种。

5、4、适温培养 v通过上述不同方式将菌种分离接种于试管后， 要及时将试管移入已消毒的培养箱或培养室 内培养，温度控制在25左右，使分离获得 的孢子或菌丝在适温下发育。一般孢子弹射 3-4天后孢子萌发成菌落，10天后菌丝长满 管；组织分离接种后2-3天，菌丝即萌发， 并在培养基上蔓延生长；菇木分离接种后，7 天菌丝即恢复生长。 5、选育提纯 v通过上述方法得到的菌丝，不一定都是优质 的，还需要选育提纯。因此，在菌丝萌发后， 要认真观察，挑选色泽纯、健壮、长势正常、 无间断的菌丝，在接种箱内连同培养基钩取 菌丝，接入另备的试管培养基上。在23- 25的恒温条件下，培养7-10天，待菌丝长 满管后，再

6、进行观察，从中择优取用，即为 “母代”母种。 6、转管扩接 v母代母种可以转管扩接成“子代”母种。采 用同样的斜面培养基，每支可扩接30-50支 子代母种。生产上供应的多为子代母种。它 可以再次转管扩接。一般每支可扩接成20- 25支子代母种，但转管次数不得超过5次。 7、出菇试验 v分离选育的母种，还必须进行出菇试验。方 法是：把母种接种于瓶或袋装的木屑培养基 上，根据各种菇耳种性对温度的要求，进行 适温培养，直至出菇才证实可用于生产。 二、原种繁殖培养 v将母种接在瓶或袋的木屑培养基上，通过 培养，即成原种。 1、原种木屑培养基配方 v杂木屑775，麦麸20，蔗糖1，石膏 粉12，硫酸镁0

7、3。pH值(灭菌 前)65-7，含水量调至60。将上述原、 辅料混合拌匀，装入750毫升的玻璃菌种瓶内， 装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花，再用牛 皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高压灭菌锅 内，在147千帕平方厘米压力下灭菌2- 25小时。也可进行常压灭菌，在100下 保持10-11小时，达标后趁热取出，让其冷 却。 2、接入菌种 v待料温降至25以下时，在无菌条件下，将 试管种分割成若干决，通过酒精灯火焰迅速 接入原种培养基上，每支母种可按4-6瓶原 种。 3、发菌培养 v接种后及时将玻璃菌种瓶移入25菌种培养 室内进行培养。空间相对湿度控制在70以 上，避免强光照射。原种培养时间一般菇类 需要

8、40-50天，草菇、银耳只需15-20天即 可。 4、去杂选优 v原种培育过程中，要每天进行观察，如发现 有杂菌污染的，应立即淘汰 三、栽培种扩大培育 v将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培养 30-35天即为栽培种(又叫生产种)，可用于生产栽培。栽培 种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通常多采 用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米x24厘米、15厘米x28 厘米、17厘米x33厘米等，可根据各种菇耳特性和当地习惯 选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌，要求灭菌温度 达100，保持8-10小时，达标后趁热卸袋冷却。待料温降 至25以下时，在无菌条件下接入选定品种的原种

9、。每瓶原 种可扩接成50-60瓶栽培种。菌种培育室要求洁净，防强光， 室温掌握在23-25，并经常检查，发现杂菌污染应及时淘 汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋，尖端菌丝反转上爬1-3 厘米时，为适龄的栽培种 v v在自然界里，食用菌都不是单独存在的， 而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在 一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食 用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养， 获得纯的优良菌种。 (一）母种的分离培养 v食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组 织分离法以及基内菌丝分离等。 1.孢子分离法 v 孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无 性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。 这种菌种生活力较强，但孢

10、子个体之间有 差异，且自然分化现象较严重，变异大， 需经出菇试验才能在生产上应用。 （1）单孢分离法 v是每次或每支试管只取一个担孢子， 让它萌 发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草 菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可 采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上 较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分 离法。 （2）多孢分离法 v就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它 们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一 种方法。 种菇孢子弹射法 v选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产， 适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水 冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面

11、水分。 在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃 漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。 培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置1220小时，菌 褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印 （平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色，香菇、金针菇孢子印 白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养 皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、 长势好的菌落进行试管培养。 v还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程 序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢 丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟 掌周围塞好。并在纱布

12、上倒少许升汞或无菌水。移入 20 左右恒温箱培养。 褶上涂抹法 v按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用 接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表 面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划 线接种。 钩悬法 v取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑木 耳、毛木耳、白木耳，用无菌不锈钢丝 （或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂于三 角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培养基 或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。 贴附法 v按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块， 用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴 附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。经 612小时的培养，待孢子落在斜面上，立即 把孢子连同部分琼脂培养基

13、移植到新的试管 中培养即可。 v孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮， 当母种定植一星期左右，菌丝布满斜面时， 选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂 茵的母种试管，进而转管扩大，一般到栽培 种，转管不宜超过5次。 孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验， 鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬 菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母种。 例：银耳孢子分离 v按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经12 小时培养后，瓶底培养基表面就有“孢子印”。 取出种耳，置 2025温箱培养23天，培养 基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银 耳的酵母状分生孢子形成的少量

14、银耳菌丝。此时 移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移 接入营养丰富，且表面比较干燥的培养基上。经 30天左右，菌落长出白色菌丝。 银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝 的子囊菌（香灰菌丝）混合培养时，由后者帮助 分解木材及其他一些纤维物质，提供营养，才能 利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成。 在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。 羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长 迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶，取先 端菌丝，转管移接，置2528上培养 ，重复转管几次即可得到优良纯种 银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子 也不易萌发。在进行两菌混合时，先取经8 IO天培养的银耳菌丝斜面，

15、按无菌操作 方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接 入一 小块羽毛状菌丝。置25下培养1周即 得到混合好的银耳母种。 2组织分离培养法 v利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获得 母种的简便方法，即组织分离。该法操作简 便，菌丝生长发育快，品种特性易保存下来， 特别是杂交育种后，优良菌株用组织分离法 能使遗传特性稳定下来。 （1）子实体分离 v种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟的优 良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以0.1 的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干 或用75酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行 表面消毒。接种时，只要将种菇撕开，在萌 盖和菌柄交界处或菌褶处，挑取一小块组织； 移接 到

16、PDA培养基上。置25左右温度下培 养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状 菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇 等可以用此方法。 （2）菌核分离 v茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集。 而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分离， 同样可以获得菌种。方法是将菌核表面洗净， 用酒精或升汞消毒后，切开菌核，取中间组 织一小块，约黄豆大小，接种在PDA 培养基 斜面上，保温培养。应注意的是，菌核是贮 藏器官，大部分是多糖类物质，只含有少量 的菌丝，因此挑取的组织块要大一些，如果 组织块过小，则不易分出菌种。 （3）菌素分离 v有一部分子实体不易找到，也没有菌核，可 以用菌素进行分离。如蜜环菌、

17、假蜜环菌。 其操作方法是先用酒精或升汞将菌素表面黑 色皮层轻轻擦拭23次， 然后去掉黑色外皮 层（菌鞘），抽出白色菌髓部分；用无菌剪 刀将菌髓剪一小段，接种在培养基上，保温 培养，即得该菌菌种。 v菌素分离要注意：因菌素比较细小，分离 素也比较细小，分离时极易污染杂菌，所 以要严格操作。 3基内菌丝分离培养法 v利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯菌 种的一种方法，叫基内菌丝分离法。 此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而 且是朝生暮死，不易采得的子实体。基内分离法与 组织分离法不同之点是，干燥的菇木或耳木中的菌 丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢复生长。 因此，有必要保留较长的

18、时间（约1个月），以断 定菌丝是否能成活。基内菌丝分离法又可分为，材 中菌丝分离（即菇木或耳木分离法）及土中菌丝分 离法等。 （1）材中菌丝分离法 v就是菇木或耳木分离法，为了减少杂菌的感染，菇（耳）木 在分离之前，必须进行无菌处理。可以把菇（耳）水表面用 酒精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌的孢子，或再用0.1的 升汞水浸孢几分钟，然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干。 接种块切取时应注意。接种块必须在该菌菌丝分布的范围内 切取。所以，菌丝生长缓慢的种类应浅取；菌种生长快的种 类可以深取。同时。还应根据菇菌的种类、木材质地、菇 （耳）木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围。然 后用一把利刀进行切取

19、。接种块应尽量小些，以减少杂菌感 染机会，提离菌种的纯度。接种块移到培养基上，就应该放 到适合菌丝生长的2226 的温室或温箱中培养，使菌 丝恢复生长。 （2）土中菌丝分离 v食用菌种类很多，许多土生的食用菌；孢子不易萌发。组织 分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫土中 菌丝分离。 v土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多种 多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物 的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接 种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌 生长 的药物，如 40微克升的链霉素或金霉素。如发现感染细 菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来

20、，接种到木屑培养基中。 因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养基中不易扩 展；只局限于接种处。待菌丝长出感染区后，就可以再进行 扩大提纯了。 （3）子实体基部分离 v从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分 离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离， 例：袋栽银耳 从出耳早、出耳率离、无病虫害 的栽培室中；选择生活力最强的幼 耳5袋，移到气候温和，有散射光的 野外场所进行后期培养，以增强菌 丝体的生活力。经培养710天后， 待子实体直径达45厘米时便可取 回，作为分离的母体。再从中筛选 最理想的一朵，用利刀割掉银耳子 实体，放置于 0的冰箱或有敌敌 畏的容器中过夜，以便杀死瓶中的 害虫。然后用75酒

21、精或升汞擦洗 耳基和袋子外边的杂质，连同接种 工具、接种培养基等移进无菌室。 经灭菌后，用接种刀把袋口上部约 15毫米厚的老菌根挖除，并进行培 养。待袋口露出白色菌丝时，用接 种针挑取一块半粒米大的白色菌结 体，迅速移入母种试管培养基的中 央，轻轻地脱去接种针， 塞上棉塞 。 为了能够获得较多的母种，一次 接种量要有100200支试管，以便 从中选择。分离后应及时移入 2224恒温箱或温室中培养。 由于培养基内水分较多，菌丝恢复 要比耳木分离得快。经2-3天后，分 离物的边缘就可看 到白色菌丝。每 天要至少观察两次，以便提纯。观 察、提纯方法与耳木分离法担同。 经适温培养10-15天后，当接种

22、块扭 结团出现红、黄色水珠时，即可扩 大原种。 （二）原种和栽培种的接种培养 v母种获得以后，为了满足菌种生产的需要。应选出优良、纯度高的母种进 一步扩大为原种。 v 原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基。 v瓶装或袋装的原种培养基灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内，待瓶中的培 养基冷至30以下，可按照无菌操作程序进行接种。 v菌种瓶（袋）放入培养室时，要经常进行检查，一经发现杂菌污染，立即 取出。培养成的原种，菌丝体必须健壮有力，紧贴瓶壁而不干缩，颜色纯 正，具有一定清香味，生活力强，扩制成栽培种时吃料快。 v栽培种就是将原种进一步扩大培养成三级种，它和原种的接种及培养相同。 一般香菇、

23、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作培 养基。蘑菇多用粪草做培养料。 v栽培种要求料块不脱水干缩。菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味，无 老化现象，无杂菌污染，有的种许可有少量原基，接入栽培料后，发菌快， 长势好，生活力强。 v原种在接栽培种时，原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用。 （三）液体种的简单培养 v目前，用液体深层发酵法生产菌种，具有生产量大、周期短、菌龄整齐、 成本低廉、接种方便等特点，是实现食用菌工厂化生产的目标。现将液 体种培育过程简述于后，供参考。 简言之就是将纯正优良的菌种，接入液体培养基（固体培养基不加凝固 剂），使菌丝繁殖形成大量小菌球，然后将这种培养基拌入木屑或棉籽 皮料内，制成菌块、培养其形成子实体。还可用于制原种、栽培种。 培养液体菌种，可将培养液装入三角瓶中，约占空瓶的五分之一重量。 用摇瓶机（也称摇床）来培养。摇瓶机有旋转式和往复式两种，一般多 用往复式。液体培养基可用马铃薯汁（加糖），