中药及其制剂分析概论.doc

1、第十五章 中药及其制剂分析简介学习目标1 掌握中药制剂中待测成分的提纯方法及常用的定量分析方法2 掌握中药制剂分析的一般程序3 熟悉中药制剂分析的特点及中药指纹图谱技术4 了解影响中药制剂质量的因素 第一节 概述中药是以中医药学理论体系的术语表达其性味、功效和使用规律，并且按中医药学理论指导其临床应用的传统药物，中药是祖国医药伟大宝库中的重要组成部分，品种繁多，临床应用疗效显著，具有几千年的历史，是中华名族宝贵的医药遗产。中药制剂是根据药典、制剂规范和其它规定的处方，将中药的原料药物加工制成具有一定规格，可以直接用于防病、治病的药品，故中药制剂一般又称为中成药。千百年来，通过历代医药学家的共同

2、努力，中药制剂的品种日益增多，各种传统剂型日趋完善，我国现有35大类、43种剂型共5000余种中成药。为保证中药制剂的用药安全、合理、有效，必须对中药制剂进行合理的质量分析。中药及其制剂分析是以中医药理论为指导，应用现代分析理论和方法，研究中药制剂质量的一门应用学科。近年来，我国医药工作者将现代科研技术和手段，应用到传统中药的有效成分、药理、制剂和质量控制等方面，使得中药制剂在品种、产量、生产规模、新产品的研制方面有了很大的发展。一、中药制剂分析的特点 中药作用的药效物质基础是其中的化学成分，特别是中药复方制剂含有众多的化学成分，作用十分复杂，分析难度较大，因此，中药制剂分析与化学药物制剂分析

3、相比，具有下列几个特点：1、中药制剂中化学成分的复杂性和有效成分的难确定性 中药药效的发挥是多种成分协同作用的结果，因此应从整体上来控制中药的质量。中医临床用药一般由几味或几十味组成的复方，单味药材本身就是一个复杂的混合物，复方制剂所含的化学成分就更复杂，中药制剂中产生的疗效是多种化学成分的协同作用，有产生治疗作用的有效成分，也有目前认为无生物活性的无效成分；有有机成分，也有无机成分，而且，中药材中有效成分与无效成分的概念也是相对的，某一化学成分在一种药材中为有效成分，在另一种药材中就也可能是无效成分。所以，对于中药制剂的研究，很难用12中成分作为疗效指标成分，因此，对于中药制剂的质量分析应当

4、综合考虑。2、中药制剂组方的原则性和规律性 中药制剂是严格按照中医理论和用药原则而组方的，各味药材在处方中地位不同，有君、臣、佐、使之分，进行质量分析时，首先进行组方分析，通过组方分析首选君药、贵重药及剧毒药建立分析方法。当君药无明显特征或有效成分不明确而难以分析时，才可考虑分析臣药及其他药。其次，对毒药、剧药成分进行检测，以达到临床用药安全可靠，目前，多根据制剂中某药味有效成分的特性建立控制方法，随方分析主药或药群的有效成分进行质量评价。3、中药制剂中原药材来源和炮制的差异性 中药制剂中原药材差异较大，分析时应考虑药材来源与炮制等方面的影响。中药材品种繁多，同名异物、同物异名现象很多，药材规

5、格、产地、生长环境、药用部位、采收季节和加工方法等均会影响到药材中有效成分的含量，从而影响到中药制剂的质量和临床疗效。现代研究表明，不同的采收期中药的有效成分含量差异很大，如薄荷中的薄荷脑于秋季叶变黄时含量最高，丹参中的有效成分丹参酮在11、12月份含量最高。此外，中药材经加工炮制后，其化学成分、性味、药理作用等方面均会发生一定的变化，为了保证中药制剂的质量，药材应严格遵守中药炮制规范，对炮制工艺、成品质量都要严格控制。4、中药制剂剂型、生产工艺及辅料的多样性 含有相同药材的不同中药制剂，不同生产工艺的差别，都将会影响到制剂中化学成分的含量。中药制剂的剂型较多，传统剂型有丸、散、膏、丹、酒、汤

6、、茶、锭等；现代新剂型有合剂、酊剂、颗粒剂、片剂、注射剂等，各种剂型由于制备方法不一，存在状态不同，剂型的多样性，决定了分析方法的多样性。有些中药制剂生产工艺较为复杂，影响因素较多，即使同一批、同一生产车间，若工艺稍有差别，也很难保证不同批次之间化学成分的一致性。此外，中药制剂所用辅料，如蜂蜜、糯米粉、植物油等，对质量分析均有一定的影响，大多需要进行提取、分离、净化等繁琐的预处理，以排除干扰，才能获得准确的分析结果。所以，在分析方法上除考虑方法的专属性、灵敏性外，尚需注意药材在制剂中的存在形式、辅料对测定的影响及各成分间的干扰。应针对不同工艺、剂型和辅料等选择适宜的分析方法和检测项目。若制剂中

7、含有药材粉末，保留有植物组织特征，可用显微法鉴别；进行化学成分分析时，则须将被测成分从植物细胞中提取出来。若制剂是由药材提取物、浸出物制成，则理化分析法是其主要的分析方法。5、中药制剂分析方法的先进性 由于中药材品种繁多，来源复杂，即使同一品种、由于产地、生态环境、栽培技术、加工方法等不同，其质量也会有差别，中药制剂的组成又十分复杂，各种成分的含量高低不一，许多成分的含量比较低，有的成分含量很低，甚至为十万分之几、百万分之几，因此，中药制剂的分析方法需要求其专属性和灵敏度。目前，主要运用先进的科学技术进行分析，如色谱及连用技术、药理和生物测定技术及中药指纹图谱研究技术等。二、影响中药制剂质量的

8、因素中药制剂的原料中药材大都是来自于自然界的植物、动物、矿物，因此，中药处方及中药材的原辅料及包装材料、剂型与生产工艺、质量标准与质量监控措施、厂房设施等因素都影响其质量。1、处方 处方是影响中药制剂疗效的主要因素，无论是古方、验方还是医院协定处方，在制备制剂前都必须进行处方中药味、各药味间用量比例及日服剂量的筛选，使处方尽量精炼、严谨，符合中医辨证施治、理法方药的原则。因此，处方是中药制剂研究的基础和依据，但值得注意的是，寻找一个治百病的处方是不科学的，只要对某一种病或对疾病的某一点有特效的处方就是好处方。 2、原辅料及包装材料 原料、辅料是中药制剂生产的基础物质，是制剂生产的第一关。其质量

9、状况将会直接影响药品的质量。尤其是中药材来源复杂，采收季节、产地、贮藏、饮片炮制质量等均可直接影响中药制剂产品的质量及其安全性和有效性。中国药典将黄芪甲苷作为黄芪药材质量的指标成分，研究表明，河南产的蒙古黄芪和甘肃产的蒙古黄芪黄芪甲苷的含量相差9倍。因此，重视制剂质量，必须从生产制剂的基础物质抓起，通过严格、科学、系统的管理，使原料、辅料及包装材料从采购、验收、入库、贮藏、发放等方面做到管理有章可循，使用有标准可依，记录有据可查，从而保证合格、优质的原料、辅料及包装材料用于药品的生产。3、原料药的采收季节和时间、炮制与贮藏 采收时间中药品质的好坏，取决于有效物质含量的多少，有效物质含量的高低与

10、产地、采收季节、时间、采收方法有着密切的关系。现代研究表明，不同的采收期中药的有效成分含量差异很大，如以总黄酮和淫羊藿苷含量为指标成分的淫羊藿药材，有学者对吉林省临江野生淫羊藿不同采收期地上部位中总黄酮和淫羊藿苷的含量进行测定，发现不同采收期的淫羊藿地上部位中淫羊藿苷的含量在0.2630%3.8133%之间，总黄酮的含量在6.360%14.840%之间；综合考虑淫羊藿苷含量和总黄酮含量，淫羊藿最佳采收期应以9月中旬为佳。 炮制加工中药炮制之后能使药材达到降低或消除毒性或副作用、改变或缓和药物的性能、增强疗效、净制、便于制剂和保存药效等目的，这是中医用药的一个特点，不同的处方、不同的剂型有不同的

11、炮制要求和方法。中药饮片能否按炮制规范炮制，直接影响中药制剂的临床疗效和临床安全。 饮片贮藏保管中药的性状及其所含成分是决定该药材品质的主要标志。贮藏保管的好坏，直接影响到主要成分与性状的变化。中药由于含有不同的化学成分加之外界温度、湿度、阳光和空气的影响，如贮藏保管不当，就会产生虫蛀、发霉、泛油、变色、气味散失等变异现象，直接对药材的质量产生影响，进而关系到临床用药的安全与疗效。 4、剂型与生产工艺 中药制剂的剂型是影响中药制剂质量稳定性、有效成分的溶出和吸收、药物显效快慢强弱的重要因素，即剂型与制剂疗效直接相关。因此，必须根据临床防治疾病的需要、处方药物及有效成分的性质和生产的技术水平及条

12、件来选择剂型。中药制剂大多需选用适当的溶媒和方法，提取有效成分，再进一步精制、纯化后做成制剂，应用于临床发挥治疗和调节作用。在提取过程中，药材的浸泡、选用的溶媒、提取方法和时间，精制的方法和操作、制备过程中的干燥方法、成型方法、包装及操作人员的操作方式等都影响中药制剂的质量，进而影响临床效果。 构成制剂工艺的因素较多，如粉碎、提取、分离除杂、浓缩、干燥、及制剂造型的对象方法、工艺条件等，必须通过不断实验来选择工艺。当前，如何将低温提取、超临界提取、微囊、微球、脂质体技术、离心分离技术、超滤技术等应用于中药制剂是中药制剂工艺现代化的关键，因此，生产工艺对药物制剂疗效的影响也可概况为以下三个方面：

13、(1)取舍有效成分的种类、数量及存在形式；(2)控制有效成分的释放速度；(3)直接控制药物的吸收速度。 5、质量标准与质量监控措施 质量是疗效的保证，是工艺的体现，质量标准是药品质量优劣的指标，中药生产现代化和质量标准科学化是发展中药的关键，由于中药的有效成分复杂，疗效多根据传统经验的积累，作用于人体多强调整体性、互补性、协调性，而且目前中药制剂的质量标准水平相对较低，因此，如何采用现代分析技术手段与传统经验鉴定相结合制订出能指导生产操作和反映产品内在质量的均一性、有效性、稳定性、重现性的多元化可控指标是提高中药制剂质量，促进中药现代化的重点，也是难点。现代分析方法和技术在中药制剂质量控制方面

14、得到了扩大应用，中国药典2010年版对部分常用饮片和毒性药材制订了相应的内在质控标准。中药指纹图谱技术的应用，对中药制剂生产用的原料、中间体、成品都能做到定性、定量检测，有效鉴别中药材的产地或真伪，监督生产过程的规范与否，从而达到良好控制制剂产品的质量。 6、厂房设施 符合质量要求的厂房设施是提高中药制剂质量的保证，厂房的设计、空气洁净技术的应用、生产车间的设计与管理以及设备的选型、安装、维修与保养无一不影响着中药制剂的质量，中药制剂生产单位必须不断更新设备，采用较成熟的现代喷雾干燥技术，高速离心技术及先进的检测仪器等手段，以更完全地提取出有效成份，除去无效成分，使中药制剂符合三效(高效、速效

15、、长效)、三小(服用剂量小、毒性小、副作用小)、五方便(服用、携带、贮藏、生产、运输方便)的要求。因此，生产企业必须按照GMP组织生产；牢固树立质量第一的思想，在生产中严格执行生产工艺规程、岗位操作法和标准操作规程；质量管理部门要加强对生产全过程的质量管理和检验，控制有效成分的稳定性，保证最终产品批次间的质量统一。 三、中药指纹图谱中药指纹图谱(traditional chinese medicine fingerprint)系中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱，即运用现代分析技术对中药化学信息以图形（图像）的方式进行表征并加以

16、表述。中药指纹图谱是一种现代中药鉴别新技术，是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性，能提供从原药材的种植、栽培、引种，中成药生产过程中工艺的规范与优化，到产品质量标准的制订全方位的质量保证。因此，中药指纹图谱为研究道地药材、稀有药材替代品以及原药材真伪鉴别的依据。目前，指纹图谱技术是在现有的技术条件下对中药材、中成药进行质量控制最好的解决办法。现代分析技术包括光谱、色谱、波谱、核磁共振、X-射线衍射等和各种连用技术。(一)、中药指纹图谱的特点中药指纹图谱是一种综合的、量化的鉴别手段。“整体性”和“

17、模糊性”为其显著特点。整体性，是指把所得指纹图谱作为一个整体进行考察，而不能以其中单个峰的有无、峰的高低以及峰面积的大小来判断检测品的质量。模糊性，是指个体样品本身存在着差异，难以精确的进行测量，绝大多数的指纹图谱本身也存在着模糊性，不能保证在所得的指纹图谱中每一个峰都没有重叠，而且也不能保证所得的图谱包含了样品的所有特征，况且在不同的实验条件下得到的图谱会有很大的差异。但是，只要能圈定图谱中关键部分即可对样品进行质量控制。因此，中药指纹图谱不仅是一种中药质量控制模式和技术，更可以发展成为一种采用各种指纹图语来进行中药理论(复杂系统)和新药开发的研究体系和研究模式。(二)、制订中药指纹图谱的原

18、则及意义1、建立中药指纹图谱的原则 中药指纹图谱的建立，要以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，应遵循以下三个原则。（1）系统性：指纹图谱反应的化学成分应包括中药所含大多数组分的类别或指标成分的全部。如人参中的有效成分是人参皂苷，则在指纹图谱的考察中，应尽可能多地反应其中的皂苷成分；而对于有效成分较为复杂的，如银杏叶中的有效成分是黄酮和银杏内酯类，针对这两类成分其指纹图谱可采用两种方法进行分析，最终达到系统、全面的目的。（2）特异性：指纹图谱成是中药自身的“化学条码”，其反映的化学信息（表现为保留时间或比移值）具有高度的选择性，通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别区分中药的真伪、优劣或产地。（3

19、）重现性（可操作性）：是指已建立的指纹图谱，不同的操作者、不同的实验室，只要在规定的方法和条件下、允许的误差应范围内，即能做出相同的结果，这样才能保证指纹图谱的通用性和实用性。2、制订指纹图谱的意义 指纹图谱是对中药质量控制的补充和提高。理想中的指纹图谱不仅能进行定性鉴别，也可用于精确的定量分析。通过指纹图谱研究，可以掌握每个批次原药材、中间体成分的变化，进行有指导的合理“混批勾兑”，保证成品在成分含量、组成比例上保持一致，减少批间差异。（三）、中药指纹图谱的类型狭义的中药指纹图谱是指中药化学(成分)指纹图谱；广义的中药指纹图谱则通常按测定手段和应用对象的不同进行分类。 1、按测定手段分类 中

20、药指纹图谱按测定手段可分为中药化学(成分)指纹图谱和中药生物指纹图谱。中药生物指纹图谱主要是测定各种中药材的DNA图谱，由于每个物种基因的唯一性和遗传性，中药材DNA指纹图谱可用于对中药材的种属鉴定、植物分类研究和品质研究。它对中药材GAP基地建设、中药材种植规范(SOP)、选择优良种质资源和药材道地性研究极为有用。 2、按应用对象分类 中药指纹图谱可用于中药制剂研究、生产过程的各个阶段，按应用对象来分类，可分为中药材(原料药材)指纹图谱、中药原料药(包括饮片、配伍颗粒)指纹图谱和中药制剂指纹图谱。如分得更细，还可包括用于工艺生产过程中间产物的指纹图谱。值得注意的是建立中药材化学指纹图谱必须考

21、虑诸多因素的影响。中药品种混杂，历史上形成的同名异物、异名同物，以及同一物种受产地环境、不同有效部位所含成分的波动大等因素，给质量控制带来了很多困扰。因此对于某一种中药材的指纹图谱，需要有大量的数据积累，才能制定合理的相似性标准。（四）、中药色谱指纹图谱研究的技术关键 (一)研究思路与内容 1、确定研究对象 一种药材有多个临床应用，有多种活性组分。研究中药注射剂的指纹图谱时，必须尽可能详尽地了解药材、中间体及成品中所含成分的种类及其理化性质，找出成品中的药效成分或有效成分，作为成品及中间体指纹图谱的研究对象，即分析检测目标。 2、研究内容 中药注射剂在固定中药材品种、部位、产地、采收期以及加工

22、工艺的前提下，需制订中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。 (二)研究方案 1、样品的选择与收集 药材应尽可能固定产地(如道地药材)、采收期和炮制加工方法等，对工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现异常的药材批次应重点选择，另外还应收集不同产地、不同采收期的药材，中间体、注射剂的收集原则也应重点选择工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现异常的批次。 供试品的取样应按中国药典(2010年版)一部中规定的中药材取样方法，以保证所取供试品的代表性和均一性。 2、供试品的制备 在指纹图谱研究过程中，供试品(中药材、中间体及注射剂)溶液的制备，应根据所含化学成分的理化性质和检测方法的需要，选择适宜

23、的方法进行制备。制备方法须确保该注射剂、有效部位或中间体主要化学成分在指纹图谱中的再现，以便分析指纹图谱的相关性。 注射剂中除少数品种添加溶剂外，所含化学成分均具有较好的水溶性，而且研究生产工艺时考虑到色素、生物大分子等因素，生产过程中已通过微孔滤膜、脱色等操作，无须特殊处理，可直接分析检测。 3、参照物的制备 制订指纹图谱必须设立参照物，应根据供试品中所含化学成分的性质，选择适宜的对照品作为参照物；如果没有适宜的对照品，可选择适宜的内标物作为参照物。参照物的制备应根据检测方法的需要，选择适宜的方法进行。 4、研究方法的选择方法的选择 根据所含化学成分的理化性质，选择适宜的测定方法。建议优先考

24、虑色谱方法。对于成分复杂的中药材及其制剂，特别是中药复方注射剂，必要时可以考虑采用多种检测方法，建立多张指纹图谱。 5、色谱条件的选择 无论是原药材、中间体，还是注射剂，其指纹图谱的色谱条件选择是整个研究检测方法过程中最重要、关键性的内容。下面以HPLC法为例，阐述各影响因素与解决途径。 (1)色谱柱：指纹图谱研究时一般选择510um的C18填充柱，以250mm4.6mm较适宜，其他特殊填料的色谱柱，如氨基柱、氰基柱等，可视研究对象的不同进行选择。 (2)流动相：流动相可选择乙腈、甲醇、水和四氢呋喃等。对于反相高效液相色谱法，乙腈水系统比较适合梯度洗脱，而醇一水系统由于热力学和可压缩性因素，在

25、梯度洗脱时易导致基线漂移。 -(3)检测器：HPLC法应用最多的是紫外检测器，且前主要是可变波长型和二极管阵列检测器，适用于在紫外区具有吸收物质的测定。蒸发光散射检测器适用于无生色团物质的检测，如碳水化合物(多糖)、类脂类(磷脂)、皂苷等，与紫外检测器互相补充。联用技术中质谱检测器是最有效的检测手段，如GC-MS，HPLC-MS等可提供大量的结构信息，符合解决中药复杂体系的要求。 检测波长的选择：中药制剂根据君、臣、佐、使的组方理论，在尽可能兼顾佐、使药的同时，主要选择君、臣药中有效成分的吸收峰值；一个检测波长的色谱图如达不到控制质量的目的时，可建立多个检测波长下的指纹图谱； (4)柱温：柱温

26、的选择与恒定是影响指纹图谱技术稳定性的主要因素之一。当色谱图中某个色谱峰因溶解度差而峰形较“钝”时，可适当提高柱温(30一50)；若样品中组分在常温或高温下不稳定，易发生水解或分解(如乌头生物碱)等变化时，可降低柱温。 (5)进样量：进样量对指纹图谱的结果影响不大，但加大进样量，可以减弱梯度洗脱时基线漂移的程度；然而色谱柱的载样量有一定的限度，进样量过大，色谱柱超载，导致色谱峰峰宽增加或色谱峰峰尖钝化，并影响柱的寿命。6、指纹特征的选择与技术参数 指纹图谱方法一旦建立，除提供指纹图谱外，还应说明相应的技术参数。通过大样本的指纹图谱内在的挖掘，找出其中的指纹特征是指纹图谱研究的目的。(1)共有指

27、纹峰的标定：采用色谱法制订指纹图谱，必须根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间。根据10批次以上供试品的检测结果，标定共有指纹峰。色谱法采用相对保留时间标定指纹峰。(2)共有指纹峰面积的比值：以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作为1，计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值；以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中其中一个峰(要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰)的峰面积作为l，计算其他各共有指纹峰面积的比值。各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。1)中药材供试品的图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，单峰面积占总峰面积大于或等于20的共有峰，其差值不

28、得大于20；单峰面积占总峰面积大于或等于10，而小于20的共有峰，其差值不得大于25；单峰面积占总峰面积小于10的共有峰，峰面积比值不作要求，但必须标定相对保留时间。未达基线分离的共有峰，应计算该组峰的总峰面积作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。2)注射剂及其有效部位或中间体供试品的图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，保留时间小于或等于30分钟的共有峰：单峰面积占总峰面积大于或等于20的共有峰，其差值不得大于20；单峰面积占总峰面积大于或等于10，而小于20的共有峰，其差值不得大于25；单峰面积占总峰面积大于或等于5，而小于10的共有峰j其差值不得大于30；单峰

29、面积占总峰面积小于5的共有峰，峰面积比值不作要求，但必须标定相对保留时间。保留时间超过30分钟的共有峰：单峰面积占总峰面积大于或等于10的共有峰，按上述规定执行；单峰面积占总峰面积小于10的共有峰，峰面积比值不作要求，但必须标定相对保留时间。未达基线分离的共有峰，应计算该组峰的总峰面积作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。 (3)非共有峰面积：中药材供试品的图谱与指纹图谱比较，非共有峰总面积不得大于总峰面积的10。注射剂及其有效部位或中间体供试品的图谱与指纹图谱比较，非共有峰总面积不得大于总峰面积的5。案例1：HPLC法对不同产地12批白花蛇舌草药材的指纹图谱研究精密称取白花蛇舌草样品1

30、.0 g，置125mL圆底烧瓶中，加入体积分数80甲醇20 mL，超声提取40min，取上清液用微孔滤膜(045 um)过滤，即得供试品溶液。色谱条件为Thermo BetaBasie18（250mm4.6mm，5um）为色谱柱；柱温：30；以乙腈0.5醋酸为流动相，连续梯度洗脱；体积流量1.0mLmin-1；检测波长为360 nm；进样量10uL注入高效液相色谱仪，记录色谱图(图15-1)和各色谱峰保留时间(图15-2)，以面积归一化法计算各色谱峰相对峰面积(AR)总之，指纹图谱研究的建立、分析、比较、评价和校验，应逐渐取得共识并形成规范。指纹图谱研究应结合当前的实际情况，同时还应该结合生产

31、工艺的优选及药效和临床观察，当前阶段宜简不宜繁、宜易不宜难，以确保研究方法与产品质量的基本稳定和一致。图15-1 白花蛇舌草药材标准色谱指纹图谱图15-2 12批白花蛇舌草药材色谱图第二节 中药及其制剂中待测成分的提取分离和纯化中药制剂的组成非常复杂，除制剂特有的工艺步骤外，还含有其他的附加剂，原药材和提取物中还含有众多的化学成分，因此，在测定前需提取待测组分，有的还需作进一步的纯化处理。一 中药及其制剂中待测成分的提取分离方法中药制剂常用的提取方法通常有萃取法、冷浸法、回流提取法、连续回流提取法、水蒸气蒸馏法、超声提取法和超临界流体萃取法等。1、萃取法 萃取法是利用溶质在两种互不相溶的溶剂中

32、溶解度的不同，使物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中，经过多次萃取，将测定组分提取出来的方法。萃取法主要用于液体制剂中待测组分的提取分离，多用有机溶剂将其萃取出来，以便分析测定。 萃取用溶剂应根据组分的溶解性来选择，测定组分在其中的溶解度大，杂质在其中的溶解度小。溶质在有机相和水相的分配比越大，萃取效率越高。根据相似相溶的原理，极性较强的有机溶剂正丁醇等适用于提取皂苷类成分，醋酸乙酯多用于提取黄酮类成分，氯仿分子中的氢可与生物碱形成氢键，多用于提取生物碱类成分，挥发油等非极性组分则宜用非极性溶剂乙醚、石油醚等提取。水相的pH可影响弱酸弱碱性物质在两相的分配。酸性有机组分在酸性条件下不电离，在有机相

33、中溶解度增大而有利于提取；碱性组分则在碱性条件下不电离，易被有机溶剂提出。溶液的pH应根据组分的pKa来确定，酸性组分提取的pH一般应比pKa低12个pH单位，碱性组分提取的pH一般应比pKa高12个pH单位。萃取通常在分液漏斗中进行，加入有机溶剂后，振荡、放置分层后分取有机相。若提取液用作鉴别，一般只提取一次；若用作含量测定，应提取完全，一般需要提取34次，萃取过程中应注意防止和消除乳化。酒剂和酊剂在萃取前应先挥去乙醇，否则乙醇可使有机溶剂部分或全部溶解于水中。2、冷浸法 冷浸法是将溶剂加入样品粉末中，室温下放置一定时间，组分因扩散而从样品粉末中浸出的提取方法，冷浸法适用于固体制剂中待测成分

34、的提取。样品需先粉碎成细粉后再提取，否则内部的组分不易浸出。进行鉴别时，大部分待测组分别浸出即可，进行含量测定时，扩散需达平衡后方能分取浸取液。一般方法为精密称取一定量的样品粉末，置具塞锥形瓶中，精密加入一定体积的溶液，密塞，称定重量。室温下放置一定时间（一般为824小时），并不断振荡，浸泡后再称量，并补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取一定量的续滤液备用。浸泡时间的确定可取同一样品，加溶剂后分别浸取不同时间，测定溶液中浸出组分的含量，当浸出量不再随放置时间的延长而增加时，说明扩散已经达到平衡。冷浸法操作简便，适用于遇热不稳定组分的提取，但所需时间较长，溶剂量大，提取率低。3、回流提取法：回流提

35、取法是将样品粉末置烧瓶中，加人一定量有机溶剂，加热进行回流提取的方法。在加热条件下组分溶解度增大，溶出速度加快，有利于提取。用于含量测定时，可更换溶剂，多次提取，至组分提取完全，合并各次提取液供分析用。也可精密加入一定体积溶剂至供试品中，称定重量，加热回流至组分浸出达到平衡，放冷后称重，补足减失重量，滤过，取续滤液备用。 回流提取法主要用于固体制剂的提取。提取前样品应粉碎成细粉。提取溶剂沸点不宜过高，对热不稳定或具有挥发性的组分不宜用回流提取法提取。回流提取法提取速度快，但操作较繁琐。4、连续回流提取法：连续回流提取法使用索氏提取器，利用遇热易挥发的溶剂进行反复回流提取。该法操作简便，节省溶剂

36、，蒸发的溶剂经冷凝流回样品管，其中不含测定组分，提取效率高。使用本法时应选用低沸点的溶剂，如乙醚、甲醇等，提取组分对热应稳定（图15-3）。图15-3 索氏提取装置图 A、圆底烧瓶 B、样品管 C、冷凝管5、水蒸气蒸馏法：部分具有挥发性可随水蒸气蒸出的组分，可采用水蒸气蒸馏法提取，收集馏出液供分析用。挥发油、一些小分子的生物碱如麻黄碱、槟榔碱，某些酚类化合物如丹皮酚等可以用该法提取。用本法提取的组分对热应稳定（图15-4）。 图15-4 挥发油测定装置图 A、圆底烧瓶 B、挥发油提取器 C、冷凝管6、超声提取法：超声波是频率高于20 000Hz，人耳听不到的高频声波。超声波具有助溶作用，因此可

37、用于样品中待测组分的提取。提取时将供试品粉末置具塞锥形瓶中，加入一定量的提取溶剂，再将锥形瓶置超声振荡器(或超声清洗机)槽内，槽内应加有适量水，开启超声振荡器，进行超声振荡提取。由于超声波的助溶作用，超声提取较冷浸法速度快，一般仅需数十分钟浸出即可达到平衡。超声提取法简便，不需加热，提取时间短，适用于固体制剂中测定组分的提取。用于药材粉末提取时，由于组分是由细胞内逐步扩散出来，速度较慢，加溶剂后宜先放置一段时间，再超声振荡提取。 7、超临界流体萃取：超临界流体是指压力和温度达到物质的临界点时，所形成的单一相态。超临界流体萃取(supercritical nuid extraction，SFE)

38、是近年来发展起来的一种新的提取分离方法，是利用某种物质在超临界状态时具有密度大、黏度小、扩散系数大等优良的传质特性来进行萃取，它具有提取率高、产品纯度好、能耗低等特点。 最常使用的超临界流体是CO2，因为CO2是一种不活泼的气体, 具有较低的临界温度和临界压力，萃取过程不发生化学反应,且属于不燃性气体,无味、无臭、无毒，故安全性好；而且，CO2价格便宜，纯度高，容易取得，且在生产过程中循环使用，从而降低成本。由于SFE具有以上优点，因此，本法特别适用于中药及其制剂中待测组分的分离提纯，目前应用日益广泛。二 中药及其制剂中待测成分的纯化方法纯化指待测组分被提出后，还需要做进一步的处理，以除去干扰

39、组分的影响。常用的纯化方法有萃取法、沉淀法和柱色谱法等。1、萃取法 萃取法不仅用于待测组分的提取，也可用于纯化处理。即采用适宜的溶剂直接除去杂质。如测定制剂中总生物碱的含量，一般先用酸性水溶液从提取液中萃取出生物碱，生物碱成盐在水中溶解度增大而被提出，分取水相，加浓氨溶液使成碱性后，再用有机溶剂(如氯仿)将生物碱从水相提出。萃取二次可分别除去中性、酸性脂溶性杂质及水溶性杂质，达到纯化的目的。又如用乙醚、石油醚等非极性溶剂提取除去脂溶性色素。2、沉淀法：有些待测组分可与一些试剂反应生成沉淀，过滤使杂质存在于溶液中而得到纯化。也可使杂质沉淀析出而使被测物质保留在母液中。3、色谱法：色谱法为目前常用

40、的纯化分离方法之一，有柱色谱、薄层色谱、纸色谱、离子交换色谱、聚酰胺色谱及凝胶色谱等。常用的固定相有硅胶、氧化铝和大孔吸附树脂等。柱色谱大多数情况是将待测组分保留于柱上，将杂质洗去，再用适当溶剂将待测组分洗脱下来；也可将待测组分洗下而将杂质保留于柱上，达到纯化的目的。知识链接 人参皂苷成分可用大孔吸附树脂纯化，先用水洗去糖等水溶性杂质，再用70的乙醇溶液洗脱人参皂苷。第三节 中药制剂分析基本程序中药制剂分析的基本程序包括取样、性状、鉴别、检查、浸出物测定和含量测定等项目。检定时应参照国家药典等有关规定执行。 一 中药制剂取样法取样是从整批成品中抽取一部分具有代表性的供试品。取样的原则是均匀合理

41、，要有科学性、真实性和代表性。一般应从每个包装的四角和中间5处取样。袋装可从袋中间垂直插入，桶装可在桶中央取样，深度可达1/32/3处。取得的样品要妥善保管，同时注明品名、批号、数量、取样日期及取样人。 各类中药制剂的取样量至少为检测用量的3倍，贵重药可酌情取样。 1、固体中药制剂(片剂、丸剂、胶囊)：一般片剂取量200片，未成片前已制成颗粒者可取100g，丸剂一般取10丸。胶囊按药典规定取样不得少于20个胶囊，倾出其内容物并仔细将附着在胶囊上的药物刮下，合并，混匀，并称定空胶囊的重量，由原来的总重量减去，即为胶囊内药物的重量，一般取样量为100g。 2、粉状中药制剂(散或颗粒剂)：一般取样1

42、00g，可在包装的上、中、下3层或间隔相等部位取样若干。将取出的供试品混匀，然后按“四分法”从中取出所需供试量。 3、液体中药制剂(口服液、酊剂、酒剂、糖浆)：一般取样数量为200ml，同时须注意容器底是否有沉渣，应彻底摇匀，均匀取样。 4、注射剂：取样要经过2次，配制后在灌封、熔封、灭菌前进行一次取样，经灭菌后的注射剂按原方法进行，分析检验合格后方可供药用。已封好的安瓿取样量一般为200支。二 中药及其制剂的鉴别中药制剂的鉴别主要是根据中药制剂的性状、组织学特征以及所含化学成分的理化性质，采用一定的分析方法来判断中药制剂的真伪。中药制剂组成复杂，少则几味，多则十几味药，一般不要求对所含有的每

43、种中药都进行鉴别。选择鉴别哪种中药，应遵循处方的原则，首选君药与臣药进行鉴别；贵重药虽然量少，但有时起重要作用，也应加强质量监督；毒、剧药物也需要鉴别。鉴别的方法一般包括显微鉴别、理化鉴别和色谱鉴别。(一)性状鉴别：中药及其制剂的性状鉴别是利用其外观、形状及感官性质等特征作为真伪鉴别的依据。如药材及其炮制品的形状、大小、色泽、表面特征、质地、折断面特征以及气味等；中药制剂的外观及内容物的形状、颜色、气味等，均可作为描述的内容。性状鉴别是评价药材及其制剂质量的一项重要指标。中药常用药材以植物来源占大多数，也有少数来源于动物和矿物。各类药材和炮制品在外形上有一定的共同点，即有一般的形态规律。但各类

44、药材由于来源不同及药材本身所含不同的化学成分等因素，在性状上又各具特异点。掌握各类药材的一般形态规律和形态特异点，并参照国家药典、药品标准和中药鉴定学等有关专著所描述的性状，并遵循药材检定通则规定操作，就能正确鉴定药材的真伪。中药制剂的性状鉴别也可参照药材鉴别的方法进行。(二)显微鉴别：显微鉴别是利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别特征如薄壁细胞、木栓组织、分泌细胞和分泌腔、纤维以及淀粉粒、花粉粒、碳酸钙结晶等。凡以药材粉碎后直接制成制剂或添加有粉末药材的制剂，由于其在制备过程中原药材的显微特征仍保留在制剂中，所以均可用显微鉴别法进行鉴别。案例 槟

45、榔粉中槟榔碱的显微鉴别 取槟榔粉0.5g，加水3ml及稀盐酸1滴，微热振摇提取数分钟，滤过，取滤液1滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，即发生混浊，放置后经镜检可见石榴红球形或方晶形（槟榔碱结晶）显微鉴别应选择专属性的特征进行鉴别，处方中多味中药共同具有的显微特征不能作为鉴别的特征。(三)理化鉴别：理化鉴别法是根据中药及其制剂中所含主要化学成分的理化性质，采用物理、化学或物理化学的方法进行鉴别。一般理化鉴别方法有荧光法、显色法、沉淀法、升华法、结晶法等。所鉴别的成分应是已知的有效成分或其他特征成分，还应是处方中某一味药所单独含有的成分。鉴别反应的专属性强、灵敏、简便。有的反应，如泡沫反应、三氯化

46、铁反应等，在植物中所含类似成分较多，专属性不强，不宜采用。其他成分是否有干扰，应做阴性对照试验。阴性对照试验是取不含鉴别药物的制剂(阴性对照)，在相同的条件下反应，若不显正反应，则说明其他药物和辅料不干扰鉴别。(四)色谱鉴别：色谱法分离效能好、灵敏度高、应用范围广，特别适合中药制剂的鉴别。色谱法常用的方法有纸色谱发、薄层色谱法、气相色谱发、高效液相色谱法和高效毛细管电泳法，其中薄层色谱法不需要特殊的仪器设备，操作简便，有多种专属的检测方法和丰富的文献资料，是目前中药制剂分析中应用最多的鉴别方法。薄层色谱鉴别法常采用对照法进行鉴别，该法是将中药制剂样品和对照品在同一条件下进行分离分析，观察样品在

47、对照品相同斑点位置上是否有同一颜色(或荧光)的斑点，来确定样品中有无要检出的成分。1、对照品对照法：用中药制剂中味药材所含有效成分（或指标性成分）的对照品制成标准对照液，与样品液点于同一薄层板上，展开，显色后，比较与对照品相同Rf值位置上有无同一颜色(或荧光)的斑点，来鉴别制剂中这种有效成分。2、对照药材对照法：将制剂中某味中药的对照药材制成标准对照液，与供示品溶液同法进行对照。3、阳对照法：将制剂中要鉴别的某味药材，按制剂工艺的制法处理后，以和制剂相同的比例条件、方法提取，所得提取液称为该味中药的阳性对照液。鉴别时取阳性对照液，与供示品溶液同法进行对照。案例 大补阴丸中黄柏的薄层色谱法鉴别

48、取本品水蜜丸0.7g，研碎，加甲醇5ml，或取大蜜丸2g，剪碎，加甲醇10ml，置水浴上加热回流15分钟，滤过，滤液补加甲醇或浓缩至5ml，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液，再去盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（2010版中国药典附录B）试验，吸取上述三种溶液各1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（12:6:3:3:1）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开岗内，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在于对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑

49、点，4、阴对照法：将制剂处方中要鉴别的药物除去，剩下的各味药，按制剂工艺方法处理后，以和制剂相同的比例、条件、方法提取，所得提取液称为该味药的阴性对照液。鉴别时取阴性对照液，与供示品溶液同法进行对照。三 中药及其制剂的杂质检查中药制剂的杂质检查是制剂安全性评价的重要保证。除杂质检查外，辅料的质量检查、与剂型相关的一般项目检查也属此项内容。主要包括一般理化检查项目，包括水分测定、相对密度测定、浸出物及总固体测定、乙醇含量测定、旋光度测定、折光率测定和干燥失重测定等；杂质检查，包括杂质限量检查、灰分测定、酸碱度检查、氯化物检查、特殊杂质及掺伪物检查等。重金属检查，包括铅盐、砷盐、铁盐及其他重金属的

50、限量检查。此外，国际上对中药制剂中有机溶剂残留及农药残留量检查日趋严格。1水分测定：固体中药制剂多数要检查水分，因为水分含量过高，可引起制剂结块、霉变或有效成分的分解。因此，水分是丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等固体制剂的常规检查项目，在中国药典(2010年版)制剂通则中规定有水分的限量。中国药典(2010年版)一部附录收载的水分测定法有烘干法、甲苯法和减压干燥法及气相色谱法共4种方法。甲苯法的装置如图15-5所示。图15-5 甲苯法测定水分的装置 A、圆底烧瓶 B、水分测定管 C、冷凝管 2总灰分和酸不溶性灰分：总灰分系指药材或制剂经加热炽灼灰化遗留的无机物。总灰分除包含药物本身所含无机盐(称生

51、理灰分)外，还包括泥土、砂石等药材外表粘附的无机杂质。因此，测定灰分的目的主要是控制药材中泥土、砂土的量，同时还可以反映药材生理灰分的量。中国药典(2010年版)一部收载有植物药的总灰分检查。有些中药材生理灰分的差异较大，特别是组织中含草酸钙较多的药材，如大黄的总灰分由于生长条件不同可从820以上。此类药材的总灰分就不能说明外来杂质的量，因此需要测定酸不溶性灰分。中药制剂以合格的药材为原料，原则上可以不再进行杂质检查。但对于某些以根、茎等原药材粉末为原料的制剂，为控制外来杂质的量，仍需检查。如九味羌活丸，规定其总灰分不得过7.0，酸不溶性灰分不得过2.0。3重金属：重金属铅、汞、镉、铜等对人体

52、均有严重的毒害。药材由于环境污染和使用农药等原因，容易引入重金属杂质，所以中药制剂中重金属的量同样需要控制，特别是新研制的中药制剂和出口的中药制剂。中国药典(2010年版)一部收载有重金属检查法，具体操作方法可参见本教材“药物的杂质检查”中的有关内容。由于中药制剂组成复杂，部分制剂含药材粉末，所以需进行有机破坏后方能检查。有机破坏的方法有干法破坏和湿法破坏。知识链接 干破坏法是将供试品置坩埚中，先缓缓加热至炭化，再在500600炽灼至完全灰化，加酸处理后用硫代乙酰胺法检查4砷盐：中药制剂的原料药材由于受除草剂、杀虫剂和化学肥料的影响，容易引入砷。因此，控制砷盐的量是控制制剂纯度的一个非常重要的

53、方面。中国药典(2010年版)一部收载的砷盐检查法有古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。由于中药制剂在检查前必须对样品进行有机破坏，中国药典多采用碱融法破坏。案例 牛黄解毒丸中三氧化二砷的检查 取本品适量，剪碎，精密称取2.9g，加稀盐酸20ml，时时搅拌40分钟，滤过，残渣用稀盐酸洗涤2次，每次10ml，搅拌10分钟，洗液与滤液合并，置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml，加盐酸5ml与水21ml，照砷盐检测法（2010版中国药典附录F）检查，所显砷斑颜色不得深于标准砷斑。砷盐的检查也可采用原子吸收分光光度法，用砷空心阴极灯，在1937nm波长处检测，方法专属性强、灵敏度高。

54、5残留农药：药用植物在栽培过程中，为减少虫害，常需喷洒农药，土壤中残存的农药也可能引入药材中。大多数农药的残留期短，但有机氯类及少数有机磷农药能长期残留，所以需要加以控制。对接触农药不明的样品，一般可测定总有机氯量和总有机磷的量。中国药典(2010年版)一部规定了有机氯类、有机磷类、拟除虫菊酯类的测定方法，除另有规定外，均采用气相色谱法测定有关农药残留量。四 中药及其制剂的含量测定中药制剂中含有众多类别的化学成分，十分复杂，大部分中药制剂的有效成分尚不十分清楚，其药效是多种化学成分协同作用的结果。目前尚难以做到对中药制剂的全面质量控制。但根据中医药理论，结合现代科学研究，选择相关的有效成分或特

55、征性成分，建立含量测定项目和方法，对评价药物的内在质量仍然具有重要的意义。中药制剂的含量测定要在选定测定项目的前提下进行。（一）含量测定项目选定的原则： 1、首选君药及贵重药建立含量测定方法。若含量太低无法测定，则应在检查项下规定限度检查项目；若上述药物基础研究薄弱或无法进行含量测定的，也可依次选臣药及其他药测定含量。如含有毒性药，也应建立含量测定项目。 2、有效成分或指标成分清楚的，应首选测定有效成分或指标成分的含量。有效成分类别清楚的，可测定某一类总成分的含量，如总黄酮、总生物碱、总皂苷等。 3、所测成分应归属于某一单味药，若两味或两味以上药材均含有的成分，则不应选为定量指标。如处方中有黄

56、连和黄柏，最好不选小檗碱作为定量的成分。 4、待测成分应尽量与中医理论、用药的功能主治相近。如山楂在制剂中若以消食健胃功能为主，应测定其有机酸含量，若以治疗心血管病为主，则应测定其黄酮类成分。如板蓝根具有抗病毒的功效，应选择溶于水与乙醇、含量稳定的喹唑酮为定量指标。 5、若确实无法进行含量测定的，可选适当溶剂，测定浸出物含量以间接控制其质量。溶剂的选择应有针对性，水或乙醇，因其溶出物量太大，一般不选用。如含皂苷类成分可用正丁醇为溶剂测定浸出物含量。挥发油和脂溶性成分可测定挥发性醚浸出物含量。（二）中药制剂含量测定的方法 含量测定是控制中药制剂质量的重要内容。目前，中药制剂的含量测定方法应用最多

57、的是色谱法和光谱法，此外，高效毛细管电泳法(HPCE)在中药制剂分析方面的应用日益增加。其他方法如化学分析法、电化学分析法等也有应用。1高效液相色谱法：HPLC法是一种分离效能高、分析速度快、灵敏度高、应用范围广的分析方法，其重现性和准确性均优于薄层色谱扫描法，是中药制剂含量测定的首选方法。中国药典(2010年版)一部收载的中药制剂，大多采用HPLC法测定含量。（1）色谱条件的选择中药制剂分析中，多采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，即使用非极性的固定相，极性的流动相，使用反相色谱，制剂中极性的附加剂及其他干扰组分先流出，不会停留在柱上污染色谱柱。若分离酸性组分，如黄芩苷、丹参素、甘草酸等，可在流动相中加入适量酸，如醋酸、磷酸，以抑制其离解；对酸性较强的组分，也可使用离子对色谱法，常用的反离子试剂有氢氧化四丁基铵等。若分离碱性组分，如小檗碱、麻黄碱等，多采用反相离子对色谱法，在酸性流动相中加入烷基磺酸盐、有机酸盐，也可使用无机阴离子，如磷酸盐作为反离子。固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)最常用。流动相：常用甲醇-水或乙腈-水的混合溶剂。检测器：HPLC法应用最普遍的检测器是紫外检测器。其灵敏度高，线性范围宽，适宜于在