项目维生素B注射液含量测定

1、项目维生素B注射液含量测 定 一、 任务依据 【中国药典中国药典】2015版 二部 P1236 维生素维生素B B12 12注射液 注射液 本品为维生素本品为维生素B B12 12的灭菌水溶液。含维生素 的灭菌水溶液。含维生素B B12 12 （C C63 63H H8888CoN CoN14 14O O1414P P）应为标示量的 ）应为标示量的90.0%90.0% 110.0%110.0% 【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定 量稀释成每量稀释成每1mL1mL中约含维生素中约含维生素B B12 12 25g 25g的溶液，照紫的溶液，

2、照紫 外外- -可见分光光度法（可见分光光度法（通则通则04010401），在），在361nm361nm的波长处的波长处 测定吸光度，按测定吸光度，按C C63 63H H8888CoN CoN14 14O O1414P P的吸收系数（ 的吸收系数（ ）为）为 207207计算，即得。计算，即得。 1% 1cm E 二、 任务分解 1. 实验原理实验原理 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计 紫外紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫可见分光光度法是通过被测物质在紫 外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范 围内的的吸光度，对该物质进行定性和定量分围内

3、的的吸光度，对该物质进行定性和定量分 析的光学分析方法。析的光学分析方法。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处定量分析通常选择物质的最大吸收波长处 测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出 被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。 二、 任务分解 2.计算计算 计算稀释倍数 根据维生素根据维生素B12注射液【含量测定】中内容要求注射液【含量测定】中内容要求 描述，描述，“用水定量稀释成每用水定量稀释成每1mL中约含维生素中约含维生素B12 25g的溶液的溶液”。 【规格】（【规格】（1）1ml：0.05mg （2）1

4、ml：0.1mg （3）1ml：0.25mg （4）1ml：0.5mg （5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg 10 ml mg025. 0 ml mg25. 0 ml1 ug25 ml2 mg5 . 0 供试品溶液浓度 样品溶液浓度 稀释倍数 以下均以规格2ml：0.5mg为例 样品溶液：实际使用的维生素B12注射液 供试品溶液：按要求配制的每1mL中约含维生 素B12 25g的溶液。 二、 任务分解 3. 制定计划制定计划 (1)填写所需溶液、药品及仪器 药品名称药品名称规格规格数量数量用途及可用量用途及可用量 维生素B12注射液2ml：0.5mg/2盒2盒药品，1人 水纯化水50

5、0ml，1人仪器清洗、溶剂 表表1 维生素维生素B12注射液含量测定所需药品注射液含量测定所需药品 二、 任务分解 3. 制定计划制定计划 (1)填写所需溶液、药品及仪器 表表2 维生素维生素B12注射液含量测定所需仪器注射液含量测定所需仪器 仪器名称仪器名称规格型号规格型号数量数量用途用途 紫外-可见分光光度计北京通用T61台含量测定 石英比色皿石英1套含量测定 移液管10ml1支溶液配制 容量瓶100ml2支溶液配制 洗瓶500ml1支洗涤、稀释 小烧杯100ml1个稀释 胶头滴管2ml1支定容 大烧杯500ml1个废液杯 洗耳球塑料1个移液 二、二、 任务分解任务分解 二、 任务分解 3

6、. 制定计划制定计划 (3)操作步骤 测定步骤测定步骤操作内容操作内容数据记录数据记录 1.仪器检定 1. 杂散光的检查 2.波长准确度、吸光度准确度检定。 3. 杂散光的检查 定期检查 2.配制供试品溶液 精密量取一定体积定量稀释成规定浓度 的溶液。 供试品的名称、批号、 生产厂家。 3.比色皿配对 使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池 中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸 收池的透光率，如透光率相差在0.3%以 下者可配对使用，否则必须加以校正。 二、 任务分解 3. 制定计划制定计划 (3)操作步骤 测定步骤测定步骤操作内容操作内容数据记录数据记录 4.溶剂空白吸 收 将溶剂置1cm石英吸收

7、池中，以空气为空 白（即空白光路中不置任何物质）测定其 吸收光度 溶剂空白吸收= 5.确定测定波 长 除另有规定外，在规定的吸收峰2nm处， 再测几点的吸光度，吸光度最大的波长应 在规定的波长2nm以内，并以吸光度最 大的波长作为测定波长。 测定波长= nm 6.吸光度测定1.将参比液、测定液装于吸收池中。 2.以参比液为空白，测定吸光度，记录。 A1= A2= 7.记录与计算1.计算供试品的百分含量% 2.计算平均百分含量% 标示量%= 平均百分含量% 8.结果与判定1.将测得的含量与药典规定值比较，得出 结论。 2.相对偏差均应在0.5%以内。 相对偏差= 结论： 三、实验实施 （一）（一

8、）.使用前仪器的校正和检定 1.波长准确度 1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确度 允许误差，紫外区为1nm，500nm处2nm。 P55-56 （通则0401） 三、实验实施 （一）（一）.使用前仪器的校正和检定 1.2 波长准确度检定方法 1.用低压汞灯检定 2.用仪器固有的氘灯检定 3.用氧化钬玻璃检定 4.用高氯酸钬溶液检定 P55-56 （通则0401） 三、实验实施 （一）（一）.使用前仪器的校正和检定 2.吸光度准确度 精密称取在120干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置 1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至1000ml， 用配对的

9、1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液为空白，在235、 257、313、350nm分别测定吸光度，然后换算成 ，测得值 应符合表1中规定的允差范围。 P56 （通则0401） 1% 1cm E 三、实验实施 （一）（一）.使用前仪器的校正和检定 表表1 分光光度法允差范围分光光度法允差范围 波长波长吸收强度吸收强度吸收系数吸收系数允差范围允差范围 235最小124.5123.0126.0 257最大144.0142.8146.2 313最小48.647.050.3 350最大106.6105.5108.5 1% 1cm E P56 （通则0401） 三、实验实施 （一）（一）.使用前仪器

10、的校正和检定 3 .杂散光的检查 可按表2所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英 池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表2中规定。 表2 杂散光的检查及限度 试剂试剂浓度（浓度（%，g/ml）测定用波长（测定用波长（nm） 透光率（透光率（%） 碘化钠碘化钠1.002200.8 亚硝酸钠亚硝酸钠5.003400.8 P56 （通则0401） 三、实验实施 （二）（二）. 供试品溶液的配制供试品溶液的配制 维生素维生素 B12注射液注射液 10.00ml 100ml 平行配制平行配制2份份 水水 1.移液管使用移液管使用 三、实验实施三、实验实施 三、实验实施 1.移液管使用移液管使用

11、移液管、刻度吸管 移液管的的拿持 润洗 三、实验实施 1.移液管使用移液管使用 吸液 调节液面 放出液体 配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容 积一般不少于积一般不少于5ml。含量测定时供试品应称取。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比份，如为对照品比 较法，对照品一般也应称取较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品份。吸收系数检查也应称取供试品2 份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在0.5%以内。作鉴以内。作鉴 别或检查可取样品别或检查可取样品1份。份。 三、实

12、验实施三、实验实施 （二）（二）. 供试品溶液的配制供试品溶液的配制 P57-58 2.容量瓶的使用容量瓶的使用 三、实验实施三、实验实施 用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，加水至距标线约用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，加水至距标线约1cm处处 ，等，等12分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯 液面下缘与标线相切，然后盖上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手液面下缘与标线相切，然后盖上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手 指拿住瓶颈标线以上部分，右手指尖托住瓶底，将容量瓶倒转，使气指拿住瓶颈标线以上部分，右手指尖托住瓶底，将

13、容量瓶倒转，使气 泡上升到顶，使瓶振荡，正立后再次倒转进行振荡，如此反复泡上升到顶，使瓶振荡，正立后再次倒转进行振荡，如此反复1520 次以上，使瓶内溶液混合均匀。次以上，使瓶内溶液混合均匀。 2.容量瓶的使用容量瓶的使用 三、实验实施三、实验实施 容量瓶 容量瓶的检漏 转移 初混 定容 三、实验实施三、实验实施 （二）（二）. 供试品溶液的配制供试品溶液的配制 加水至距标线约1cm处，等12 分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流 下后，再用滴管滴加水至弯液面 下缘与标线相切 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 1 .实验仪器的准备实验仪器的准备 开机自检

14、开机自检 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 1 开机自检结束，按开机自检结束，按Enter 键进键进 入仪器界面入仪器界面 按按Start键进入测量界面键进入测量界面 1 .实验仪器的准备实验仪器的准备 进入测量界面进入测量界面 按按GOTO 键输入测量波长，键输入测量波长， 输入数字输入数字“361”按按Enter 键确键确 认输入认输入 2 3 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 2. 吸收池（比色皿）的配对检查吸收池（比色皿）的配对检查 清洗清洗 比色皿的操作比色皿的操作 装液装液擦拭擦拭放置放

15、置 三、实验实施三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 2.吸收池（比色皿）的配对检查吸收池（比色皿）的配对检查 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以池体积 的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭 干净，检视应无残留溶剂。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相 同。 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 2. 吸收池（比色皿）的配对检查吸收池（比色皿）的配对检查 比色皿的配对（测透光率）比色皿的配对（测透光率） 进入透光率测量界面进入透光率测量界面 透光率相差应在透

16、光率相差应在0.3%0.3%以下，否则必以下，否则必 须加以校正值须加以校正值 三、实验实施三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 2. 吸收池（比色皿）的配对检查吸收池（比色皿）的配对检查 使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干，防尘保存，吸收池 如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍 加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不 宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损 坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附 于吸收池表面。 P57 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度

17、计的使用 3. 溶剂空白吸收溶剂空白吸收 对溶剂的要求 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶 剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇。 另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在检查所用的溶剂 在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中， 以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收光度，溶剂和 吸收池的吸光度应符合表3规定。 P57 （通则0401） 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 3. 溶剂空白吸收溶剂空白吸收 表表3 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度

18、的规定以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定 波长范围（波长范围（nm） 220240 241250 251300 300以上以上 吸光度吸光度 0.40 0.20 0.10 0.05 每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶剂。 P57 （通则0401） 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 3. 溶剂空白吸收溶剂空白吸收 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 3. 溶剂空白吸收溶剂空白吸收 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 4.确定测定波长确

19、定测定波长 1 2 3 在给定波长在给定波长2nm处测样品吸处测样品吸 光度，选择实际最大吸收波长光度，选择实际最大吸收波长 测定波长是多少？测定波长是多少？ 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 4.确定测定波长确定测定波长 测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰2nm处，再测几点的吸 光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作 为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长 加减2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。 P58 （通则0401） 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见

20、分光光度计的使用可见分光光度计的使用 5. 供试品溶液的吸光度值的测定供试品溶液的吸光度值的测定 三、实验实施三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 5. 供试品溶液的吸光度值的测定供试品溶液的吸光度值的测定 关于皿差问题： 由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试 品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。 （通则0401） 三、实验实施 （三）（三）. 紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用 5.供试品溶液的吸光度值的测定供试品溶液的吸光度值的测定 供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光 度以在0.30.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合所用 仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。 P58 （通则0401） 三、实验实施 （四）（四）. 实验数据的记录与计算实验数据的记录与计算 1. 公式 %100 b % %1 cm1 标 供 稀释倍数 百分含量 C E A 三、实验实施 （四）（四）. 实验数据的记录与计算实验数据的记录与计算 2.原始数据记录表 紫外可见分光光度法：紫外可见分光光度法：记录仪器型号，检查溶剂是否符合要求的数据， 吸收池的配对情况，供试品与对照品的称