HIV抗体检测方法PPT课件

1、HIV抗体检测,规范性文件引用,艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-有效版本） 艾滋病病毒抗体快速检测技术手册（中国疾病预防控制中心，2011年版）,HIV抗体检测实验室要求,应符合国家对实验室生物安全的 有关要求 实验室的质量控制按本规范相关章节规定,HIV抗体检测的目的和要点,HIV抗体检测的目的 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 HIV抗体检测的要点 1.严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 2.结果判定以试剂盒说明书为标准。,HIV抗体检测的目的和要点,3.筛查试验有反应，须作补充试验。 补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、

2、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。,HIV抗体检测的目的和要点,4.筛查试验无反应，不应做补充试验。 5.对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。,常规HIV抗体检测方法,试剂和样品 试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。 样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。,筛查方法,酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）

3、 ：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果 快速检测（RT）及其它检测试验 (1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)免疫渗滤试验 (3)免疫层析试验,酶联免疫吸附试验（ELISA）,HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体 HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体 用酶标仪测定结果 有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,ELISA试验中可能出现的问题和原因分析,ELISA试验中可能出现的问题和原因分析,ELISA测定中的干扰因素,内源性干扰因素 外源性干扰因素,内源性干扰因素,人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程

4、度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等,外源性干扰因素,常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等,酶联免疫吸附试验（ELISA）,优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存 用途：流行病学监测及临床大量标本的检测,化学发光或免疫荧光试验,采用发光或荧光底物 既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体 酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物 用发光仪或荧光仪测定结果,全血样品 加50ul样品于样品垫中,手指血方法,静脉血方法,加一滴缓冲液,15

5、分钟内读取结果,快速检测（RT）及其它检测试验,病人条,质控条,快速检测（RT）及其它检测试验,优点: 快速 单份标本检测 不需额外试剂或设备 操作简便 缺点: 肉眼判断较主观 价格较贵 结果不易保存（建议拍照保存）,HIV筛查试剂的选择,检测目的 实验设施条件 价格 其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等,HIV抗体筛查结果的意义及处理,阴性：真阴性 未感染或暴露于HIV病毒 假阴性 注意窗口期 阳性：真阳性 感染或暴露于HIV病毒 假阳性 非特异性反应 操作失误 处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均

6、有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。,HIV抗体确证试验,确证试验的试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确证样品： 可采用血清、血浆、滤纸干血斑 确证试验方法： 免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA） 。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。,HIV确证试剂产品,HIV抗体WB确证实验结果（MP）,IMT,MP确证试剂盒判定标准：,WB不确定结果,原因：HIV感染早期、HIV感染晚期、非特异性反应、污染 依据：流行病学资料；临床表现；WB条带等 处理：核酸检测、2-4周后随访、带型

7、消失或无进展、出现新带型、重采血,HIV抗体 母亲 HIV 抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染 出生时母亲的抗体，8090% 在生后 912 个月消失，出生后 18 个月基本上全部消失 18 个月后儿童 HIV抗体仍然阳性，视为自身感染产生的抗体,18个月以下婴幼儿的HIV诊断,婴幼儿HIV感染的抗体检测,适用于： HIV感染产妇所生婴幼儿； 母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。 婴儿12个月时进行HIV抗体检测 阴性排除感染，纳入正常儿童保健； 阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染。,结

8、果报告,筛查报告 HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，,结果报告,复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。 HIV抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。,结果报告,确证报告 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。 符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。,结果报告,符合HIV抗体阴性判断

9、标准，报告“HIV抗体阴性”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测或2-4周后随访，尽早明确诊断。 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定”，在备注中应注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。 HIV抗体确证检测报告应在收到样品后的7个工作日内发出。,质量控制,酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 试剂盒内部对照 室内质控品 Levey-Jennings质控图 室内质控其他方式“即刻法”质控,质量控制,快速法抗体检测质控 试剂内对照 室内质控品对照 开展抗体相关检测的实验室须参加有资质机构组织的能力验证，或室间比对。,艾滋病抗体快速检测质量控制,依据艾滋病病毒抗体快速检

10、测技术手册 （2011年版）第8章,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测前质控： 1.样品要求唯一编号，检测前应仔细核对。 2.检测点的环境温湿度应符合检测试剂盒说明书的要求，并做好相关的记录。 3.保证试剂在有效期内使用。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测过程质控： 1.做好实验过程中相关信息的记录：样品、检测试剂、操作者等。 2.保存在冰箱的试剂需在室温平衡后再使用；剩余的试剂条应立即封存冷藏；室温性下保存的试剂也应避免高温。 3.按照试剂厂家提供的说明书严格操作。（时间） 4.判定结果时，质控带必须出现，实验才能成立，否则需要重做并查找原因。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测后质控： 1.判

11、读结果时应保证光线充足。对难以判读的条带建议又两人判读。 2.复核样品编号后填写实验结果。 3.清洁并处理实验废弃物。 4.发放规范的检测报告，整理实验过程中的各项记录存档。,图5 免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程,图9血液抗原抗体筛查试验流程,谢谢！,HIV抗体检测的目的和要点,4.筛查试验无反应，不应做补充试验。 5.对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。,常规HIV抗体检测方法,试剂和样品 试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。 样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。,HIV抗体确证试验,确证试验的试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确证样品： 可采用血清、血浆、滤纸干血斑 确证试验方法： 免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA） 。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。,质量控制,快速法抗体检测质控 试剂内对照