维生素C含量测定方法综述

1、维生素c含量测定方法综述,摘要,目前研究维生素c测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。本文对近年来有关维生素c的测定方法进行了综述。,关键词,维生素c 滴定法 光度分析法 高效液相色普法等,概述,维生素c是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素c有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素c能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素c的含量，对饮

2、食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色谱法等。,维生素c的结构式,维生素c：六碳的多羟基内酯,1 滴定法测定维生素c,1.1 2，6一二氯靛酚法 1.2 微量滴定法,2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素c含量,其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 维生素c具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素c,2，6-二氯靛酚法,原理,2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。,2，6-二氯靛

3、酚法,方法,取本品适量（约相当于vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀； 精密量取稀释液适量（约相当于vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫瑰红色,并持续5s不褪； 空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。 计算： (v-v0) f t w,w 标示量,标示量%=,反应摩尔比,100,维生素c 2,6-二氯酚靛酚 维生素c 2,6-二氯酚靛酚 （还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型）,+,+,=,2,6-二氯酚靛酚

4、染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。,碘量法,原理：由于维生素c分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定vc ec6h6o6/c6h8o6=0.18 ,ei2/i-=0.535 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点 反应式：,碘量法,碘的浓度由已知浓度的na2s2o3标准溶液标定 反应式： 计算式： wvc=c(i2)v(i2)m(vc)/m(vc ) *100%,碘量法,注意 ！ 测定时：加hac使溶液呈弱酸性 原因: (1) vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚 (2)i2在碱性介质中会发生歧化反应 加hac可减少vc的

5、副反应，避免实验误差,电位滴定法,原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点. pt为指示电极，甘汞作参比电极 e池e+-e-+e液接电位ei2/i-+k(常数),电位滴定法,原理(具体来说:) 随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化； 从而指示电极电位发生相应变化； 导致电池电动势发生相应变化； 计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。,电位滴定法,右图：电位滴定法基本仪器装置 计算式：(与碘量法相同) wvc=c(i2)v(i2)m(vc)/m(vc ) *100% 优点： 解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法

6、指示终点的问题,2 分光光度测定维生素c,2.1 2，4一二硝基苯肼分光光度法 2.2 钼蓝比色法 2.3 其他方法,2，4一二硝基苯肼分光光度法,原理： 维生素c在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸 反应式：,2，4一二硝基苯肼分光光度法,ph5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸 二酮古洛糖酸,2, 4一二硝基苯肼分光光度法,脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎 脎在500nm波长有最大吸收 脎的结构：,分光光度法,样品溶液与vc标准溶液按上述方法同样处理 500nm处测吸光度 下图：721型分光光度计,钼蓝比色法,马占玲等用钼蓝比色法测定青椒

7、中还原型维生素c含量的基本原理和方法。测定波长839 nm，维生素c含量在00040024 mgml范围内呈线性关系，回收率为972。该方法简单、快速、准确。,钼蓝比色法,逯家辉等提出了一种测定维生素c的新方法，它是基于folin b试剂与抗坏血酸在ph=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸，反应产物在910 nm波长处有最大吸光度进行定量分析。该方法的线性范围为0500gml，相关系数r=0999 86，回收率为981210215。,差示旋光法,原理,方法,结果,维生素c片在不同ph值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变 差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量,讨

8、论,与,差示旋光法,方法,text,1）标准溶液的配制 准确称取维生素c精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100ml容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/ml的维生素c标准溶液。,text,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,2）比旋光度与溶液ph值的关系 量取10.0ml维生素c标准液于50ml量瓶中,用水稀释至50ml。测定溶液的ph及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的ph及其旋光度,得到维生素c溶液的ph及旋光度关系,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,选定ph为2.2和6.2,差示旋光法,2

9、）差示旋光度与溶液浓度关系 吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0ml的维生素c标准液各两份,分别置于50ml的容量瓶,一份用ph2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用ph6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。 文献结果：线性方程为a=0 205*c+ 005，r=09964,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,3）辅料干扰试验 取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、edta、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50ml的容量瓶,一份用ph2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用ph6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种ph

10、值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素c含量的测定不干扰。,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,4）稳定性试验 同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。 文献结果：差示旋光度基本不变,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,5）回收率试验 精密称取维生素c精制品500.0mg两份，分别置于50ml容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50ml溶液，测定差示旋光度。 文献结果：平均回收率为97.8，变异系数cv为1.03,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,方法,text,6）样品测定 取维生素c片剂10

11、片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50ml溶液(相当于含vc 20mg/ml)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。,text,原理,讨论,方法,结果,与,差示旋光法,方法,text,1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液时使用新沸冷却水,同时加人edta作为稳定剂； 2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶解，必须过滤除去，然后测定滤液的差示旋光度。,text,原理,讨论,方法,结果,与,3 高效液相色谱法测定维生素c,3.1 hypersilc8色谱柱法 3.2 venusilxbpc18柱法 3.3 其他方法,hypersilc

12、8色谱柱法,采用hypersilc 8色谱柱，用01低浓度的草酸作流动相，陈昌云等采用005 moll磷酸二氢钾缓冲液：甲醇=80：20 (vv)作流动相。流速为10mlmin，二极管阵列检测器，检测波长为254 nm。,3.2 venusilxbpc18柱法,系统采用venusilxbpc18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1 mlmin，检测波长240 nm；维生素c浓度在01-10 mgml范围内有良好的线性关系。该方法回收率9989，标准偏差091，操作简便、灵敏、可靠,薄层扫描法,原理 维生素c具有 较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量

13、地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。,薄层扫描法,操作方法与结果 （1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠 (dcp-na)溶于无水乙醇配成0.05%的dcp-na乙醇溶液，滤纸在盛有dcp-na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。,薄层扫描法,（2）缓冲溶液的配制 称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1m 氢氧化钠 420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的ph应为3.5。否则，用酸或碱调整 ph值，保存于冰箱中。,薄层扫描法

14、,3）扫描条件确定 在制备的染料试纸上定量点上维生素c对照品进行扫描 ，维 生素 c在 290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择1=290nm， 2=420nm双波长反射式锯齿扫描。,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,4）线性实验 4.1）对照品溶液的配制 精密称取维生素c标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素c标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。 4.2）测定 用5l定量毛细管，分别吸取上述溶液各5 l，点于试纸上 。点样后晾干，并将试纸 固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定a 的积

15、分值 (峰面积)作为纵坐标y ，点样量为横 坐标x，得一直线方程 y=15692x+130225，r= 09991,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,方法,text,5）样品的含量测定 取维生素 c片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生 素 c溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 ，然后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素c片中的维生素c含量。,text,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,6）回收率实验 精密称取维生素

16、c对照品20mg，其它原辅料适量，置 10ml容量瓶中，加缓冲液稀释至刻度，振摇，滤过 ，弃初滤液。分别吸取续滤液与对照品维生 素 c液各5 l点于同一试纸上，按上述条件进行扫描测定。,薄层扫描法,点样时各点间距应大于10mm，扫描测不定期波长可做少量变动，但每次测定必须固定同一测定波长 点样量 在38l之间线性关系较好，当点样量为10 l，线性关系较差。,原理,方法,结果,讨论,与,结束语,总之，维生素c的测定方法很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质终点不易判断，分光光度法操作费时，高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，方法灵敏，选择性好，有较好的发展前景。毛细管

17、电泳n51是近几年新兴的分析方法，具有效率高、分析时间短、样品处理简单等特点，但有待于进一步完善。,参考文献,1吴春艳水果中维生素c含量的测定及比较j武汉理工大学学报，2oo7，29(3)：9091 2王元秀，庄海燕微量滴定法测定猕猴桃中维生素c的含量j1济南大学学报(自然科学版，2001，15(4)：374， 3张颖，等不同产地枸杞子中维生素c含量测定j中国医院药学杂志，2004，24(8)：500501 4袁叶飞，甄汉深，欧贤红分光光度法测定大枣中的维生素c含量j安徽中医学院学报，2006，25(2)：40-41 5马占玲，等青椒中还原型维生素c含量的测定j渤海大学学报(自然科学版)，20

18、06，27(2)：111-113,参考文献,6逯家辉，等f0lin b分光光度法测定蔬菜中维生素c的含量j分析检测，2oo5，26(8)：171172 7王艳颖，等高效液相色谱法测定草莓中维生素c含量j大连大学学报，2006，27(2)：2122 8姜波，范圣第，刘长建，花艳红菠萝中维生素c的高效液相色谱分析j大连民族学院学报，2003，5(1)：5253 9刘长建青椒中维生素c的高效液相色谱分析j大连轻工业学院学报，2004，23(3)：229230 10陈昌云，李小华，刘莉莉高效液相色谱法测定蜜柚中维生素c的含量j化工时刊，2oo7，21(8)：1921,参考文献,11王爱月，张向兵，李发生高效液相色谱法测定食品及保健品中维生素c含量的研究j】中国卫生检验杂志， 2006，16(10)：1175-1176 12雍莉，等高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中的vitcj现代预防医学，2005，32(3)：247248 13胡志群，王惠聪，胡桂兵高效液相色谱测定荔枝果肉中的糖、酸和维生