实验一：鸡血细胞融合

1、实验一：鸡血细胞融合一、实验目的1、熟悉细胞融合的理论；2、掌握 PEG 诱导的细胞融合方法。二、实验原理1、细胞融合原理 两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。在通常情 况下，两个细胞接触并不发生融合现象， 因为各自存在完整的细胞膜， 在特殊融 合诱导物的作用下， 两个细胞膜发生一定的变化， 就可促进两个或多个细胞聚集， 相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。利用PE筍导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。 学者们一般认为，PE（改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双 层中磷脂分子发生疏散、 进而使其结构发生重排， 再加上膜

2、脂双层的相互亲合以 及彼此间表面张力的作用， 引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起 , 使两 细胞的胞质沟通 , 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。不仅能产生同种细胞融合、种 间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。细胞融合 （Cell fusion） ， 即在自然条件下或用人工方法 （ 生物的、物理的、化学的 ） 使两个或两个以上的细 胞合并形成一个细胞的过程。 人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合， 也 能产生种间细胞的融合。2、细胞融合方法 诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电 融合。1. 病毒诱导融合：有许

3、多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的 仙台病毒（HVJ，为RNAI毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸 附许多病毒粒子， 接着细胞发生凝集， 几分钟至几十分钟后， 病毒粒子从细胞表 面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合， 胞浆相互交流， 最后形成融 合细胞。2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、 钙离子、水溶性高分子化合物、 水溶性蛋白质和多肽， 其中最常用的是聚已二醇（PEG 。PE（用于细胞融合至少有两方面的作用：可促使细胞凝结；破坏互 相接触处的细胞膜的磷脂双分子层， 从而使相互接触的细胞膜之间发生融合， 进 而细胞质沟通，形成一个

4、打的双核或多核融合细胞。3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然 后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。所有的细胞融合方法都有其各自的优缺点，我们在本次实验中采用 PE（诱导 细胞融合的方法。三、实验材料和用品1材料： 鸡血红细胞；2. 器材和仪器：显微镜、离心机、刻度离心管、试管、载玻片、盖玻片；3. 试剂：Alsever 液（pH7.4）、0.85 %生理盐水、GKN液、50% PEG四、实验步骤1 取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4C下 保存）；2、取上步中所得悬液1ml+4ml 0.85%的Na

5、Cl溶液，进以下三次离心处理： 1200r/min离心5min （去上清液再加入至5ml的0.85%NaCI溶液）； 1000-1200r/min离心5min （去上清液再加入至5ml的0.85%NaCl溶液）； 10001200r/min 离心 7min ；3、 将上步最后一次的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml）,加入GKN 液至1-2ml，使之成10%的细胞悬液。4、取上述10%的血球悬液1ml，加入3ml GKN液，使每毫升含血球15000 万个，即15X 107个/ml。5、取步骤4中所得悬液1ml+0.5ml 50%的PEG液，混匀滴片，再常温下2-3min 后即可镜下观察。五、实验结果图一：鸡血细胞融合现象光镜观察（10X 40）融合中有两核的细胞图二：鸡血细胞融合现象光镜观察（10 X 40）细胞刚开始融合六、讨论与结论聚乙二醇分子能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类 分子发生疏散和重组，使细胞发生融合，形成融合细胞。本次实验用聚乙二醇处 理鸡红血细胞并制片利用显微镜观察。由实验图片可得，照片中鸡血红细胞两个或者更多出现不同程度的相互融 合，但总体来说融合率并不高的。经分析主要是以下原因：由