突发性耳聋患者糖皮质激素受体与激素敏感性关系的研究

1、学位论文独创性卢明 学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名（手写）： 签字日期： 年月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 南昌文学 有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部

2、或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名（手写 导师签名（手写）：签字日期： 年月日 字日期： 年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位： 电话：通讯地址： 邮编：隔偏曲患者。应用逆转录多聚酶链反应（）法检测各组外周血单个核细胞中、的相对表达水平以及比例与糖皮质激素敏感性的关系。 结果： （）、三型中治疗无效组、治疗敏感组与对照组之间均有和表达，治疗无效组与治疗敏感组相比，差异无显著性，无统计学意义（）；与对照组相比，其表达差异也无显著性，无统计学意义（尸）； （）、三型中治疗无效组水平与治疗

3、敏感组相比显著升高，差异具有统计学意义俨）；与对照组相比显著升高，差异具有统计学意义（尸）； （）、三型中治疗无效组王与治疗敏感组相比比值降低，差异有统计学意义（）；与正常对照组的比值降低，差异有统计学意义（尸）。 结论：在突发性耳聋患者中，亚型在中表达的强弱与治疗疗效密切相关。表达越强，比例越低，导致疗效不敏感。 关键词： 耳聋，突发性；受体，糖皮质激素：逆转录聚合酶链反应 ： （）、 （） （）， ： （）， ， （ ）， ， （） 、 （ ） ： （） ， ， （尸） ， （） （尸） （） （ ） ： ， ：，：，； 目录 目录第章引言第章资料与方法 实验资料 实验对象 分组及分型 治

4、疗方案 疗效分级（济南标准） 材料与试剂 主要的化学和分子生物学试剂一 主要仪器 、引物序列 实验方法 人外周血单个核细胞（）的分离 总的提取 总产物的鉴定 逆转录：合成： 扩增、分析及鉴定 统计学处理 第章结果 产物 平坦型、的表达及组之间的比较 中高频型、的表达及组之间的比较 低中频型、的表达及组之间的比较第章讨论 第章结论 目录致谢 参考文献攻读学位期间的研究成果综述 一 中英文缩略阋表 中英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 突发性耳聋 糖皮质激素 糖皮质激素受体 糖皮质激素受体 糖皮质激素受体【 糖皮质激素反应元件 氨基端的免疫原反应区 结合区 羧基端为激素结合 外周血单个核细

5、胞 磷酸缓冲盐溶液 脱氧核糖核酸 逆转录聚合酶链反应 光密度 互补脱氧核糖核酸 脱氧核糖核苷三磷酸 焦碳酸二乙脂 溴乙锭 矾 信使 第章引言 第章引言 突发性耳聋（ ，）简称突聋，系指突然发生的，可在数分钟、数小时或天之内患者听力下降至最低点的原因不明的感音神经性耳聋，且至少在相连的个频率听力下降以上。近几年来，突发性耳聋发病率逐年上升并趋向年轻化，已成为严重危害人们听力的耳科常见病。 自于年首次报道突发性耳聋以来，即引起学术界的广泛关注、争议与探讨，焦点主要集中在对其病因、发病机制以及治疗方案的选择上。突发性耳聋的病因目前仍不清楚，认为可能与以下因素有关： （）自身免疫性疾病等：文献报道突发

6、性耳聋属自身免疫性内耳病【】； （）内耳供血障碍学说：内耳迷路血供主要来自于迷路动脉，来自椎一基底动脉之小脑前下动脉，血管一过性的痉挛或因迷路动脉的某一终末支出现血栓或栓塞均可引起内耳供血障碍而导致突聋闭； （）迷路膜结构破裂：由于内压性，外压性等因素导致中耳腔压力改变致圆窗膜破裂，从而导致耳蜗功能障碍引起； （）病毒感染学说?阂延醒哂玫筐逭畈荆尚停椋椋螅觯桑诙镏兄圃焱环远亩锬停保担省陨喜蚩傻贾伦杂苫从杂苫唤鏊鹕硕衔费鼙诘哪谄雇感栽黾樱夷芤种苹蛩鸷艿脑硕苁鼓诙芩仿危鼙谒椎龋鹉诙植肯赴毖毖跣运鹕恕荆叮芬弧梗薄壳坝糜谥瘟仆环粤囊锖芏啵亍纳莆芬铩叛芤铩胱油雷柚图痢种蒲“迥共疽锖陀窬锏取捎谟兄葜餮仔砸

7、蜃釉谕环远讨械淖饔茫谕庖呀瞧始兀纾欤酰悖铮悖铮颍簦椋悖铮椋洌牵茫魑瘟仆涣囊幌哂靡荆保啊保?】。糖皮质激素主要通过与细胞浆中的糖皮质激素受体结合发挥各种生物学作用。自年来，等学者研究发现，在内耳中该受体广泛存在，其中耳蜗多于前庭，而耳蜗中以螺旋韧带最多，器和血管纹次之。和】等研究认为其药物学机制可能是由于：抗炎作用；血管纹酶合成增加，降低血管通透性（特别是循环免疫复合体减少）；增加耳蜗水通道蛋白和水通道蛋白的表达；糖皮质激素同时还扩张痉挛血管，降低对缩血管物质的敏感性，使微循环血流动力学恢复正常；其具有弱盐皮质作用，能影响水盐电解质的跨膜运输和转运，对维持内淋巴液的平衡有重要意义。应用糖皮质激素

8、是降低免疫介导自身免疫机能失调外显子的 末端与 相连，形成；外显子的 末端与 相连，形成另一种不含有激素结合区的羧基端而形成九。是一种单链的磷蛋 白， 主要包括三个独立的功能区（见下图） 二 竺 ！叠一 。一 如 卫 删 ， 稿 ” 图 蛋白质结构（氨基端的免疫原反应区（朋 ，）为非保守区域，是的免疫原性所在部位； 中间为结合（ ，）为高度保守。与糖皮质激素反应元件（ 鹤，）结合。位于蛋白质的中部；羧基端为激素结合（ ，），为高度保守，结合糖皮质激素及与热休克蛋白等伴侣分子结合以维持的配体亲和力和稳定性，同时与参与二聚体的形成） 第章引言 未激活状态下的定位于细胞浆，与结合后转位进入细胞核，与

9、序列中的糖皮质激素反应元件（）结合，发挥抗炎作用，这就是我们通常说指的；而的羧基端仅有不同源的另外个氨基酸，不能形成完整的激素结合区，不能和结合。此结构上的差异导致了两型受体生物学活性的差异。因此，的生物学效应主要是由所介导，（和亚型的比值的失衡与激素抵抗密切相关【】。有抑制活性的负性调节作用【】，虽然的表达量远远低于，但的异常高表达或者的表达降低与激素抵抗密切相关【】。既往一些研究还认为“是的内源性拮抗因子【 ，其通过与形成异源二聚体，竞争性地结合，呈浓度依赖性的抑制的转录激活作用，】，从而影响对治疗的反应性，导致患者对治疗不敏感。 因此，虽然具有极其重要的生理、药理作用，但如果治疗个体存在

10、糖皮质激素抵抗现象，那么必将影响糖皮质激素治疗疾病的效果，导致不同的预后。由此，激素抵抗现象是否对突聋的治疗产生影响引起了我们的关注。根据国内外激素抵抗的研究现状并结合目前突聋的治疗结果，值得我们探讨的是：）突聋治疗无效的部分患者中是否也存在激素受体亚型问失衡；）激素抵抗现象是否使得部分突聋患者激素生理及药理学效应不敏感，最终影响部分突聋患者的预后。基于这种假设，我们将突发性耳聋患者作为研究对象，通过研究的亚型的的表达，以期探讨抵抗现象发生的可能机制，使临床医生有可能早期预测患者对治疗的敏感性，减少临床盲目大剂量长期使用所造成的不良反应。 第章资料与方法 第章资料与方法实验资料实验对象 选择我

11、科年月年月住院的突发性耳聋患者例，年龄岁，平均（）岁，均经纯音测听及耳部专科等检查，符合“突发性耳聋的诊断和治疗指南（年，济南标准）【】；中的诊断标准，且资料完整；除外中耳病变、梅尼埃病、听神经瘤、大前庭水管综合征等病变，心理学评估抑郁及焦虑状态的患者不纳入研究对象；所有患者取标本前至少个月内均未接受糖皮质激素全身治疗，高血压、糖尿病等基础代谢性疾病不作为绝对入选禁忌。对照组为我科鼻中隔偏曲患者例（排除变应性鼻炎及过敏性疾病病史），年龄岁之间，平均（）岁。该临床资料取得受试对象的知情同意。分组及分型 （）按听力曲线将实验对象分为三型（组）低中频型（组）：、 、 的平均频率下降以上。中高频型（组

12、）：、的平均频率听力下降以上。平坦型型（组）： 、 、平均听阈下 降以上。 （）以上三型按疗效又分为治疗敏感组和治疗无效组。 （）对照组：我科鼻中隔偏曲患者。治疗方案 强的松以给药（每天早上点一次口服，天。如果有效，延长使用激素天；如果使用天无效，停止使用）：生理盐水银杏 第章资料与方法叶提取物，静脉滴注 。每例患者在治疗前、治疗后第天、治疗后第天、治疗后第天均行纯音测听检查。以、气导平均听阈作为诊断标准。疗效分级（济南标准） 痊愈：受损频率听阈恢复至正常，或达健耳水平，或达此次患病前水平。 显效：受损频率平均听力提高 以上。 有效：受损频率平均听力提高， 。 无效：受损频率平均听力改善不足 。材料与试剂主要的化学和分子生物学试剂 焦碳酸二乙酯（） 美国公司产品 淋巴细胞分离液（） 购自上海生化试剂二厂 ， 无核酶水， （） ， 北京天为时代科技有限公司 ， 琼脂糖 北京华美生物技术公司 ， （） 北京天为时代科技有限公司 其他试剂如碱、溴乙啶（）、氯仿、硼酸、乙醇（用水配置）、异丙醇等。缓冲液配置： 、 ，溶于，然后用调节至，加水定容至，高压蒸气灭菌，保存于室温。 配置：碱、硼酸、 （ ），加至，混匀。 第章资料与方法 琼脂糖凝胶配置：取电泳级琼脂糖（公司）加入，微波炉中加热溶解，