HBV检测PPT课件

1、乙型肝炎标志物检测,Serologic Examination of Hepatitis B,教学内容,概述（10min） 乙肝五项标志物（30min） 其它标志物（15min） 临床讨论 （15min）,Hepatitis B,教学目的,主要标志物的临床意义 检测结果的分析方法,Hepatitis B,危害和防护措施 正确的医学观念,一、乙型肝炎病毒概述,Hepatitis B,病毒类型 甲型肝炎病毒(HAV) 乙型肝炎病毒(HBV) 丙型肝炎病毒(HCV) 丁型肝炎病毒(HDV) 戊型肝炎病毒(HEV) 其它肝炎病毒,基因组类型 ssRNA dsDNA ssRNA ssRNA ssRNA,

2、传播途径 粪-口途径 肠道外途径 肠道外途径 肠道外途径 粪-口途径,Hepatitis,HBsAg Prevalence, 8% - High,2-8% - Intermediate, 2% - Low,Centers for Disease Control. /hepatitis. Accessed January 31, 2006.,乙型肝炎的世界发病情况,Hepatitis B,我国乙肝患者的基本情况,Hepatitis B,五大关键发现 乙肝患者的生活受到全方位负面影响 乙肝患者缺乏乙肝的疾病知识 乙肝患者对治疗目标缺乏正确的认识 乙肝患者的治疗药物

3、、方法欠规范 乙肝患者缺乏对疾病知识的信息来源,Hepatitis B,Hepatitis B,D.S Dane. Lancet 1970,HBV的基本性质,Hepatitis B,Pasek M. Nature 1979,Hepatitis B,HBsAg = surface (coat) protein,HBcAg = inner core protein,HBeAg = secreted protein e,HBV感染过程中抗原、抗体的产生,Hepatitis B,Pre-Core HBX,HBV,HBeAg,HBsAg,Small HBs Medium HBs Large HBS,HB

4、cAg,Poly,RNA,RNA,DNA-,DNA-,HBsAg,Anti-HBs,HBeAg,Anti-HBe,HBcAg,Anti-HBc,Pre-S1,Anti-Pre-S1,Pre-S2,Anti-Pre-S2,DNA,HBV的抗原、抗体,Hepatitis B,什么是乙型肝炎两对半?,Hepatitis B,HBs Ag,HBe Ag,?,?,Hepatitis B,什么是大三阳、小三阳？,乙型肝炎五项标志物,Hepatitis B,三、乙型肝炎主要检测标志物,Hepatitis B,酶联免疫吸附分析 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA

5、),检测方法,Hepatitis B,放射免疫分析 (radioimmunoassay, RIA),化学发光免疫分析 (Chemiluminescence assay， CLIA),(一)HBsAg的检测,1.参考值 ELISA 阴性,Hepatitis B,Hepatitis B,2.临床意义,Baruch Blumberg,(1) 感染HBV的标志物,(2) 若6个月不消失，则表明转为慢性,(3) 见于急、 慢性肝炎和无症状携带者,(4) 筛选献血员,HBsAg浓度在5ng/mL以下的有189例， 占总数的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%,低浓度HBsAg不容忽视,1ng/m

6、L以下者： 占总数的1.04% 占HBsAg阳性人群的10.3%,陈瑜等，中华检验医学杂志，2001，第3期 楼滨等，中华临床感染病杂志，2009，第3期,0.5ng/mL以下者 占HBsAg阳性人群的约5%,低水平的HBsAg检出率存在差异,ELISA Sample COI1（阴性）COI1（阳性） n % n % 0.81.0 44 28 63.64 16 36.37 1.01.5 51 25 49.02 26 50.98 1.53.0 62 9 14.52 53 85.48 3.06.0 32 2 6.25 30 93.75 合计 189 64 33.86 125 66.14,HBsAg

7、 ELISA法弱阳性标本ECLIA结果,低浓度HBsAg的准确检测对于临床确诊和流行病学监控具有重要意义,血清HBsAg是诊断HBV感染的直接证据 所谓“HBsAg阴性”的HBV感染者中，有相当一部分为血清HBsAg呈低水平而被漏检的假阴性 对于输血安全、院感控制具有重要意义 对于流行病学、病原学研究具有重要意义,高灵敏的检测对临床至关重要,2010年版慢性乙型肝炎防治指南： 对于因其他疾病而接受化疗、免疫抑制剂治疗的患者，应常规筛查HBsAg；若为阳性，即使HBV DNA阴性和ALT正常，也应在治疗前1周开始服用拉米夫定或其他核苷(酸)类似物 对HBsAg阴性、抗HBc阳性患者，在给予长期或

8、大剂量免疫抑制剂或细胞毒药物（特别是针对B或T淋巴细胞单克隆抗体）治疗时，应密切监测HBV DNA和HBsAg，若出现阳转则应及时加用抗病毒治疗,1.参考值 ELISA 阴性,(二) 抗-HBs检测,Hepatitis B,2.临床意义 (1) 感染过HBV、康复和获免疫力的标志,Hepatitis B,(2) 中和抗体，可维持数年至10余年,(3) 接种疫苗效果观察,William Rutter,Hepatitis B,抗-HBs 与 乙肝疫苗,Pediatr Infect Dis J 23(7):650-655, 2004,我国人群乙肝标志物检测,中国学校卫生.2007;27(7)7,Ma

9、laysia : 3% in HBV Carriers Singapore : 21% HBV Carriers Japan : A26% In HBV carriers USA : 24% Netherland : 36%,HBsAg /Anti-HBs 同时出现,35607例,32022例,0.022%,0.55%,ELISA,ECL,HBsAg / Anti-HBs 同时出现,HBsAg /Anti-HBs 同时出现,两种HBV亚型感染，一种亚型已经产生抗体，另外一种还没有 存在HBV的突变，常见于： 新生儿母婴感染 肝移植的患者 疫苗接种，有正常的 HBsAb 应答；同时感染免疫逃避变

10、异株,1.参考值 ELISA 阴性,(三) HBeAg检测,Hepatitis B,HBeAg与HBV感染状况,V.Rafalski.4th European Congress of Chemotherapy and Infection 2002;May 4,Hepatitis B,2.临床意义 (1) HBV复制活跃和传染性强的标志,Hepatitis B,(2) 疗效观察的指标,(3) 持续阳性表明患者易转为慢性乙肝,HBV 与 肝细胞性肝癌(HCC),Yang HI, et al. N Engl J Med. 2002;347:168-174.,12 10 8 6 4 2 0,Perce

11、nt cumulative incidence,012345678910,Year,HBsAg+, HBeAg+,HBsAg+, HBeAg-,HBsAg-, HBeAg-,Hepatitis B,HBeAg阴性的乙型肝炎及其HBV,一般出现在感染后期,Hui CK. Curr Treat Options Gastroenterol. 2007 Dec;10(6):474-82.,Hepatitis B,表现为进程性肝脏损害 预后很差,编码HBeAg的基因preC启动子区发生突变,1.参考值 ELISA 阴性,(四) 抗-HBe检测,Hepatitis B,HBe/抗-HBe血清转换(sero

12、conversion),Shiv KumarSarin, et al. The American Journal of Gastroenterology (2005) 100, 24632471,Hepatitis B,2.临床意义 (1) 病毒正被清除、复制减少、传染性降低,Hepatitis B,(3) 持续阳性表明患者转化为慢性乙肝,(2) 不是保护性抗体,抗-HBe与肝炎的转归,48%,68.3%,80%,Hepatitis B,1.参考值 ELISA 阴性,(五) 抗-HBc IgM检测,Hepatitis B,2.临床意义 (1) 感染早期诊断指标,Hepatitis B,(2)

13、HBV复制活跃、具有强传染性,(3) 多见于急性肝炎,(六) 抗-HBc IgG检测,1.参考值 ELISA 阴性,Hepatitis B,2.临床意义 (1) 感染早期的标志物,Hepatitis B,(2) 不是中和抗体,(3) 可维持多年至终生,感染过程空白期,单项抗-HBc阳性的临床意义,既往感染,Hepatitis B,低水平病毒携带,被动获得,乙型肝炎自然病程的相关指标,Serology,HBeAg,Anti-HBe,ALT level,HBV DNA level,HBsAg,Anti-HBs,Anti-HBc,Hepatitis B,慢性乙型肝炎的分期与治疗,Immune Tol

14、erant,Immune Active,Non-replicative,Resolve,Hepatitis B,三、乙型肝炎其它标志物的检测,Hepatitis B,(一) pre-S和抗-preS检测,1.pre-S蛋白,Hepatitis B,HBV外膜蛋白成份 Pre-S1 肝细胞膜受体 Pre-S2 聚合人血清白蛋白受体,2. 临床意义 Pre-S1 早期感染的指标 病毒复制活跃标志,Hepatitis B,抗Pre-S1 中和抗体 预后良好的指标,2. 临床意义 Pre-S2 病毒复制和较强传染性的标志,Hepatitis B,抗-Pre-S2 (1) 中和抗体 (2) 病毒清除的标

15、志,(二) HBV DNA检测,1. 方法 聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction，PCR) 荧光定量PCR （Quantitative Fluorescent PCR） 斑点杂交 （Dot-blot）,Hepatitis B,2. 参考值 103 Copies/ml,Hepatitis B,荧光定量PCR与乙型肝炎,Hepatitis B,HBsAg,抗-HBc IgG,抗-HBc IgM,HBeAg,抗-HBe,症状,抗-HBs,3. 临床意义,Hepatitis B,(1) 最可靠的诊断指标,(2) 用于预后判断 (3) 用于药物疗效观察,Chen G et

16、al. 55th AASLD, 2004. Abstract 1362,HBV含量与在慢性乙型肝炎病人的存活率,Hepatitis B,HBV 含量与HCC 病人的存活率,Chen G et al. 55th AASLD, 2004. Abstract 1362,Hepatitis B,2010年更新的慢性乙型肝炎防治指南中认为，HBV DNA定量检测：可反映病毒复制水平，主要用于慢性HBV感染的诊断、治疗适应证的选择及抗病毒疗效的判断。 HBeAg 阳性者，HBV DNA 105拷贝/m l（相当于20 000 IU/mL）；HBeAg阴性者，HBV DNA 104拷贝/m l（相当于200

17、0 IU/mL）。ALT水平高于正常值上限2-10倍，或ALT2倍正常值上限，但肝穿刺检查显示炎症分级2级和（或）纤维化分期2期及以上病变者应开始抗病毒治疗。同时指出，HBV DNA阳性但低于1x105拷贝/ml，病情监测3个月，HBV DNA仍未转阴，且ALT异常，则应抗病毒治疗。,HBsAg阴性 HBV DNA阳性 ALT正常,隐匿性乙型肝炎病毒感染 Occult Hepatitis B Virus Infection, OBI,复制水平低 抗原变异 单核细胞感染 免疫应答异常,Hepatitis B,S,S,122,124,138,147,HBsAg野生株,HBsAg突变株,year,选

18、择压力,I. Chemin et al.J Clin Virol 2005,False Diagnosis,99,121,124,107,137,138,139,147,149,G,D,E,D,164,R,E,145,144,F,Y,158,s-s-,s-s-,-s-s-,-s-s-,M,I,195,S,W,M,I,196,198,210,Loop 1 of a determinant,Loop 2 of a determinant,(Carman, W. J Viral Hepatitis 1997 4: 11-20, modified),疫苗逃逸突变株: T126S T131N M133L

19、 K141E D144E G145R,126,141,131,133,诊断逃逸突变株: P120T/A/QD144A T131KG145R,抗病毒耐药突变株 I195MW196S M198I,120,在变异株检测能力上考验试剂的性能,J Med Virol 79:S59S64 (2007),变异株的检出能力与试剂的设计模式,检测模式 假阴性风险 单克隆/单克隆 单克隆/多克隆 双单克隆/多克隆,通过使用多克隆抗体和多种单克隆抗体夹心法来提高变异株的检出能力,HBV DNA与血清标志物,1. 大三阳、小三阳、DNA(),Hepatitis B,符合,早期或S基因变异,HBV未完全清除,检测错误,

20、2. HBsAg()、 DNA(),3. 抗-HBs()、抗-HBc() 、 DNA(),4. HBsAg()、DNA(),三、临床讨论,Hepatitis B,HBV与肝功能,Hepatitis B,HBsAg,抗-HBc IgG,抗-HBc IgM,HBeAg,抗-HBe,抗-HBs,Liver Cell,Normal Liver,Liver demaged by HBV,Hepatitis B,ALT Normal,ALT Increased,HBV感染血清标志物检测结果的分析,HBs Ag,HBe Ag,+,-,+,-,-,-,急性HBV感染早期，复制活跃,+,-,+,-,+,+,急性

21、或慢性HB,HBV复制活跃,+,-,-,-,+,+,急性或慢性HB,HBV复制减弱,+,-,-,+,+,+,急性或慢性HB,HBV复制减弱,+,-,-,+,+,-,HBV复制停止,-,-,-,-,+,+,HBV处于平静携带中,-,-,-,-,+,-,既往HBV感染，未产生抗-HBs,-,-,-,+,+,+,抗-HBs出现前阶段,HBV低度复制,Hepatitis B,慢性乙型肝炎的自然病程,死亡 15-40%,肝硬化 10-20%,慢性乙型肝炎,再感染,Hepatitis B,代谢失调性肝硬化 5-10%,肝细胞性肝癌 15-25%,隐性感染,你的检验结果是HBsAg、抗- HBe和抗-HBc

22、阳性 ALT正常,案 例,Hepatitis B,HBs-Ag阳性6 个月 HBeAg阴性6 个月 HBV DNA 定量105拷贝/l ALT2正常值上限（ULN） 肝组织学检查有中度炎症坏死,病 例,Hepatitis B,Will I die from hepatitis B?,Most people do not die from it,Hepatitis B,Having sex without condoms with someone has hepatitis B,Sharing needles and syringes,Being born to a mother who has

23、 hepatitis B,How do I get hepatitis B?,Hepatitis B,Acute Hepatitis B 9 out of every 10 adults will get rid of the virus from their bodies after a few months.,Will I ever get rid of the virus?,Hepatitis B,Chronic Hepatitis B 1 out of every 10 adults will never get rid of the virus from their bodies.,

24、Do people living with me need to be tested?,Hepatitis B,YES! Especially HBsAg, Anti-HBs and ALT,How does my baby get hepatitis B from me?,Hepatitis B,If you have hepatitis B and a tiny bit of your blood gets inside your baby at birth,But HBeAg only dose not make sense,YES! If your baby gets a shot o

25、f hepatitis B vaccine within 12 hours of birth,Can I breast-feed my baby if I have hepatitis B?,Hepatitis B,These shots help babies bodies make antibodies against HBV (Anti-HBs),What do the baby shots do?,Hepatitis B,Babies carriers have a 1 out of 4 chance of dying from liver problems,Up to 9 out of 10 babies will end up being carriers,19 out of 20 babies who get the shots will be protected for life!,What if my baby does not get these shots?,Hepatitis B,但愿人长久 天下无乙肝,Hepatitis B,乙型肝炎血清标志物有哪些？各有何临床意义？ 观察乙型肝炎药物治疗疗效的指标有哪些？哪种最好？ 能通过胎盘的乙肝标志物是什么？ 乙肝疫苗的作用是产生那一种抗体？ 如果怀疑某人是否得了乙