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文档简介

1、实验二 小麦萌发前后淀粉酶活性的比较 一、实验目的及要求 1、学习分光光度法测定淀粉酶活力的原理与方法 2、了解小麦萌发前后的淀粉酶活力的变化 二、实验基本原理 淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，在某些植物如小麦、大麦的休眠种子中只含有-淀粉酶，-淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延迟而增高。 本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦芽糖是还原糖，能使3，5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，后者在500nm处有最大吸光度，而进行定量测定。 三、主要仪器设备及实验耗材 小麦种子，可见

2、分光光度计，离心机，恒温水浴，研钵等 标准麦芽糖，淀粉， 3，5-二硝基水杨酸溶液，氯化钠，磷酸缓冲液，石英 砂 四、实验内容和步骤 1、制作标准曲线 以不同浓度梯度的标准麦芽糖液与3，5-二硝基水杨酸反应，测定A500nm，以麦芽,糖含量为横坐标， A500nm值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、萌发小麦种子 浸泡小麦种子24h，入25恒温箱或在室温下发芽。 3、提取小麦萌发前后的酶液 1）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗10株，剪去根部，入研钵加石英砂，10ml1%NaCl，研磨成匀浆，0-4 下放置20min。离心（2000rpm，10min），测定上清酶液的总体积。 2）种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。 4、二硝基水杨酸法测定酶活力 量取待测酶液1ml，ph6.9的0.02mol/L磷酸缓冲液稀释10倍，作为酶活力测定物。按下表加各物质。,测定各管的A500nm值。 5、计算酶活力单位 总酶活力单位=C酶n V酶 式中：C酶为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度（mg/ml) n为酶溶液稀释的倍数 V酶为提取酶液的总体积（ml） 设在45 ，ph6.

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