实验7 直接抗人球蛋白实验课件

1、实验七,直接抗人球蛋白试验,1,第一部分,直接抗人球蛋白试验原理,2,直接抗人球蛋白试验原理,直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被,不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全,抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不,完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象,直接抗人球蛋白试验阳性,3,致敏红细胞,抗人球蛋白,直接抗人球蛋白试验,4,抗球蛋白试剂通常有三种,多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗,IgG,和抗,C3,两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用,单特异性抗,IgG,试剂，简称抗,IgG,单特异性抗,C3,试剂，简称抗,C3,在直抗试验中一旦出现阳性结果，

2、通常需要抗,IgG,和抗,C3,进一步分析,5,直接抗人球蛋白试验临床意义,检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于,1,新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测,2,自身免疫溶血性贫血的诊断,3,溶血性输血反应的研究,6,第二部分,直接抗人球蛋白试验操作,7,直接抗人球蛋白试验难点,难以获取致敏红细胞标本,解决方案,试剂红细胞,IgG,抗,D,血清（人工致敏,RBC,8,受检标本,红细胞悬液配制,1,抗凝全血,2ml,与抗凝剂混匀,1000g,离心,3min,分离上层血浆,2,压积红细胞的制备,NS,洗涤三次，注意离心速度及时间,1000g,离心,1min,注意操作轻柔，防溶血,3,取压

3、积红细胞配成,5,的红细胞悬液,1d,压积红细胞,19d NS,9,人工制备,IgG,型致敏红细胞（阳性对照,1,采集,3,人份,O,型,RhD,阳性抗凝全血,1000g,离心,3min,分离血浆；红细胞经生理盐水,NS,3,次洗涤后，取,3,人份,的压积红细胞各,5,滴混匀，备用,2,用一次性吸管取压积红细胞,3,滴于试管中，加入,2,倍体积,的单克隆,IgG,抗,D,血清，混匀，置于37孵育,45min,3,孵育结束取出试管,1000g,离心,2min,弃上清，用,2,倍,体积的,NS,洗涤,3,次,1000g,离心,1min,，最后加入,NS,配制,成约,5,的致敏红细胞悬液,1d,压积

4、红细胞,19d NS,，备,用,10,未致敏红细胞（阴性对照,取,3,滴,3,人份混合压积红细胞，加入,57,滴,NS,混匀，备用,无须单克隆,IgG,抗,D,血清致敏,11,标记,3,支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对,照。按下表加入各反应物,反应物,待检管,阴性对照,阳性对照,5,待检标本,RBC 1,5,阴性对照,RBC 1,5,阳性对照,RBC 1,多特异性抗球蛋白试剂,1 1 1,受检者标本检测,12,混匀,1000g,离心,15s,观察凝集反应，记录结果,如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗,C3,抗球蛋白试剂，将,未出现反应的试管置室温孵育,5min,再离心，观察凝集,实验结

5、果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性,加,1,滴,IgG,致敏,5,红细胞悬液于未出现凝集的试管中,1000g,离心,15s,观察凝集，记录结果,受检者标本检测,13,如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检,RBC,凝集,者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性,结果判定,14,标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释,放出来,待检红细胞一定要用盐水洗涤至少,3,次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋,白，以防止假阴性结果,离心时间和离心力要按标准操作,若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗,IgG,抗,IgM,或抗,C3,单特异性抗球蛋白试剂进行试验,红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球