DNA的粗提取与鉴定.pptVIP

1、一、实验原理,DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度而改变的。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可以使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶解于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。 DNA二苯胺 蓝色物,沸水浴,根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的,DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当N

2、aCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出,当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出,1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得,500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀,2.提取DNA,取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌,纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质,提取血细胞核物质,溶解核内的DNA,滤液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌,二、实验步

3、骤,析出含DNA的粘稠物,滤取含DNA的粘稠物,DNA粘稠物的再溶解,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L,用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上,在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液,过滤含有DNA的NaCl溶液,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得的溶液，滤液中含有DNA,提取含有杂质较少的DNA,步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分,3.DN

4、A的鉴定,加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色,1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌,2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精,三、实验小结,四、实验原理拓展介绍,1.DNA的释放,DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白,2.DNA与蛋白质分离,在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解

5、，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中,3.DNA的析出与获取,因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高,4.DNA的再溶解,用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物,5.DNA的沉淀和浓缩,对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na的DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将

6、混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起,6.DNA的鉴定,鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关,实验现象,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,提取DNA,A出现蓝色 B无变化,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B