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文档简介

1、医 料推荐毒理学实验二经口急性毒性试验一、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定 LD50 的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物:( 1)动物品种:健康成年 ICR小鼠,体重 18g22g( 2)样品来源:首都医科大学实验动物部2、器材:注射器( 1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。3、试剂:敌敌畏( 1400mg/ml )、苦味酸染液(标记用)。三、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。)肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性2、实验动物称

2、重、编号和随机分组选择体重在 18-22 g 的小鼠,采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组 10 只小鼠,用黄色的苦味酸饱和液标号 19,10 号小鼠不标记。3、受试化学物溶液的配制( 1)确定灌胃量: 0.1ml/10g( 2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积( 3)药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突的距离。5、毒性体征的观察和LD50 计算( 1)毒性体征的观察:染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时

3、间,观察期为30 min1医 料推荐( 2) LD50的计算:a、实验各组剂量的确定:设 5 组,每组雌雄动物各 10 只。剂量组距 d 为:lg LD100lg LD 0d1组数d 为相邻两个剂量组剂量对数之差利用 lgLD0依次加 d,取反对数,即可得出各组剂量。b、LD50的计算(见附件):lg LDX1d(PP)50kii12X k : 最大剂量的对数d :相邻两组对数剂量之差数Pi :各组死亡率i :组数C、求半数致死量的95%可信区间标准误公式:P i ( 1P i )S lgLD50dni1ni: 实验动物数。95%可信区间:lg - 1 (lgLD501 . 96 S lgLD

4、50)四、实验过程1、人员分工:本次实习同学分两个大组 (A 组和 B 组 ),分别在不同实验室。每大组分 5 个小组,分别处理雌雄动物,每小组 10 只动物。集体活动: 1、 2、 3、 4、 5 组各 1 人,进行受试物配制。2医 料推荐各小组活动:每小组 1 人(共 4 人),进行动物标记。(1-10 号)每小组 1 人(共 4 人),进行体重记录。(1-10 号)每小组 1 人(共 4 人),进行灌胃。( 1-10 号)每小组 1 人(共 4 人),根据体重吸取受试物(0.1ml/10g)五、剂量设计及受试物配制表见附件六、实验结果1、急性经口毒性试验原始记录(见附件)2 、LD50计

5、算表(见附件)3、结果计算(按照ppt 中所给的剂量设计及受试物配制表计算)lg LD 100lg LD 0d组数1=(lg500-lg100)4= (0.6990-2 )4=0.1747S lg LD 50dPi(1Pi )0.62ni1=0.1747 20 - 1 =0.0316lg LDX1P)50kd ( P2ii1=2.1747-1/2 ( 0+0.35 ) +( 0.35+0.2 )+( 0.2+0.65 )+(0.65+1 )=1.877795%可信区间: lg -1 (lg LD501.96S lg LD 50)95%可信区间: lg -1 (1.8777 1.960.0316)即: 65.433587.0162mg/Kg七、实验结论与分析1、毒性物质敌敌畏为中等毒性, 体重在 1822g之间的雄性健康成年ICR小鼠(来源于首都医科大学实验动物部) 经口急性染毒的LD 50 为 65.433587.0162mg/Kg。2、毒性特征:小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐,躁动不安,麻痹,肌张力松弛,反应减弱,同时伴有呼吸加快,口吐白沫,鼻孔溢液,尿失禁,腹泻等症状,然后在 10 分钟左右死亡。3医 料推荐3、本组小鼠为径口染毒的最低剂量,没有出现死亡小鼠,观察过程中,6 号小鼠出现亢奋, 8

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