实验二经口急性毒性试验

1、医 料推荐毒理学实验二经口急性毒性试验一、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定 LD50 的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：（ 1）动物品种：健康成年 ICR小鼠，体重 18g22g（ 2）样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器（ 1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。3、试剂：敌敌畏（ 1400mg/ml ）、苦味酸染液（标记用）。三、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。）肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称

2、重、编号和随机分组选择体重在 18-22 g 的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组 10 只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号 19,10 号小鼠不标记。3、受试化学物溶液的配制（ 1）确定灌胃量： 0.1ml/10g（ 2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积（ 3）药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。5、毒性体征的观察和LD50 计算（ 1）毒性体征的观察：染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时

3、间，观察期为30 min1医 料推荐（ 2） LD50的计算：a、实验各组剂量的确定：设 5 组，每组雌雄动物各 10 只。剂量组距 d 为：lg LD100lg LD 0d1组数d 为相邻两个剂量组剂量对数之差利用 lgLD0依次加 d，取反对数，即可得出各组剂量。b、LD50的计算（见附件）：lg LDX1d(PP)50kii12X k : 最大剂量的对数d ：相邻两组对数剂量之差数Pi ：各组死亡率i ：组数C、求半数致死量的95%可信区间标准误公式：P i ( 1P i )S lgLD50dni1ni: 实验动物数。95%可信区间：lg - 1 (lgLD501 . 96 S lgLD

4、50)四、实验过程1、人员分工：本次实习同学分两个大组 (A 组和 B 组 )，分别在不同实验室。每大组分 5 个小组，分别处理雌雄动物，每小组 10 只动物。集体活动： 1、 2、 3、 4、 5 组各 1 人，进行受试物配制。2医 料推荐各小组活动：每小组 1 人（共 4 人），进行动物标记。（1-10 号）每小组 1 人（共 4 人），进行体重记录。（1-10 号）每小组 1 人（共 4 人），进行灌胃。（ 1-10 号）每小组 1 人（共 4 人），根据体重吸取受试物（0.1ml/10g）五、剂量设计及受试物配制表见附件六、实验结果1、急性经口毒性试验原始记录（见附件）2 、LD50计

5、算表（见附件）3、结果计算（按照ppt 中所给的剂量设计及受试物配制表计算）lg LD 100lg LD 0d组数1=(lg500-lg100)4= （0.6990-2 ）4=0.1747S lg LD 50dPi(1Pi )0.62ni1=0.1747 20 - 1 =0.0316lg LDX1P)50kd ( P2ii1=2.1747-1/2 （ 0+0.35 ） +（ 0.35+0.2 ）+（ 0.2+0.65 ）+（0.65+1 ）=1.877795%可信区间： lg -1 (lg LD501.96S lg LD 50)95%可信区间： lg -1 (1.8777 1.960.0316)即： 65.433587.0162mg/Kg七、实验结论与分析1、毒性物质敌敌畏为中等毒性， 体重在 1822g之间的雄性健康成年ICR小鼠（来源于首都医科大学实验动物部） 经口急性染毒的LD 50 为 65.433587.0162mg/Kg。2、毒性特征：小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐，躁动不安，麻痹，肌张力松弛，反应减弱，同时伴有呼吸加快，口吐白沫，鼻孔溢液，尿失禁，腹泻等症状，然后在 10 分钟左右死亡。3医 料推荐3、本组小鼠为径口染毒的最低剂量，没有出现死亡小鼠，观察过程中，6 号小鼠出现亢奋， 8