肺炎病原学诊断

1、社区获得性肺炎病原学诊断,社区获得性肺炎病原学,病毒病原 合胞病毒、腺病毒 流感病毒A和B 副流感病毒1、2、3 偏肺病毒、鼻病毒 细菌病原 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 金黄色葡萄球菌 军团菌属、结核杆菌等,社区获得性肺炎病原学,非典型性病原 肺炎支原体 肺炎衣原体 沙眼衣原体 病毒感染为25 % 35%，细菌感染为2154 % ,非典型病原如支原体、衣原体感染为7 % ,两种以上病原混合11,不同年龄组儿童的常见微生物病原,不同年龄组儿童的常见微生物病原,不同年龄组儿童的常见微生物病原,儿童CAP 病原学诊断方法,病原菌分离培养 免疫学方法检测病原的特异性抗原抗体 分子生物学诊断方法,病原培养

2、分离,标本种类 血液 胸水 支气管肺泡灌洗 痰液，咽、鼻分泌物,血液培养,肺炎伴发菌血症机会510，重症和免疫抑制患者则较高。 血标本采集方便、安全，且污染机会少、特异性高，它们在病原学诊断上具有特殊意义。 重症特别是免疫抑制宿主肺炎，应尽早、多次采血作细菌和真菌培养,血液培养,血培养标本要求 采集必须在使用抗菌药物之前 采用全自动血培养仪配备的儿童专用血培养瓶 每次2瓶，在不同部位采血 采血量，儿童3-5ml，婴幼儿1-2ml。 采集后的血培养瓶应立即送往实验室,采血份数与阳性率之间的关系,采血量与阳性率的关系,胸水,对大多数伴有胸腔积液的肺炎，无论确诊与否，应该行胸腔穿刺术采集标本。胸腔积

3、液或脓胸均应做厌氧培养。 胸水是无污染标本，不论被检测出的微生物数量多少，都被认为是病原体。 细胞计数和pH测定，腺苷脱氨酶（ADA）测定对鉴别结核胸膜炎具有较好价值。 胸水的抗原检测用于疾病诊断，如流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌、军团菌或新型隐球菌,痰标本,痰培养结果应结合临床表现、直接镜检、细胞学筛选、定量或半定量培养以及所发现的微生物的致病力等加以解释。 可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌的检测，但不适于检测厌氧菌。 在无菌条件下，用负压吸引法吸取患儿会咽部以下的下呼吸道的分泌物，置灭菌三通管内,痰标本,痰涂片镜检每低倍镜视野25个中性粒细胞。 痰标本也可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的

4、病毒感染,支气管肺泡灌洗液,对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者，支气管肺泡灌洗液可作为获取标本进行病原菌培养的一种方法。 支气管肺泡灌洗液在检测需氧菌、真菌、军团菌和分枝杆菌等感染时可提高阳性检出率。有研究表明特异性高达89100%。 支气管肺泡灌洗液经低速在玻片上制成细胞标本涂片，可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染的8种病毒。 鳞状上皮细胞1中性粒细胞80为合格标本,标本采集和送检,痰和支气管肺泡灌洗液 必须在使用抗菌药物之前或停药1天后留取标本。 标本采集后1h内必须立即进行实验室处理。 室温下延搁2h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的分离率，铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌

5、则过度生长,我院呼吸道分离的主要细菌（2008-2009,肺炎链球菌869株（14 % ） 金黄色葡萄球菌692株（11%） 流感嗜血杆菌662株（10%） 肺炎支原体878株（16.3,细菌培养菌落形态,肺炎链球菌 、金黄色葡萄球菌,细菌培养菌落形态,MP培养,MP培养,MFA检测呼吸道病毒,MFA法检测呼吸道病毒,病原微生物的抗体检测,血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（CP）、军团菌。 常用方法有间接免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）、颗粒凝集试验（PA）等,MP血清学检查,ELISA法 检测MP-IgM、 MP-

6、IgG 定性或定量 PA法 检测MP-IgM 确诊MP急性感染则应强调双份血清(间隔2周)恢复期抗体滴度上升4倍或下降至原来的1/4或抗体滴度持续1:160,CP血清学检查,微量免疫荧光法(MIF)、酶联免疫吸附实验(ELISA) 抗体检测3种：IgM,IgG和IgA 初次感染(原发感染)时，IgM于发病后3周出现，IgG于发病后6一8周出现，而IgA反应较弱或不出现。 再次感染(重复感染)时，IgG常在1一2周内出现，且效价可以很高，但往往没有IgM出现或其效价很低,军团菌血清抗体检测,尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。 血清学检查: 间接免疫荧光法或酶联免

7、疫吸附试验检测特异性IgM抗体，如效价1：128或双份血清效价呈4倍以上升高可做出确定诊断,军团菌检测,IFA检测呼吸道病原抗体,分子生物学技术,优点 直接从临床标本中快速、准确地检测出包括苛养菌在内的细菌. 检测耐药基因 对耐药菌进行流行病学研究PCR方法 方法 随机扩增DNA多态性分析 限制性片段长度多态性分析PCR 多重PCR PFGE,MP分子生物学检测,PCR检测MPP1粘附蛋白：根据肺炎支原体P1粘附蛋白设计PCR引物： P1: 5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3 P2: 5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3 扩增产物209bp,双重PCR简便、快速检测军团菌,根据军团菌16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物，可以扩增 38 6bp 16SrRNA基因和 206b