华东地区规模化猪场的回肠炎流行病学调查(预防兽医学报)

1、华东地区规模化猪场的回肠炎流行病学调查曲向阳 1,2 姚火春 2* 张璇 1 黄涛 1 李喜焕 1（ 1.美国礼来亚洲公司上海代表处，上海，200020 ； 2. 南京农业大学动物医学院，江苏南京，210095 ；）中图分类号： s855.1文献标识码： c 文章编号：摘要：为调查回肠炎在华东地区三省一市规模化猪场的感染状态，我们利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒 lawsonia firsttesttm 对来自 21个规模化猪场的 321 份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测。结果表明，所检测的 21个规模化猪场100 存在回肠炎感染。而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升高。4周龄仔猪即存在感染

2、 ,感染率为 9.1% ， 8周龄（ 41.5% ） 10 周龄 (67.9%) 为主要感染开始期，12 周龄 (94.3%) 14周龄(87.9%)为感染高峰期，所检测样品的总体阳性率为59.81%，强阳性率为31.2%，结果表明：华东地区规模化猪场普遍存在亚临床型回肠炎感染。此外，检测结果受药物保健方案影响较大。关键词： 猪回肠炎；胞内劳森氏菌；流行病学调查；lawsonia firsttesttm ；粪便；epidemiological survey of porcine ileitis on intensive swine farms in eastchinaqu xiangyang1

3、,22*1,yao huochun, zhang xuan 1 , huang tao 1,li xihuan(1. elanco china,shanghai 200020,china 2.veterinary medicine college of nanjing agriculturaluniversity,nanjing,210095,china)abstract：the epidemiologicalsurvey of porcineileitis onintensive swinefarmsin east chinawascarried out by usingcommercial

4、ized lawsoniaintracellularistest kit(lawsoniafirsttest tm ). a total of321 fecal samples of pigs with different weeks-old were collected for detection ofl.intracellularis. theresults showed thatl.intracellularisinfection was 100% on the 21 intensive swine farms. the positive rateof the pig infection

5、 was increased as the pigs growing. the earliest positive samples were detected from 4week-old piglets with 9.1% positive. onset of ileitis in pigs on most of the farms was between 8 weeks oldwith 41.5% positive to 10 weeks old with 67.9% positive. pigs with the highest positive rat of ileitis wered

6、uring 12 weeks old (94.3%) to 14 weeks old (87.9%). the total positive percentage of the 321 sampleswas 59.81% including 31.2% strong positive. the results indicated that pigs were mainly displayed thesubclinical signs of ileitis on intensive swine farms in east china. however, the detection results

7、 could beinfluenced intensively by medication interfering.key words ：porcine ileitis; lawsonia intracellularis;epidemiological investigation；lawsoniafirsttesttm ;fecal猪回肠炎又名猪增生性肠炎、猪增生性出血性肠炎 , 是由胞内劳森氏菌(lawsonia intracellularis )感染所致的以回肠、盲肠、结肠粘膜呈腺瘤样增生为主要特征的一种重要猪肠道疾病。该病易感染生长育肥猪、后备母猪，严重影响猪只饲料效率与生长速度，对养猪

8、业的经济效益影响严重1 。 据 jensen 报道，在美国每头回肠炎感染猪的经济损失至少1.531 美元 2 。依据临床症状差异，可分为急性型、慢性型与亚临床型。急性型多发于新引进的后备母猪及17 周龄以上的育肥猪，健康猪群似乎更易感染急性型回肠炎3。常表现为出血性下痢，甚至突然死亡。慢性型与亚临床型回肠炎无典型临床症状，2 周龄 20 周龄的猪只均易感染4 ，无法依据临床症状进行诊断。为研究回肠炎在华东三省一市的流行情况，从2009 年 12月至 2011 年 4 月采用 lawsoniafirsttest tm回肠炎诊断试剂盒对规模化猪场粪便样品中的胞内劳森氏菌进行了病原学调查，以期了解回

9、肠炎在该地区的感染率及感染时间点，为该病的精准化策略性用药预防或疫苗免疫提供实验依据。1 材料与方法1.1样品采集从华东三省一市21 个规模化猪场随机采集特定周龄的新鲜松软或水泥样的粪便样品，各 3 克。粪便主要来自于4 周龄、 6 周龄、 8 周龄、 10 周龄、 12 周龄、 14 周龄、后备母猪与经产母猪，每阶段样品作2 3份重复，采样后立即检测。1.2检测试剂本实验采用德国microcoat 公司开发的lawsonia firsttesttm 回肠炎现场诊断试剂盒 （免疫磁珠法， 美国礼来公司拥有专利权） 。其原理与双抗体夹心elisa 类似。 通过对比颜色变化， 对胞内劳森氏菌的感染

10、状态进行半定量检测。1.3 检测方法tm1g 粪便样品与 5ml样品稀释缓依照 firsttest 试剂盒说明书进行，步骤如下。样品稀释与沉淀：将冲液在样品收集管中混合，摇匀后，放在试管架上静置5min ；样品转移： 分别使用不同的移液管吸取0.5ml的上清液至分析管 （管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠）中，设立阳性对照组 （阳性对照为 0.5ml劳森氏菌菌液） ，摇匀后，将分析管放在试管架上孵育30min ；磁珠分离与洗涤：将分析管转移至磁体架上进行磁头分离，然后洗涤2 次；加入抗体过氧化物酶共轭物：分别向分析管中加入0.5ml 的抗体过氧化物酶共轭物，摇匀后，将分析管放置在试管架上

11、孵育20min；磁珠分离与洗涤：同步骤；加入tmb显色：分别向分析管中加入0.5ml 的 tmb底物显色液，并设立阴性对照（阴性对照管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠），摇匀后， 孵育 7 分钟；结果判读： 将分析管放置在磁铁架上，记录颜色变化，阳性呈蓝色，阴性液体透明。2 结果我们从2010 年 12 月至2012 年 4 月间利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒（lawsoniafirsttest tm）对来自华东地区三省一市21 个规模化猪场的321 份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测。检测结果表明：所检测的21 个规模化猪场100 存在回肠炎感染，而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升

12、高。2.1华东三省一市总体感染状态表 1 数据显示可知， 21 个猪场100存在劳森氏菌感染， 321 份样品的总体阳性率为59.8%（ 192/321 ），且不同地区的总体阳性率差异不显著。从表 2 可知，不同生长阶段的感染率为： 4 周龄， 9.1%；6 周龄， 28.3%；8 周龄， 41.5%；10 周龄， 67.9%；12周龄、 14周龄及经产母猪均超过85。说明华东地区大部分猪场从8 周龄 10 周龄开始感染回肠炎，12周龄 14周龄达到感染高峰期。感染率随周龄的增加而升高，且呈高比例持续性感染状态（如: 后备母猪与经产母猪） 。表 1 不同省市回肠炎的发病率table 1 pre

13、valence status of porcine ileitis in different regions of east china地区猪场数感染猪场数样品阳性数率no.of positiveregionno. of swine farmspositive no./total sample no.swine farms江苏 jiangsu66（ 100% ）68/101(67.3%)浙江 zhejiang88(100%)71/120 （ 59.2% ）安徽 anhui22(100%)18/30 （60.0 ）上海 shanghai55(100%)35/70 （50.0% ）总计 total

14、2121(100%)192/321(59.8%)表 2 华东地区不同省市不同阶段猪回肠炎的感染状况table 2 positive rate of porcine ileitis at different stages in pigs地区4 周龄6 周龄8 周龄10 周龄12 周龄14 周龄后备母猪经产母猪region4 weeks old6 weeks old8 weeks old10 weeks old12 weeks old14 weeks oldgiltssows江苏0.0%43.8%50.0%93.8%100.0%100.0%75.0%100%jiangsu(0/12)(7/16)(

15、8/16)(15/16)(16/16)(12/12)3/4(9/9)浙江16.7%20.0%50.0%60.0%100%75.0%0/087.5%zhejiang(2/12)(4/20)(10/20)(12/20)(20/20)(9/12)(14/16)安徽33.3%20.0%20.0%100.0%100.0%66.7%0/0100%anhui(1/3)(1/5)(1/5)(5/5)(5/5)(2/3)(4/4)上海0.0%25.0%25.0%33.3%75.0%100%100%100%shanghai(0/6)(3/12)(3/12)(4/12)(9/12)(6/6)(2/2)(8/8)总计

16、9.1%28.3%41.5%67.9%94.3%87.9%83.3%94.6%total(3/33)(15/53)(22/53)(36/53)(50/53)(29/33)(5/6)(35/37)从表 3 可知，所检样品的总体强阳性率为31.2% 。强阳性率也随着周龄的增加而显著提高，14 周龄时高达 66.7%。后备母猪与经产母猪的强阳性率分别为66.7%与 48.6%。表 3 各生长阶段回肠炎感染强阳性率table3 strong positive rate of porcine ileitis at different growing stages生长阶段4 周龄6 周龄8 周龄10 周龄

17、12 周龄14 周龄后备母猪经产母猪汇总8 weeksgrowing stage4 weeks old6 weeks old10 weeks old12 weeks old14 weeks oldgiltssowstotalold强阳性率0/338/5313/5318/3617/5322/334/618/37strong positive31.2%(0.0%)(15.1%)(24.5%)(34.0%)(32.1%)(66.7%)(66.7%)(48.6%)rate阳性率3/3315/5322/5336/5350/5329/335/635/3759.8%positive rate(9.1%)(2

18、8.3%)(41.5%)(67.9%)(94.3%)(87.9%)(83.3%)(94.59%)2.2不同省市间感染的差异性从区域角度分析（安徽检测样本较少，不作比较），浙江、江苏与上海在感染时间与总体阳性率方面均存在差异（见表2）。从 90以上的样品呈现阳性时的周龄来看，江苏最早（10周龄），浙江次之（12周龄），上海最晚（14周龄）。总体阳性率也显示，江苏地区最高（67.3%）, 浙江次之（59.2%）, 上海最低（50.0%）。2.3未经有效药物干预的猪场的回肠炎感染状态图 2 为上海某未使用对劳森氏菌敏感药物干预的猪场的感染状态。6 周龄前猪群处于阴性状态，而8周龄后全群呈阳性或强阳性

19、，特别是种猪群( 强阳性 ) 。4 周龄6 周龄8 周龄母猪阴性阳性4 weeks age6 weeks age8 weeks agesowsnegativepositive阳性阴性母猪14 周龄12 周龄10 周龄positivenegativesows14 weeks age12 weeks age10 weeks age图 2 华东地区某猪场不同周龄猪粪样中胞内劳森氏菌的检测结果figure 2 detection results of lintracellularis in fecal samples of different week-old pigs from certain sw

20、ine farm2.4用药方案对感染状态的影响表 4 为浙江8 个猪场的各自检测结果。因各场的饲养管理、生物安全，特别是用药方案等因素不同，感染时间存在明显差异。zj6 在4 周龄即存在感染，大部分猪场出现感染的时间在8 周龄10 周龄（ 5060）， 12 周龄100感染。zj2、 zj4、 zj6 的用药方案均对检测结果产生了阶段性的影响（表4）。表4浙江8 个猪场的回肠炎的感染状况table4infection status of ileitis in 8 swine farms of zhejiang province猪场4 周龄6 周龄8 周龄10 周龄12 周龄14 周龄经产母猪f

21、arms4 weeks old6 weeks old8 weeks old10 weeks old12 weeks old14 weeks oldsowszj10/20/21/22/22/2zj20/30/32/30/33/33/32/2zj30/30/33/32/33/30/32/2zj42/21/20/22/22/2zj50/30/30/33/33/32/32/2zj62/30/32/32/33/33/32/2zj72/22/22/22/20/2zj80/20/22/22/22/2总计16.7%20.0%50.0%60.0%100%75.0%87.5%total(2/12)(4/20)(1

22、0/20)(12/20)(20/20)(9/12)(14/16)图 3为两个猪场使用不同药物方案对回肠炎干预后的检测结果。第一个猪场在8 周龄 10 周龄使用泰乐菌素（泰农 ?40，美国礼来公司产品）干预，结果呈阴性或弱阳性。而第二个猪场在第9 周龄使用金霉素干预后，10 周龄样品暂时呈阴性，但12 周龄样品再次转阳性。药物阳性阴性母猪12 周龄10 周龄8 周龄6 周龄medicationpositivenegativesows12 weeks old10 weeks old8 weeks old6 weeks old泰乐菌 tylosin素（泰农 tylan?40 40）6 周龄8 周龄1

23、0 周龄12 周龄母猪阴性阳性6 weeks old8 weeks old10 weeks old12 weeks oldsowsnegative positive金霉素 ctc图 3 不同药物对检测结果的影响figure3 the effect of different medication protocols on testing results3. 讨论目前回肠炎的主要诊断方法包括利用pcr 、免疫过氧化酶法检测粪便样品中的劳森氏菌或采用elisa 、ifa 等检测胞内劳森菌抗体5。本调查采用的firsttesttm 检测可在猪场现场快速检测粪便中是否含有感染剂量的劳森氏菌，适用于规模化

24、猪场回肠炎感染状态与防控效果的自我评估。回肠炎多发生于生长育肥阶段，但各国的开始感染时间存在差异6，故所检样品来自于4 周龄 14 周龄保育猪、生长猪、后备母猪及经产母猪。本次调查时未刻意挑选生长育肥阶段有顽固性腹泻的猪场进行检测。但总体阳性率高达59.8 ，说明华东地区规模化猪场亚临床型回肠炎感染比例很高。华东地区规模化猪场100%呈胞内劳森氏菌阳性，这与其它国家与地区的报道基本相似（美国:90.9%7 ；韩国 :100 8 ；丹麦 :93.7%9 ）。 guedes等人 10 报道：保育猪从7周龄左右开始排菌，13周龄 16周龄达到排菌高峰期。 本调查结果与 guedes等的报道基本吻合,

25、但华东地区部分猪场的感染时间更早些（ 6周龄的感染率达 28.3%）。不同省市回肠炎感染的差异性主要与饲养管理和药物保健方案有关，比如：上述上海地区5个猪场在保育后期与生长育肥前期均采用过相关药物（如泰乐菌素、泰妙菌素、替米考星）对支原体等呼吸道疾病进行干预，同时控制了回肠炎的发生。样品强阳性率的分布状态说明：14周龄以后的生长育肥猪及后备母猪正在大量排菌，其强感染所造成的经济损耗值得关注。各胎次经产母猪的阳性率均很高，说明经产母猪排菌具有持续性，可成为传染源。保育前期猪的回肠炎感染率比较低（4周龄 :9.1%;6 周龄 :28.3%）的原因可能如下。第一：药物干预。猪场保育前期常用药物如泰乐

26、菌素、替米考星、金霉素等对胞内劳森氏菌有抑制或杀灭所用。第二：母源抗体的影响。 据 guedes等人 10 发现抗体阳性的母猪所产仔猪的母源抗体可持续至5 周龄，可保护哺乳仔猪与保育前期猪免受劳森氏菌感染。随着母源抗体的消退，加之保育转群应激与卫生消毒等生物安全措施不到位等，回肠炎易感性增加。同一猪场同一生长阶段不同样品的检测结果一致性很高（表4），可说明，第一：本调查中所使用的firsttest tm 回肠炎检测试剂盒的重复性良好；第二：胞内劳森氏菌在猪群中传播速度快，感染所需病原菌量比较低。据smith 等人报道 11 ，猪只感染回肠炎所需胞内劳森氏菌数量为104 106，而每克粪便中含有

27、劳森氏菌 7108个。药物对回肠炎检测结果影响显著。故在检测前应先调查猪场的用药状况、临床症状、生长速度等信息，以便结合检测结果对猪场的感染状况作综合诊断。表4 结果显示： zj2 与 zj4 均在 9 周龄 10 周龄用药干预， zj6 在 5 周龄 6 周龄用药干预。但回肠炎在这三个猪场均复发，这可能与药物选择及使用方法有关。在药物防控方面应注意以下三点：第一：敏感药物及其药动学。所选药物应在肠道上皮细胞内有较高药物浓度 12 , 如泰乐菌素 13 、替米考星、泰妙菌素等。第二：用药周期。用药周期应在14 天以上 14 ，最好可达到 21 天；第三：用药时间点。在胞内劳森氏菌感染高峰期到达

28、之前给药可取得良好效果15 。若给药时间“太早”，猪群就无法产生针对胞内劳森氏菌的主动免疫，就潜在爆发急性出血性回肠炎的风险14 。结合本次病原学调查结果，我们建议华东地区规模化猪场在9 周龄 11 周龄或 10 周龄 12 周龄添加泰乐菌素（ 110g/ 吨 饲料），连续用药三周，以后每月脉冲式加药一周，直到上市前5 天。参考文献1smithsh, mcorists. developmentofpersistentintestinalinfectionandexcretionof lawsoniaintracellularis by piglets j. res vet sci, 1997,

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