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文档简介

1、陈皮中多糖的提取和含量测定实验方案一、实验目的1、掌握热水侵提法提取陈皮多糖的原理和操作流程；2、了解多糖物质的纯化法和原理；3、熟悉多糖含量测定的常用方法和原理；4、掌握硫酸蒽酮法测定多糖含量的原理及操作流程、注意事项；二、实验原理本实验利用热水侵提法提取陈皮中的多糖，原料用乙醇脱脂，在恒温水浴中热水侵提过滤浓缩得粗糖，再用石油醚去多糖中的色素，用Sevag试剂（氯仿：正丁醇=4:1）除去蛋白，再用无水乙醇侵提抽滤的精制陈皮多糖。可采用硫酸蒽酮法测定多糖的含量。三、实验材料与试剂材料：新鲜桔子皮（自备）。将桔子皮烘干,在粉碎机中粉碎，过60目筛,将样品粉末置于棕色磨口瓶中保存备用。试剂：石油

2、醚；无水乙醇；浓硫酸；苯酚；标准葡萄糖；活性炭 标准葡萄糖溶液（0.04mg/mL）：精确称取105干燥恒重的葡萄糖0.02g，加入适量蒸馏水溶解，定量转移到500mL的容量瓶中，定容到刻度，摇匀，即得到葡萄糖标准溶液。仪器：电热恒温水浴箱； 101-2AB型电热鼓风干燥箱； 高速中药粉碎机； FA2104(N)系列电子天平； 200分光光度计； RE52-05旋转蒸发器； SHB-循环水式多用真空泵；索氏提取器；减压过滤器；烧杯；量筒；分液漏斗；移液管；四、实验步骤1. 称取50.00g样品粉末，置于500mL圆底烧瓶中，加入500mL80%的乙醇，回流30min，脱去表面脂肪、抽滤、风干，

3、重复1次。2. 脱脂后的样品，用索氏提取器提取1小时，重复一次。3. 将两次浸提液减压过滤,去除滤渣,合并两次滤液。4. 将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至小体积，得粗多糖。5. 往粗多糖里加入1：1的石油醚，去色素。6. 挥干溶剂后，加sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）7. 然后加入4倍体积的无水乙醇，置冰箱24h,抽滤，收集沉淀。真空干燥至恒重，即得精制桔子皮多糖。 五、硫酸-蒽酮法测定陈皮多糖含量2.绘制葡萄糖标准曲线:准确量取100g/ml葡萄糖标准溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml，注入糖管中，补充纯水至1.00ml（下表）。并分别加入5ml硫酸和1ml苯酚试剂，盖塞后立即摇匀，迅速浸入冷水浴中，各管加完后一起置于沸水浴中10min，封口防蒸发，取出流水冷却，室温放置10分钟，于620nm处比色，测定吸光度值。以测得的吸光度为纵坐标，标准葡萄糖含量为横坐标，作出标准曲线。3陈皮多糖含量测定:将陈皮粗多糖以适量水溶解（约为10-80ug/ml），并准确量取1.00ml待测溶液，加入5ml硫酸和1ml苯酚试剂，同标准曲线之操作，比色测定。根据标准曲线计算糖含量实

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