山羊抗小鹅瘟高免血清的制备及临床试验

1、山羊抗小鹅瘟高免血清的制备及临床应用试验王文强1，王开功2，田新平 3（1.铜仁职业技术学院，贵州铜仁；2.贵州大学动物科学学院，贵阳花溪3.；铜仁市畜牧兽医局，贵州铜仁）摘要小鹅瘟是雏鹅感染鹅细小病毒 (Goose plaguevirus，GPV)，所引起的一种急性败血型传染病。本病病程短而且死亡率高，主要侵害1月龄以内的雏鹅和雏番鸭。10日龄以下的雏鹅发病后，其死亡率可能高达100%。目前，许多养鹅场大多使用市场上销售的抗小鹅瘟血清对鹅进行免疫和治疗，但是市场上销售的抗小鹅瘟血清其产量低、成本高，且容易导致某些鹅源疫病的传播。本文采用从贵州麻江县等地的养鹅场采集的病鹅分离出的小鹅瘟野生强毒

2、株接种于9日龄的鹅胚尿囊液制备了小鹅瘟病毒抗原，并用小鹅瘟病毒抗原加弗氏佐剂后，分多次皮下注射结合静脉注射小鹅瘟病毒抗原免疫贵州黑、白山羊。颈动脉一次性放血制备抗小鹅瘟异源高免血清，用琼脂扩散进行效价的测定，结果显示其抗体效价平均都在18以上。将制备的血清与市售的抗小鹅瘟进行了对比试验，结果市售的抗小鹅瘟血清的保护率为85%，山羊抗小鹅瘟高免血清的保护率为95%。山羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点。关键词：小鹅瘟；山羊抗小鹅瘟高免血清；抗小鹅瘟血清；对比试验小鹅瘟又称为Derzsys病、 鹅流感、 鹅肝炎、 鹅传染性心肌炎、鹅肠炎、鹅腹水性肝肾炎，它是由小鹅瘟病毒 （G

3、oose plague virus)，即鹅细小病毒(Gooseparvovirus , GPV)引起小鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、败血性、高度接触性、传染性强、病程短且死亡率高的传染病1-4。根据贵州畜疫病志和贵州大学王开功教授9报道，2001年3月，贵州省惠水、三都、修文等县的养鹅场雏鹅发生了一种疫病，病鹅的临床症状和病理变化与国内的殷震和国外的Gough R. E等人10-14报道的小鹅瘟很相似。贵州大学动物科学学院疫病实验室对从患病的鹅群中采集的病鹅心、肝和脾等组织触片染色镜检未见细菌，同时接种血琼脂平板作需氧和厌氧培养，结果为阴性。随后将病料进行处理接种于15日龄鹅胚尿囊腔，分离到一

4、株小鹅瘟野生强毒，同时证明了贵州省已经有本病的存在。随着贵州省养鹅业的迅猛发展，小鹅瘟的发生和流行，对贵州省的养鹅业造成了巨大的威胁。大多数养殖场鹅病的发生集中在每年的34月份；3周龄的小鹅易发病；发病率为80%，死亡率高达90%100%。虽然一些主要的养鹅场对一日龄的小鹅用抗小鹅瘟血清进行了免疫，但是随着鹅体内抗体的消长和许多养殖场种鹅的免疫程序还不完善，小鹅瘟还是存在着威胁。应用高免鹅制备的血清可以对小鹅瘟进行很好的预防和治疗，但是由于利用成年鹅制备高免血清产量低而且成本很高, 难以满足生产上的需要。所以我们从生产实际出发，参考了国内外的一些经验和技术，用从养殖场的病鹅分离出的小鹅瘟毒株，

5、将病毒接种鹅胚进行病原的增殖，收集到的尿囊液，制作了小鹅瘟病毒抗原，采用多次免疫和颈动脉一次性采血的方法制造出了适合我省预防和治疗小鹅瘟的山羊抗小鹅瘟异源高免血清，并与中牧实业股份有限公司成都药械厂生产的抗小鹅瘟血清进行了对比试验。对防治鹅细小病毒感染的发生和流行，保障贵州省养鹅业的健康发展具有重要的意义。1 材料与方法1.1材料1.1.1 毒株 用从贵州省惠水、三都等县的养殖场的病鹅采的心、肝、脾等病料分离出了小鹅瘟野生强毒株，由本实验室冻干保存。1.1.2 胚胎 9日龄的鹅胚由实验室购自乌当养殖场未经免疫的鹅蛋在本实验室自行孵化。1.1.3 样本 小鹅瘟标准抗原和阳性血清由扬州大学动物医学

6、系王永坤教授惠赠；免疫鹅血清系采用小鹅瘟弱毒疫苗人工免疫成年鹅制备；其它常见禽病血清如新城疫病毒(NDV) 、马立克病毒(MDV) 、减蛋综合症病毒( EDSV) 和传染性法氏囊病毒( IBDV) 均由本实验室提供；禽流感病毒（AIV）血清购自哈尔滨兽医研究所。1.1.4 试验用山羊 购于清镇养羊场，一头贵州黑山羊和一头贵州白山羊，体重30kg以上,临床检查健康。1.1.5 试验用雏鹅 由铜仁市川主科技助农有限公司提供。1.1.6 抗小鹅瘟血清 中牧实业股份有限公司成都药械厂生产，生产批号为兽药生产（2007）。1.2 方法1.2.1小鹅瘟抗原的制备 取病毒感染鹅胚的尿囊液，经4000rpm离

7、心10min,去除细胞碎片，收集上清液。于上清液中加入等量氯仿，强烈振摇，经4000rpm离心10min，舍去有机相和中间界面的杂质，收集上层水相。反复抽提34次，直至两相界面清晰。在水相中缓慢加入质量浓度400g/L的聚乙二醇（MW6000），使其终质量浓度达60g/L，调节氯化钠的质量浓度达22g/L，4静置过夜，第二天后经过10000rpm离心30min,舍去上清液，收集病毒沉淀物。取0.01mol/L的PBS (pH7. 2)适量悬浮病毒沉淀，加入0.1%的甲醛灭活后，即为尿囊液病毒抗原。正常鹅胚尿囊液的抗原制备同上述试验方法。1.2.2小鹅瘟抗原的检测 扬州大学提供的小鹅瘟诊断抗原、

8、本次试验制备的尿囊液病毒抗原、正常鹅胚尿囊液抗原,分别与小鹅瘟阳性血清、免疫鹅血清、PBS 作琼脂扩散试验。同时取小鹅瘟病毒抗原分别与GPV、NDV、MDV、AIV、EDSV、IBDV 的血清进行琼脂扩散试验。1.2.4山羊抗小鹅瘟高免血清的制备与检验1.2.4.1 山羊的免疫 每头山羊第一次皮下注射4ml病毒液弗氏不完全佐剂的小鹅瘟油佐剂疫苗；7天后进行第二次注射，每头山羊皮下注射4ml病毒液弗氏完全佐剂的小鹅瘟油佐剂疫苗；再过7天后进行第三次注射，每头山羊颈部皮下注射小鹅瘟抗原4ml/只；过7天后进行第四次免疫，每头山羊颈静脉注射小鹅瘟抗原4ml/只。每次注射之前都要抽血检验抗小鹅瘟高免血

9、清的效价。1.2.4.2抗小鹅瘟血清的制备 按照免疫程序完成的山羊，经过采血检验血清效价达到规定标准时采血。一般血清抗体效价高峰在最后一次免疫后的711天。采血前一天不喂饲料，只喂饮水，并在上午空腹的时候采血，以防血脂过高。采血时是在无菌环境下采用颈动脉一次性放血，以免所制备的血清受到污染。将收集到的血液静置于室温下等待其自然凝固析出血清。血清没有完全析出的可以将血液置于4冰箱内让其完全析出。将分离的血清用离心机离心10000rpm离心10分钟，分离的血清加生理盐水稀释使稀释后血清抗体效价达到16, 然后每毫升血清加青霉素、链霉素各1 000 IU , 再按0. 1加入硫柳汞, 充分振荡摇匀,

10、 分装于灭菌瓶中密封,贴上标签。 保存在-15冰箱中备用。1.2.4.3抗体效价测定 琼脂板制备：称取1g琼脂粉，加至100ml 8.5%的高渗盐水中，煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至55左右的时候浇玻璃平板，每个平板浇灌的琼脂厚度约为2mm，待琼脂平板完全凝固后，用打孔器在琼脂凝胶上打梅花孔，打孔之前先用一张纸做好样本后垫在琼脂平板下面，孔径为2mm，中间孔和周围孔间的距离大约为3mm。打完孔之后将琼脂平板在酒精灯上加热封底。在第四次免疫后的第七天，自颈静脉按10mL/只采血。用离心机分离血清后，将小鹅瘟高免血清作2倍比稀释，按照1：2、1：4、1：8、1：16、1：32等进行稀释，将稀释

11、的血清分别加至周围孔中，中间孔加小鹅瘟琼扩抗原，每组还要在周围孔加标准的阴性和阳性血清对照。加完样后将琼脂平板置于湿盒内，37放置2448小时后观察，结果显示贵州黑山羊和贵州白山羊的抗体效价平均都在18以上。1.2.5 山羊抗小鹅瘟高免血清的安全试验 试验之前先对血清进行无菌检验，取1ml的抗小鹅瘟高免血清，接种于新鲜血琼脂培养基上，经过37培养24小时，观察有无细菌的生长，结果为阴性时才可以用。选择1日龄小鹅16只分为四组，腹腔注射组，腹腔注射对照组，皮下注射组，皮下注射对照组，每组4只，腹腔注射组注射高免血清0.4mL/只 ，腹腔注射对照组腹腔注射生理盐水0.4mL/只。皮下注射组皮下注射

12、高免血清0.6mL/只， 皮下注射对照组皮下注射生理盐水0.6ml/只，注射后观察小鹅有无异常反应，并连续观察20天。1.2.6小鹅瘟病毒半数致死量的测定 将病毒悬液加PBS进行10倍稀释，制成10-1的小鹅瘟病毒稀释液。随后将10-1的稀释液稀释成10-2、10-3、10-4不同稀释度的病毒。具体操作如下：取3支灭菌试管排列于试管架上，并放于冰槽中，每一支试管内加4.5毫升灭菌的PBS，用无菌的注射器吸取10-1的小鹅瘟病毒稀释液0.5毫升，加入第1支试管内，弃去此注射器，将第1管内的液体混匀，成为10-2病毒稀释液；又取一注射器吸取10-2的病毒稀释液0.5毫升，加入第2支试管内，使成10

13、-3病毒稀释液；根据这种做法稀释10-4的小鹅瘟病毒稀释液。然后将所得的各种稀释度的小鹅瘟病毒感染3日龄的雏鹅，由用原病毒感染开始，每个稀释度感染雏鹅10只。每只雏鹅接种小鹅瘟病毒0.2ml/只。观察15天，记录雏鹅死亡的数量。1.2.7 对比试验 1.2.7.1试验用的材料取体重相等的一日龄雏鹅60只、用小鹅瘟病毒在鹅胚上传四代收集的尿囊液、生理盐水（六枝工矿集团大华药业有限公司）、本实验室研制的山羊抗小鹅瘟高免异源血清、市售抗小鹅瘟血清（中牧实业股份有限公司成都药械厂生产；预防量：0.5ml/只；治疗量：11.5ml/只）、注射用青霉素钠80万单位（中诺药业石家庄有限公司）、注射用硫酸链霉

14、素100万单位（济宁市洸府兽药厂）、一次性注射器10ml 、2.5ml、1ml 的若干个。试验之前先将购买的生理盐水加热煮沸6分钟，冷却后备用。1.2.7.2小鹅瘟病毒尿囊液的稀释用10ml的一次性注射器抽取10ml尿囊液加90ml生理盐水稀释10倍；在稀释10倍的尿囊液中加青霉素、链霉素各1000单位每毫升。用1ml的一次性注射器抽取1ml尿囊液加生理盐水100ml稀释100倍；在稀释100倍的尿囊液中加青霉素、链霉素各1000单位每毫升。1.2.7.3操作过程选体重相等的1日龄雏鹅60只，随机分为（A、B、C）3组每组20个。分组后将雏鹅隔离饲养，每组再分两小组，每组10只，并用红油漆做好

15、标志。用红外灯炮给小鹅保温。A组全部腿部皮下注射抗小鹅瘟血清0.6ml/只；B组全部腿部皮下注射山羊抗小鹅瘟高免血清0.6ml/只；C组全部腿部皮下注射生理盐水0.6ml/只。第二天对每组的第1小组的小鹅皮下注射稀释10倍的尿囊液0.2ml每只；每组的第2小组皮下注射稀释100倍的尿囊液0.5ml每只。观察每组小鹅的发病情况和死亡数量，观察20天。2 结果与讨论2.1结果2.1.1 小鹅瘟病毒的传代增殖的结果用小鹅瘟野生强毒XW株通过在鹅胚上传四代，收集了4896小时死亡的鹅胚尿囊液后，将胚体取出和正常的同日龄的鹅胚进行对照，结果见表2.1。对收集的尿囊液做的细菌检验，结果都为阴性。表明接种的

16、胚体不是因为细菌感染死亡，而且收集的尿囊液没有细菌的生长。多数感染鹅胚死于7296小时之间,未接种病毒的对照组鹅胚健康存活。与对照鹅胚相比较,感染胚的肝由红褐色变为土黄色,严重病例可见坏死灶;心肌色泽变淡,甚至显现瓷白色。胚胎发育阻滞,胚体充血出血,这是禽类病毒感染胚胎的普遍现象;“肝土黄色,心肌苍白”是小鹅瘟病毒感染胚胎的特征性病变。全部收集的尿囊液用鸡红细胞做了血凝实验均未显示出血凝特性,表明分离的毒株,没有污染禽副黏病毒。3只鹅胚在1824小时内死亡是因为在接种尿囊液的时候针头不小心刺破血管和胚体，导致鹅胚的死亡。表2.1 小鹅瘟野生强毒经鹅胚增殖的结果代次接种数死亡数死亡率（%）死亡时

17、间（d）胚胎病变血凝细菌检验F1221985.0（17/20）24发育阻滞F2201579.0（15/19）24胚体出血F32525100（25/25）24心肌苍白F42828100（28/28）24肝土黄色注：“”表示无血凝现象；无细菌生长。有3只鹅胚在1824小时内死亡。2.1.2 尿囊液中病毒抗原的检测结果采用小鹅瘟阳性血清、免疫鹅血清、PBS 分别检测本次试验制备的小鹅瘟病毒抗原、正常鹅胚尿囊液抗原，试验结果见表2.2。采用小鹅瘟阳性血清、免疫鹅血清、PBS 分别检测本次试验制备的小鹅瘟病毒抗原、正常鹅胚尿囊液抗原,结果本次试验制备的小鹅瘟病毒抗原与扬州大学提供的小鹅瘟阳性血清、免疫鹅

18、血清出现沉淀线,与PBS呈阴性反应，而且形成沉淀线与小鹅瘟诊断抗原相吻合,正常鹅胚尿囊液抗原与各血清均呈阴性反应。将小鹅瘟病毒抗原与GPV血清、其他禽类病毒的血清做交叉试验，试验结果见表2.3。交叉试验显示制备的小鹅瘟病毒沉淀抗原只与小鹅瘟阳性血清形成沉淀线，而与其它常见禽类病毒GPV、NDV、MDV、AIV、EDSV、IBDV 的血清不发生交叉反应。表2.2 小鹅瘟病毒抗原的检测结果检测样本小鹅瘟标准抗原分离毒XW抗原正常鹅胚抗原小鹅瘟阳性血清+-免疫鹅血清+-PBS-注：“+”表示出现沉淀线；“-”表示未出现沉淀线。表2.3 小鹅瘟病毒抗原与常见禽病血清的交叉反应检测样本 GPV血清 ND

19、V血清 MDV血清 AIV血清 EDSV血清 IBDV血清小鹅瘟病 + - - - - -毒抗原注：“+”表示出现沉淀线；“-”表示未出现沉淀线。2.1.3 安全试验的结果用山羊抗小鹅瘟高免血清接种1日龄雏鹅，观察雏鹅有无异常反应，结果见表2.5。经过20天的观察试验的雏鹅没有出现不良反应。表2.5 山羊抗小鹅瘟高免血清的安全试验结果组别只数日龄注射方式用量反应 情况实验组41腹腔注射0.4ml无不良反应对照组41腹腔注射0.4ml无不良反应实验组41皮下注射0.6ml无不良反应对照组41皮下注射0.6ml无不良反应2.1.4 小鹅瘟病毒半数致死量的试验结果用PBS对小鹅瘟病毒尿囊液进行稀释成

20、10-1、10-2、10-3、10-4后感染3日龄的雏鹅15天后得到的结果见表2.4。由于一雏鹅接种10-3稀释度的小鹅瘟病毒液仍然能够生存，则这一雏鹅在接种10-4的小鹅瘟病毒稀释液时也应当能生存，所以在积累总计栏内，各组应当存活的雏鹅的总数，是由接种较高浓度的病毒稀释液而生存的雏鹅数，向接种较低浓度的病毒稀释液而生存的雏鹅数累加而得的，如表2.4中箭头所指的方向。相反的，如果一雏鹅死于10-3稀释液的，则这一雏鹅也应死于接种10-2、10-1等比较浓的小鹅瘟病毒稀释液，所以统计死亡的雏鹅的数量时，是由接种较低浓度的病毒稀释液致死的数目，向接种较高浓度的病毒稀释液致死的数目累加而得的，如表2

21、.4中箭头所指的方向。LD50值的计算：由表2.4可以知道此小鹅瘟病毒能够致死半数雏鹅死亡的稀释度介于10-210-3之间，而且比较接近于10-2这个稀释度。其计算方法如下：距离比例=（高于50%的死亡百分数50）/（高于50%的死亡百分数低于50%的死亡百分数）距离比例=（6250）/（6213）=12/49=0.245高于50%死亡的稀释度的对数（即Log102）=2距离比例（0.245）稀释系数（10）的对数（即Log10）=0.2452+0.245=2.245，约为2.5，即为此小鹅瘟病毒的半数致死量，意思是指此小鹅瘟病毒的10-2.5的稀释液可以使一批雏鹅在皮下接种0.2毫升后有50

22、%死亡。表2.4 以不同稀释度的小鹅瘟病毒接种雏鹅的死亡情况病毒稀释度接种鹅数健鹅数死鹅数积累总计死亡比例死亡率活 死原液10 01002727/27100%10-1101911717/1894%10-21046588/1362%10-310821322/1513%10-41010 02300/230%2.1.5 山羊抗小鹅瘟高免血清与市售抗小鹅瘟血清的对比试验结果取本实验室制备的山羊抗小鹅瘟高免血清与中牧实业股份有限公司成都药械厂生产的抗小鹅瘟血清进行的对比试验结果见表2.6。试验结果显示，对照组C组的20只雏鹅在攻毒后的第710天内共死亡18只，有1只耐过，有1只由于雏鹅的相互挤压被压死，

23、死亡率为95%（18/19），而且死亡的雏鹅从外观的临床症状和剖解的病例变化都与国内外报道的小鹅瘟的临床症状和剖解的病例变化很相似（见附图），功毒成功。A组的20只雏鹅在注射了市售的抗小鹅瘟血清在攻毒后的1011天内共死亡3只，保护率为85%（17/20）。B组的20只雏鹅注射山羊抗小鹅瘟高免血清的保护组在攻毒后的15天死亡1只，保护率为95%（19/20）。表2.6 山羊抗小鹅瘟高免血清与市售抗小鹅瘟血清的对比实验结果组别只数日龄抗小鹅瘟血清异源高免血清生理盐水攻毒保护死亡稀释倍数用量只数百分率只数百分率A1010.6-100.2880%220%1010.6-1000.5990%110%B1

24、01-0.6-100.2990%110%101-0.6-1000.510100%00%C101-0.6100.200%9100%101-0.61000.511%990%注：“-”表示没有注射；第三组的第1小组有一只雏鹅在育雏舍内被压死。2.2 讨论2.2.1 在贵州省惠水、三都等县的养鹅场的雏鹅发生的疫病与国内外报道小鹅瘟的临床症状和病理变化都很相似。开始时是零星发病，两天后大面积爆发；患病小鹅的日龄最早为3日龄，最晚到30日龄；发病率为80%，死亡率高达100%。病鹅临床症状主要表现为：精神沉郁，无力，常卧地不起；少食或拒食，饮欲下降；甩头，口鼻流出无色粘液，咳嗽；拉白色或黄白色稀粪，肛门四

25、周被白色稀粪污染；发病后12天死亡，濒死期病鹅饮欲、食欲废绝；呼吸困难，倒地抽搐死亡。对病死的小鹅进行剖检时发现：口腔、鼻腔中蓄积大量无色粘液；胆囊充盈，胆汁外溢；肝脏肿大且色深，质脆，部分病鹅肝有大小不等灰白色的坏死灶；心肌及冠状脂肪有针尖状出血点；十二指肠粘膜呈弥漫性出血；特征性的病变是小肠发生急性卡他性纤维素性肠炎，特别是回肠部的肠段，整段肠粘膜坏死脱落，与纤维素性渗出物凝固形成栓子或假膜包裹肠内容物，呈香肠样栓塞；盲肠扁桃体肿大出血；泄殖腔粘膜轻度出血且腔内潴留少量黄白色液体；肾脏肿大，表面有针尖大小出血点；脑膜充血，有少量出血点。鹅群发病后曾以禽霍乱疫苗紧急免疫，并用青霉素、链霉素、

26、土霉素等抗菌素及磺胺类药物进行治疗，均未见疗效。本实验室对从患病的鹅群中采集的病料做细菌检验，并接种鹅胚，将待检抗原与标准提纯抗小鹅瘟IgG、标准抗小鹅瘟阳性血清、标准抗新城疫阳性血清、标准抗传染性法氏囊阳性血清、健康鹅对照血清及生理盐水作琼脂双向扩散试验。随后将收集的尿囊液人工感染5日龄雏鹅试验，结果对照组的雏鹅全部存活，而实验组的雏鹅全部死亡，而且临床症状与自然感染的小鹅瘟病例基本一致。确诊此次疫病是由小鹅瘟病毒感染引起的。2.2.2 采用小鹅瘟分离毒XW株通过非免疫鹅胚传代增殖,取感染鹅胚尿囊液制备小鹅瘟病毒抗原。关于小鹅瘟病毒抗原的制备国内资料报道了4 种方法。王永坤14等将感染的尿囊

27、液装入透析带经硅胶浓缩；郝虹15等采用质量浓度400g/ L 饱和度的硫酸铵盐析处理；王新海16通过差速离心法提取抗原；程由铨17等使用聚乙二醇( PEG) 沉淀病毒。硅胶反透析是一种简单的浓缩处理，不能有效地除去杂蛋白质。按照病毒学的理论，病毒一般在质量浓度450g/ L 以上饱和度的硫酸铵盐析中发生沉淀，400g/ L 的饱和度似不可取18。差速离心法需要使用40000r/ min 的转速，这不是普通实验室的离心设备所能达到的水平。本实验室已经采用PEG(MW6000) （水溶性的非离子型聚合物）法成功制备出了小鹅瘟病毒抗原。该抗原在琼脂扩散的试验中能够与小鹅瘟阳性血清出现沉淀线，而且与小

28、鹅瘟标准抗原的沉淀线相吻合，而且与其它常见禽病血清不发生交叉反应。试验结果表明，本次制备的小鹅瘟病毒抗原可以用于临床免疫效果监测和流行病学调查，对贵州省小鹅瘟的研究、诊断和防制具有实用价值。2.2 .3 用于预防小鹅瘟病毒感染雏鹅常用疫苗主要分为种鹅用和雏鹅用两种疫苗。疫苗又分为鹅胚强毒疫苗和鸭胚化弱毒疫苗两种。前者用强毒鹅胚培养物作疫苗，由于是强毒疫苗，因此仅限于小鹅瘟流行地区使用；后者是由强毒株经鸭胚传代后毒力致弱育成的，弱毒疫苗免疫原性好，保护率高，在实际生产中发挥很大的作用。预防小鹅瘟最有效、最经济的方法还是产蛋前免疫母鹅，使母鹅获得被动免疫。Kisary19氏研究指出，产蛋母鹅免疫初

29、期产生IgM，进而产生IgG，半衰期为6天，但是雏鹅1周龄时抗体完全消失，以后就可能感染小鹅瘟。母源抗体使用强毒株疫苗对鹅进行免疫，可产生较高水平的母源抗体，但有造成强毒株扩散的危险；弱毒株疫苗又存在可能因不稳定而发生毒力返强现象，造成严重的潜伏感染和排毒的危险。所以小鹅瘟的预防和治疗目前主要依靠抗血清和卵黄抗体。小鹅瘟抗血清分为同源(鹅血清)20和异源(羊、马、牛等血清)21-23抗血清。同源血清特异性高、可用作预防和治疗，但其产量低、成本高，且容易导致某些鹅源疫病的传播。近几年来, 不断有人研制了山羊、奶山羊和黄牛抗小鹅瘟高免血清, 应用于小鹅瘟的预防和治疗,获得了较好的效果。但是异源血清

30、对鹅体而言是一种抗原，易产生排斥反应，影响免疫效果。还有报道有开发研制基因工程活载体疫苗、基因工程亚单位疫苗等新型疫苗，此种方法可能是解决上述问题的有效手段，而且具有广阔的发展前景，但是制作过程很复杂，而且需要很多先进的设备和仪器，成本高，很多实验室无法完成。 2.2.4 目前，许多养鹅场使用市场上销售的抗小鹅瘟血清的抗体效价都存在着差异，而且有些还存在着免疫失败的现象。虽然用于预防和治疗小鹅瘟的疫苗和血清都存在着缺陷，但是异源抗血清产量高，制作过程简单，采用多次采血制备抗小鹅瘟高免血清还可以节约成本，可以批量生产。而且本实验室用从贵州省惠水、三都等县的养鹅场采集的病料分离出的小鹅瘟野生强毒X

31、W株用鹅胚尿囊液增质制备了小鹅瘟病毒抗原，并采用多次免疫贵州黑山羊和贵州白山羊制备出了抗小鹅瘟异源高免血清，其抗体效价达1：8以上。用山羊抗小鹅瘟高免血清进行了安全试验，试验结果显示雏鹅未出现不良反应。而且还用市场上销售的抗小鹅瘟血清与其进行了对比试验，试验结果显示，山羊抗小鹅瘟高免血清的保护率比市售的抗小鹅瘟血清的保护率高出10%。说明用山羊制备的抗小鹅瘟异源高免血清可以应用于临床预防和治疗小鹅瘟。3 小结3.1 贵州省麻江分离的小鹅瘟野生强毒XW 株能够在鹅胚上传代增殖，它能够致死鹅胚，引起相似而且非常典型的小鹅瘟胚胎病变。3.2 本次试验分离的小鹅瘟野生强毒XW 株抗原与小鹅瘟阳性血清、

32、免疫鹅血清出现沉淀线，与PBS呈现阴性反应，而且与其它常见禽类病毒血清不发生交叉反应。表明本次分离的小鹅瘟野生强毒XW 株抗原可以用于山羊抗小鹅瘟异源高免血清的制备。3.3 安全试验结果显示本次试验研制的山羊抗小鹅瘟异源高免血清安全有效，可以应用于临床对小鹅瘟的预防和治疗。3.4 测定病毒的半数致死量是测定病毒毒价的一个很重要的方法，LD50在病毒和血清的中和试验中也起到很重要的作用。小鹅瘟病毒半数致死量的测定为对雏鹅的攻毒剂量时提供了依据。3.5 山羊抗小鹅瘟异源高免血清与市售抗小鹅瘟血清的对比试验结果显示，山羊抗小鹅瘟高免血清的保护率比市售的抗小鹅瘟血清的保护率提高了10%，说明抗小鹅瘟异

33、源高免血清的保护作用保护作用较强，用山羊抗小鹅瘟高免血清防治小鹅瘟有较好的防治效果。Study and application of High-Immunized serum fromgoat source against gosling plaguewang wen-qiangGuizhou.tongren , China )AbstractGoose Plague(GP)，an acute infectious disease lost blood type in gooes, was caused by goose parvovirus(GPV), Short course of the

34、 disease and high mortality, mainly against the less than 1 month old and young goslings Muscovy. Following the 10-day-old goslings morbidity, mortality rate could be as high as 100 percent. At present, that anti-plague serum on Goose in market was used in many Goose farm was immunized and treated to Go