医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测（可编辑）

医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测中国组织工程研究与临床康复第13卷第38期20090917出版基础实验JOURNALOFCLINICALREHABILITATIVETISSUEENGINEERINGRESEARCHSEPTEMBER17,2009VOL13,NO38医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测卢大伟,奚廷斐,冯晓明,孙雪DETECTIONOFUNKNOWNRESIDUALSOLVENTSOFSODIUMHYALURONATEPRODUCTLUDAWEI,XITINGFEI,FENGXIAOMING,SUNXUEABSTRACTNATIONALINSTITUTEFORBACKGROUNDAMASSOFUNKNOWNREMAINSAREFOUNDEDINSODIUMHYALURONATEPRODUCTWHENITWASTESTEDFORQUALITYCONTROLTHECONTROLOFOBJECTIVETOQUALIFYANDQUANTIFYUNKNOWNRESIDUALSOLVENTSOFSODIUMHYALURONATEPRODUCTANDDETERMINEHAZARDSPHARMACEUTICALANDACCORDINGTOSTANDARDTOXICOLOGICALDATABIOLOGICALPRODUCTS,DESIGN,TIMEANDSETTINGAQUALITYANDQUANTITYSTUDYWITHCOMBINEDGASCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRYWASBEIJING100050,CHINAPERFORMEDATNATIONALINSTITUTEFORTHECONTROLOFPHARMACEUTICALANDBIOLOGICALPRODUCTSFROMMAYTOJUNE2007MATERIALSEXPERIMENTALSAMPLESWERESPOTCHECKED,ANDPURIFIEDWATERWASALSOUSEDLUDAWEI,METHODSTHESAMPLESWEREQUALIFIEDANDQUANTIFIEDUSINGCOMBINEDGASCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRYSTUDYINGFORMASTERSMAINOUTCOMEMEASURESMETHANOL,XYLENEANDETHYLBENZENEWEREQUALIFIEDANDQUANTIFIEDDEGREE,NATIONALINSTITUTEFORTHERESULTSCOMBINEDGASCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRYDEMONSTRATEDTHATRESIDUALSOLVENTSINTHESODIUMHYALURONATECONTROLOFPRODUCTSWEREMETHANOL,XYLENE,ANDETHYLBENZENETHEQUANTIZATIONOFMETHANOLWAS414365G/ML,THEQUANTIZATIONOFPHARMACEUTICALANDOXYLENEWAS019G/ML,ANDTHEQUANTIZATIONOFETHYLBENZENEWAS022G/MLBIOLOGICALPRODUCTS,CONCLUSIONMETHANOL,XYLENE,ANDETHYLBENZENEWEREFIRSTLYIDENTIFIEDASRESIDUALSOLVENTSINSODIUMHYALURONATEPRODUCTSBEIJING100050,CHINABESIDES,WEDISCUSSEDMETHODSOFQUALIFYINGANDQUANTIFYINGTHESETHREERESIDUALSOLVENTSRECEIVED20090713LUDW,XITF,FENGXM,SUNXDETECTIONOFUNKNOWNRESIDUALSOLVENTSOFSODIUMHYALURONATEPRODUCTZHONGGUOZUZHIACCEPTED20090824GONGCHENGYANJIUYULINCHUANGKANGFU2009133874477450/0/摘要背景作者在医用透明质酸钠凝胶国家抽检乙醇残留量检测中发现大量未知残留物。目的对透明质酸钠凝胶中未知残留物予以定性定量,并对比毒理学数据和国内外标准讨论其危害。设计、时间及地点根据气相色谱质谱联用技术定性定量未知组分而设计,围绕化合物定性,外标法定量展开实验,于200705/06在中国药品生物制品检定所完成。材料实验用样品为国家抽检样品,试剂为纯化水。方法应用气相色谱质谱联用法定性定量检测。主要观察指标样品残留物甲醇、二甲苯、乙苯定性定量检测结果。结果医用透明质酸钠凝胶中未知残留物经气相色谱质谱联用定性为甲醇、二甲苯和乙苯甲醇经气相色谱定量为414365MG/L,邻二甲苯经气相色谱质谱联用定量为019MG/L,乙苯经气相色谱质谱联用定量为022MG/L。结论实验首次发现医用透明质酸钠凝胶产品中甲醇、二甲苯和乙苯3种有害残留物,并摸索出检测该3种残留物的定性定量方法。关键词医用透明质酸钠凝胶残留物甲醇二甲苯乙苯DOI103969/JISSN16738225200938009卢大伟,奚廷斐,冯晓明,孙雪医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测J中国组织工程研究与临床康复,2009,133874477450/112广泛的应用。0引言目前,国产医用透明质酸钠凝胶生产企业中国药品生物制品检定所,北京市有12家,共33个产品进口透明质酸钠23个,100050透明质酸是由D葡萄糖醛酸及N乙酰以透明质酸钠溶液为主。对于医用透明质酸钠卢大伟,男,1981年生,北京氨基葡萄糖的重复结构组成的线形多糖。商凝胶的监管和检测,执行行业标准市人,汉族,北京理工大学在读硕品透明质酸一般为其钠盐,即透明质酸钠。YY03082004医用透明质酸钠凝胶。士,主要从事医疗器械化学项目检医用级透明质酸钠具有优异的生物相容性和200705在医用透明质酸钠凝胶国家的验工作。LUDAWEI无免疫原性,并且其溶液具有高黏弹性,故抽检工作中,在对某企业的产品简称C1进/其在医学上用途广泛。在眼科临床手术中医行乙醇残留量项目检测时,发现样品气相色中图分类号R318用透明质酸钠可以作为眼科黏弹剂应用于白文献标识码B谱图中出现未知组分色谱峰图1。图2为同文章编号16738225内障、青光眼、角膜病等手术其还应用于类产品醇残留量气相色谱图,由图2可见并未2009380744704骨科临床中的膝关节炎、肩周炎、颞下额关出现C1中的未知色谱峰。由此推测产品C1收稿日期20090713修回日期20090824节炎、股骨头坏死等疾病治疗此外医用透中存在未知溶剂残留组分。通过执行国家抽20090713010/MH明质酸钠凝胶在修复整形外科和妇科中也有检应急程序,对产品C1中的未知残留溶剂进ISSN16738225CN211539/RCODENZLKHAH7447/卢大伟,等医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测行定乙性定量分析,并讨论了该溶剂的危害。课题之医用透明质酸钠凝胶未知残留物的定量方法贡献在于结论数据可为国家行业标准的修订提供参二甲苯与乙苯的定量方法色谱条件炉温为初考。始温度50,停留2MIN以10/MIN速度升温至160,停留5MIN进样口温度为180检测器温度为280色谱柱为DB62430M025MM14MUVX10,00050或者相关色谱柱载气为氦气纯度为99999柱流量为12ML/MIN顶空进样器样品加热温度为80,25加热时间为30MIN。质谱条件扫描方式为SIM扫描00扫描质核比为91,106溶剂扣除时间为05MIN。255075100MIN甲醇的定量方法取甲醇用纯化水分别配制成质量FIGURE1GASCHROMATOGRAMOFSAMPLEC1浓度为430,21,1075,5375,26875MG/L的溶液作为标图1样品C1气相色谱图准工作液,分别取10ML置于顶空瓶中密封备用。取样品1ML置于顶空瓶中密封,将样品与标准工作液同批进样气相色谱测定。UVX10,000色谱条件如下炉温为初始温度50,停留2MIN10以10/MIN速度升温至160,停留5MIN进样口05温度为180检测器温度为280色谱柱为DB62430M025MM14M或者相关色谱柱载00255075100125150MIN气为氦气纯度为99999柱流量为12ML/MIN顶空进样器样品加热温度为80,加热时间为FIGURE2GASCHROMATOGRAMOFANOTHERSODIUMHYALURONATEPRODUCT30MIN。图2同类样品气相色谱图主要观察指标残留物甲醇、二甲苯、乙苯定性定量结果。设计、实施、评估者试验设计为第一作者,资料1材料和方法收集为第一、三作者,实施为第一作者,评估为第二、三作者。设计根据气相色谱质谱联用技术定性定量未知组分而设计,围绕化合物定性,外标法定量展开实验2结果研究。时间及地点实验于200705/06在中国药品生物制21未知残留物的定性结果通过SCAN扫描方式发现品检定所完成。样品中存在二甲苯和乙苯,图3为样品总离子流图,根材料实验材料为国家抽检样品,试剂为纯化水。据谱库检索保留时间5075的色谱峰为乙苯图4保留气相色谱质谱联用仪岛津GCMS2010,出厂编号时间5208的色谱峰为间二甲苯和对二甲苯的混合峰图C703742002132A。5保留时间为5625色谱峰为邻二甲苯图6保留时方法间为1625的色谱峰为乙醇图7保留时间为1483的物医用透明质酸钠凝胶未知残留物的定性方法取C1样品质由于其相对分子质量接近32,受到氧气的干扰未能定10ML置于顶空瓶中密封,自动顶空进样器进样,气相性,但怀疑其为甲醇。色谱质谱联用仪检测。色谱条件炉温为初始温度50,停留2MIN,以X1,000,000TIC9100100106001003010/MIN速度升温至160,停留5MIN进样口温度为180检测器温度为280色谱柱为DB6242030M025MM14M或者相关色谱柱载气为氦气10纯度为99999柱流量12ML/MIN顶空进样器样00102030405060品加热温度80,加热时间30MIN。质谱条件扫描方式为SCAN扫描扫描质核比为FIGURE3TOTALIONCURRENTCHROMATOGRAMOFSAMPLEC1图3样品C1总离子流图30200溶剂扣除时间为05MIN。扫描方式为SIM扫描质核比为30,31,34溶剂扣除时间为05MIN。POBOX1200,SHENYANG/7448乙乙未未未/2491乙乙/3108/10292/10447/11020/1483/1625/1700/4983乙乙/5075/5208邻邻邻乙/5625/卢大伟,等医用透明质酸钠凝胶未知残留物的检测说明样品中含有甲醇。但甲醇相对分子质量为3202,与氧气的相对分子质量32十分接近,在质谱检测时会受氧气干扰,故将样品与甲醇标准品同时用气相色谱检测,图10中上方基线信号为样品,下方基线信号为甲醇标准品,两个信号在同一保留时间出现色谱峰说明样品中存在甲醇,故将未知残留物定性其为甲醇。FIGURE4RESULTOFMASSSPECTRUMPHENYLETHANE,SIMILARITY94X100,000TIC图4质谱谱库检索结果乙苯,相似度943000706310010034001505025050075100125150175200225250275FIGURE8RESULTOFMASSSPECTRUM图8样品质谱图X1,000,000TIC300075815310010034004751005050075100125150175200225250275FIGURE5RESULTOFMASSSPECTRUMMXYLENE,SIMILARITY96,PXYLENE,SIMILARITY97图5质谱谱库检索结果间二甲苯,相似度96,对二FIGURE9MASSSPECTRUMOFMETHANOLSTANDARDSAMPLE甲苯,相似度97图9甲醇标准品质谱图UVX10,000CHROMATOGRAM2500102030405060MINFIGURE6RESULTOFMASSSPECTRUMOXYLENE,SIMILARITYFIGURE10MASSSPECTRUMGASCHROMATOGRAPHYOFSAMPLE92ANDMETHANOLSTANDARDS图6质谱谱库检索结果邻二甲苯,相似度92图10样品和甲醇标准品气相色谱图22未知残留物的定量结果用外标法定量邻二甲苯和乙苯,邻二甲苯为019MG/L乙苯为022MG/L。间二甲苯与对二甲苯由于自身结构导致在气相色谱中无法分离,故不能定量。用外标法定量样品中甲醇含量为1314414365MG/L。3讨论FIGURE7RESULTOFMASSSPECTRUMALCOHOL,SIMILARI