阿司匹林含量测定综述

1目录1阿司匹林在体内的含量测定方法.21.1阿司匹林原料药体内含量测定.21.1.1反相高效波相色谱法（RP-HPLC）1.21.1.2高效液相色谱-质谱联用法（HPLCMS/MS法）2.31.2阿司匹林制剂体内含量测定.31.2.1气相色谱-质谱联用法（GC-MS）3.31.2.2高效液相色谱法.41.2.2.1高效液相色谱-荧光检测法（HPLCFLU法）.41.2.2.2高效液相色谱-质谱联用法（HPLCMS）5.52阿司匹林在体外的含量测定方法.62.1阿司匹林原料药体外含量测定.62.1.1酸碱滴定法.62.1.1.1直接滴定法6.62.1.1.2水解后剩余量滴定法7.62.1.2反相高效液相色谱法.72.1.3动力学光度法.72.2司匹林制剂体外含量测定.82.2.1酸碱滴定法.82.2.1.1两步滴定法10.82.2.2光谱法.92.2.2.1比色法.92.2.2.2双波长紫外分光光度法.102.2.2.3双波比值光谱法.102.2.2.4同步扫描荧光法.142.2.2.5萃取-火焰原子吸收光谱法.142.2.3色谱法.152.2.3.1高效液相色谱法（HPLC）.162.2.3.2反相高效液相色谱法（RP-HPLC）.162.2.3.3大口毛细管气相色谱法20.172.2.3.4薄层色谱法21.172.2.3.5胶束薄层色谱法22.172.2.4毛细管电泳法.182.2.4.1反相高效毛细管电泳法23.182.2.4.2非水毛细管电泳法24.182.2.5电极法.202.2.6线性伏安法26.22参考文献：.232阿司匹林含量测定方法综述陈明静药学0902摘要：阿司匹林阿司匹林（aspirin），又名乙酰水杨酸（acetulsalicylicacid），为较温和的解热镇痛药，在临床上有广泛的应用。本文综合概述了阿司匹林原料药、阿司匹林制剂在体内和体外的含量测定方法。关键词：阿司匹林；阿司匹林制剂；含量测定中国药典（2010版）中阿司匹林原料药及其制剂的含量测定采用酸、碱滴定法，而近几十年来，随着色谱技术、光谱技术、电泳技术等的飞快发展，阿司匹林的含量测定方法有了突破与发展。2阿司匹林在体外的含量测定方法2.1阿司匹林原料药体外含量测定2.1.1酸碱滴定法2.1.1.1直接滴定法6【原理】【方法】取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20mL溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L相当于18.02g的C9H8O4。）【计算】02.1816.180111.0=T%100%=WFTV）含量（F为氢氧化钠滴定液的校正因数；T为氢氧化钠滴定液的滴定度；V为消耗氢氧化钠滴定液的体积；W为供试品的称取量。【讨论】阿司匹林在水中微溶，易溶于乙醇，故使用乙醇为溶剂。乙醇对酚酞指示剂显酸性，可消耗氢氧化钠而使测定结果偏高，因此乙醇在使用前需先用氢氧化钠中和至对酚酞指示剂显中性。滴定应在不断振摇下稍快进行，以防止局部碱浓度过大，致使阿司匹林酯结构水解。温度在040范围内对测定结果无显著影响。本法缺乏专属性，易受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰，不适用于水杨酸含量较高的试样测定。72.1.1.2水解后剩余量滴定法7【原理】利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解的特性，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯键水解，再利用硫酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠滴定液。【方法】取本品约1.5g，精密称定，加氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）50.0mL，混合，缓缓煮沸10分钟，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/L）滴定，并将滴定结果用空白实验校正。每1mL硫酸滴定液相当于45.04mg的C9H8O4。7V0和V分别为空白实验和样品测定时消耗硫酸滴定液的体积；W为供试品的称取量；F为硫酸滴定液的浓度校正因数；T为硫酸滴定液的滴定度。【讨论】碱液在受热时易吸收二氧化碳，生成碳酸盐，当用酸回滴时，酸滴定液的消耗体积会减小，使测定结果偏高，故需在相同条件下进行空白试验校正。2.1.2反相高效液相色谱法李琳丽等建立了一种适用于阿司匹林稳定性及其降解动力学研究含量测定的反相高效液相色谱法。选用ShimadzuODS柱(250mm4.6mm，5m)，以乙腈为溶剂，流动相为甲醇水冰醋酸(40：60：6，盐酸调节pH为2.5)，检测波长280nm，柱温40，流速为1.0mL/min，采用导数色谱法鉴定了色谱峰纯度。结果显示在选定色谱条件下，阿司匹林能与相邻杂质完全分离。阿司匹林在601800g/mL范围内，峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9998)；平均回收率为100.6，RSD为1.3，重复性试验RSD为0.9(n=5)。高、中、低3个浓度的精密度试验RSD均小于1.4(n=5)。该方法快速简便，结果准确可靠，可作为阿司匹林稳定性及降解动力学研究的含量测定方法。8【方法】精密称取样品150mg，置50mL量瓶中，加意境适量溶解并稀释至刻度；精密称取10mL，置25mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取15L注入液相色谱仪，记录峰面积。制备对照品溶液（含阿司匹林1200g/mL）15L，同法测定，按外标法计算阿司匹林含量。【计算】RXRxAACC=CX、CR分别为供试液和对照品溶液的浓度，AX、AR分别为对应的色谱吸收峰面积。【讨论】本方法采用乙腈为溶剂，防止阿司匹林分解；选择流动相为甲醇-水-冰醋酸（40：50：6），并用盐酸调节PH为2.5，此条件下峰形和出峰时间理想，无拖尾；适当升高柱温能改善峰形和增加主峰与杂质峰的分离度，减小柱压。2.1.3动力学光度法杨军等根据乙酰水杨酸和碘容易发生取代反应，使碘的浓度降低，导致碘的催化作用减弱，建立了动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸的新方法，确定了测定条件，对实际药品含量的测定有较高的准确度。9【原理】通常情况下Ce4+H3ASO3+H20=Ce3+H3ASO4+2H+的反应速度很慢，加入I-后反应便迅速进行，反应机理可能是：2Ce4+2I-2Ce3+I2I2+H20HIO+H+I-H3ASO3+HIOH3ASO4+H+I-中间体I2容易在阿司匹林分子中-COOH的间位（即-OCOCH3）发生取代反应。如果固定I8的浓度，加入乙酰水杨酸后I2及I-的浓度降低，催化作用也降低，导致Ce4+与H3ASO3的反应速度减慢，终止反应后通过测定剩余Ce4+的量，得知加入阿司匹林的量。【方法】于一系列25mL比色管中准确加入0.25mg/LKI溶液1.0mL，5mol/LH2SO4溶液1.25mL，0.013mol/LAs2O3溶液1.0mL，乙酸水杨酸标准溶液(或样品溶液)，加蒸馏水至25mL刻度线。摇匀并放人35土0.1的水浴中，恒温后加入0.01mol/L(Ce(SO4)21.0mL，立即摇匀，迅速放回水浴中。反应10min后，加入0.5m10.5%的醋酸马钱子碱终止反应并与Ce4+显色，置于沸水浴中煮沸3min，取出冷却至室温用lcm比色皿，在波长520nm处，以蒸馏水为参比，测定吸光度A。2.2司匹林制剂体外含量测定2.2.1酸碱滴定法2.2.1.1两步滴定法10【原理】第一步中和制剂中的酸性水解产物和酸性稳定剂，同时中和阿司匹林的游离羧基，以消除干扰；第二步为水解后进行剩余滴定法。16标物质的峰面积（或峰高）；D为稀释倍数；W为取样量。2.2.3.1高效液相色谱法（HPLC）HPLC法是体外测定阿司匹林制剂最常用的方法，因其操作简便、快速，结果较准确，适用于多种阿司匹林制剂（包括复方直接）的含量测定。下面了例举三个已有的研究。吕莉16建立了用HPLC法同时测定复方单硝酸异山梨酯阿司匹林片中2种组分（单硝酸异山梨酯、阿司匹林）和主要降解产物水杨酸的方法。方法：采用HypersilBDSC18（250m4.6mm，5m）色谱柱，流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（60：40，用磷酸调节pH至2.80.1)，流速1.0mL/min，检测波长220nm，柱温40，进样量10L。结果：线性范围分别是：单硝酸异山梨酯0.01191.19mg/mL，r=0.9998(n=6)；阿司匹林0.011.0mg/mL，r=09996(n=6)；水杨酸0010121.012mg/mL，F：09985(n=6)。平均回收率：单硝酸异山梨酯99.0，RSD为99.0，RSD为0.9。王晓燕17等建立了复方阿司匹林片剂的含量测定方法。采用SpherisorbODS柱（250m4.6mm，5m），流动相：乙腈：0.08mol/L醋酸钠溶液（15：85），流动相中含0.12%的三乙胺作扫尾剂，并用并速算调PH为3.65，流速：0.8mL/min，检测波长：280nm，柱温：25，进样量：10L。结果测得阿司匹林0.45.2mg/mL呈线性，平均回收率为100.2%（RSD=0.67%，n=9）；磷酸可待因0.0080.104mg/mL呈线性，平均回收率为98.7%（RSD-=2.21%，n=9）。李秀梅、张伟18建立以高效液相色谱法同时测定复方对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚、咖啡因、阿司匹林含量的方法。方法：色谱柱为ODS，流动相为甲醇-4.2的冰醋酸溶液(3：7)，流速为1.0ml/min，检测波长为275nm，进样量为20L，柱温为25。结果：对乙酰氨基酚、咖啡因、阿司匹林的线性范围分别为160842880g/mL(r=0.9981)、3.4291.20g/mL(r=0.9988)、23.87769.92g/mLl(r=0.9999)，平均回收率分别为99.2(RSD=0.23)、100.4(RSD=0.63)、99.3(RSD=0.11)2.2.3.2反相高效液相色谱法（RP-HPLC）南楠、朱霁虹建立了一种用反相高效液相色谱法测定阿司匹林可待因片中阿司匹林和可待因的方法。该方法不需经提取分离，溶解后直接进样，简便、快速，准确可靠。19【色谱条件】色谱柱：-BondapakODSC18（10m，3004mm）；流动相：甲醇0.03mol/L醋酸钠（冰醋酸调PH=3.5）（1：2：5）检测波长：280nm；流速：1mL/min【对照品溶液配制】准确称取阿司匹林对照品约40mg置10mL容量瓶中，加入甲醇23mL，溶解。【供试品溶液配制】精确称取样品细粉适量（约相当于阿司匹林400mg）置100mL容量瓶中，加入25%甲醇溶液50mL，超声溶解5min。用25%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。经0.45m微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液。17【测定】精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10L，分别注入液相色谱中，记录峰面积，计算供试品溶液的含量。2.2.3.3大口毛细管气相色谱法20【色谱条件】色谱柱：HP-1(5m053mm265m)石英毛细管柱；汽化室温度：230；检测器温度：260；柱温采取程序升温：起始180(1min)230(2min)；载气(高纯N2)流速：10mL/min，分流比1：10；空气流速：350mL/min，氢气流速：35mL/min，【标准溶液配制】取阿司匹林适量，加冰醋酸2mL，然后用氯仿/乙醇（体积1：1，简称混合溶剂）配成浓度分别为40mg/L、20mg/L、8mg/L、5mg/L标准溶液。【内标物溶液配制】移取适量正十六烷置于50mL的容量瓶中，用混合溶剂定容至刻度，配成20mg/L内标溶液。【样品处理】称取一定量药分（约相当于阿司匹林226.8mg）置25mL容量瓶中，加2mL乙酸和适量混合溶剂溶解，超声振荡15min，并用混合溶剂定容至刻度。待药物完全溶解后过滤，弃去10mL前滤液，取10mL中间滤液用混合溶剂稀释至所需浓度。取1mL一定浓度中间滤液，加5mL内标溶液用混合溶剂定容至10mL，摇匀。【测定】精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1L，分别注入液相色谱中，记录峰面积，计算供试品溶液的含量。2.2.3.4薄层色谱法21【扫描条件】反射式锯齿扫描，狭缝1.251.25mm，扫描速度20mm/min，扫描波长为303nm。【对照品的制备】阿司匹林对液：精密称取阿司匹林适量，加1mol/LNaOH溶液7.5mL使其完全溶解，加0.5mol/LH2SO4溶液调节PH在34，加60%乙醇稀释成每1mL含2.5mg的溶液。【标准曲线的绘制】取对照品，点在同一聚酰胺薄膜板上，点样量为0.6、1.2、1.8、2.4、3.0L，乙酸展开，取出晾干后测定其积分值，以样品浓度（C）对斑点面积的积分值（X）作图，得线性方程。【样品测定】分别取对照品溶液及供试品溶液各3L，点于同一聚酰胺薄膜板上，经乙酸展开后，取出晾干，扫描测定，得积分值，带入线性方程求得含量。2.2.3.5胶束薄层色谱法22传统的薄层色谱法采用有机溶剂作为展开剂，一般可以得到很好的分离效果，但是有机溶剂有毒、易燃、易挥发，尤其采用混合溶剂作为展开剂时，由于展开剂各组成挥发性的差异，实验结果重复性差。胶束色谱因用含量高于临界胶束浓度的表面活性剂作流动相，可以克服上述缺点，并有较好的分离选择性。【方法】在聚酰胺薄膜上，以2%SDS：乙腈：PH8NaAc-Na2HPO412H2O（3：1：1）为展开剂，测定波长273nm，单波长反射法锯齿扫描。【标准溶液的配制】精密称取对照品阿司匹林约0.220g，置25mL量瓶中，分别加入内标物间二苯酚约0.150g，用CHCl3-MeOH（1：1）溶解，并稀释至刻度，摇匀。【样品溶液的配制】精密称取粉末适量，置50mL量瓶中，加入10mLCHCl3-MeOH（1：1）溶解，超声10min，静置10min。将上清液滤纸25mL量瓶中（瓶中预先加入内标物间苯二酚约0.150g，精密称定），用溶剂洗涤滤渣，并补充至刻度，摇匀。这主要是因为在水介质中水杨酸类药物微溶，容易吸附在毛细管内壁上，加上在水中产生过大的焦耳热限制了高电场的使用，从而导致分离效率较低；在乙醇介质中，水杨酸类药物极易溶解，因此水杨酸类药物的疏水部分与毛细管壁的疏水作用大大减弱，从而消除了因管壁的吸附作用造成的谱峰展宽等问题；另一方面，由于乙醇介质的背景电导较低，当用高电场时产生的电泳电流很小，当分离电压为24kv时，水介质中电流为8.6A，乙醇中为6.6A，当分离电压为30kV时，水介质中电流为11.2A，乙醇中只有8.5A。因此在乙醇中可用很高的分离电压提高柱效而不致于造成谱峰展宽，使分离效果变坏。【重复性】将质量浓度均为50mg/L的SA，ASA，SSA连续进样5次，在水中，迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.61.0及3.85.6。在乙醇中，迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.50.8及2.83.4。在非水介质中，分析结果的重现性优于水介质。【线性关系】在所选的实验条件下，配置一系列不同质量浓度的标准溶液，用外标法以峰面积定量，SA，ASA。SSA的质量浓度分别在0.05100mg/L，5.0250mg/L，0.08100mg/L呈良好的线性关系，r均大于0.995，以Y表示峰面积，X表示样品质量浓度(g/L)，回归方程分别为ASA：Y=-7.1+52.1X（r=0.997）；SSA：Y=-2.5+150.7X（r=0.999）；SA：Y=1.8+129.3X（r=0.996）。【样品分析】将阿司匹林肠溶片去除糖衣，磨细，混匀。精密称取相当于1片（50mg/片）的阿司匹林，加重蒸馏水30mL，5060水浴加热至溶解，最后用重蒸馏水定容至100mL。准确移取3.50mL样品溶液3份于25mL量瓶中，以乙醇体系运行缓冲液定容。在选定的实验条件下进行毛细管电泳测定，由线性回归方程计算其含量。在上述3份样品溶液中，分别加入不同量(0.125，0.250和0.375mg)的SA，ASA标准溶液，用运行缓冲液定容于25mL量瓶中，进行加样回收实验。低、中、高3个浓度的平均回收率：SA为101.3，100.3和102.7(KSD为2.6)；ASA为976，972和984(RSD为23)。测得3批样品中SA和ASA的平均含量为0.10%和98.4%。2.2.5电极法刘冬等人研究了以有机锡化物为载体的电极的阴离子响应性能，以三苄基锡辛酸酯作为活性物质，研制出一种对水杨酸根离子具有良好的点为响应性能和选择性能的离子敏感电极，并通过对水杨酸根离子的测定实现了对阿司匹林的测定。25【仪器与试剂】电极电位和溶液酸度测试均使用pHs10C型数字式酸度离子计(浙江萧山市科学仪器厂)；参比电极为232型饱和甘汞电极(上海光电器件厂)；邻硝基苯基辛醚系本实验室自制其余试剂均为分析纯，实验用水为去离子水经高锰酸钾处理后蒸馏而得。【电极制备与性能测试】