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文档简介

.,第三节外植体的选择与培养,一、外植体的选择:,种质优良,植株健壮,取材的最适时期,适宜的大小,选材,第1章植物组织培养实验室构建及操作技术,.,二、外植体灭菌,1:对材料进行预处理2:材料表面灭菌:1)水洗,滤纸吸干;2)70%酒精浸3060s;3)用灭菌剂处理;4)用无菌水冲洗.,第三节外植体的选择与培养,.,表面灭菌剂的种类较多,可选取12种使用。,常用灭菌剂使用浓度及效果比较表,第三节外植体的选择与培养,.,三、外植体的接种与培养,(一)接种无菌操作定义:把经表面灭菌处理后植物材料,切碎或分离出器官、组织、细胞,再经无菌操作转接到无菌培养基上,这一过程叫做接种。,第三节外植体的选择与培养,.,(1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室;(2)接种前15-20min,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯;(3)接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,及拖鞋等;(4)上工作台后,用酒精棉球擦拭双手。然后70%酒精喷雾降尘,并擦拭工作台面;(5)先用酒精棉球擦拭接种工具,再将镊子和剪子蘸95%酒精在酒精灯火焰上灼烧,放置冷却。,第三节外植体的选择与培养,接种前的准备工作:,.,(1)对接种材料进行消毒;(2)先解开包口纸,将试管等拿成斜角,使试管口在酒精火焰上方转动,灼烧数秒钟;(3)用灼烧过的镊子夹取外植体送入试管内,轻轻插入或放在培养基表面;(4)接种完后,将管口在火焰上再灼烧数秒钟;(5)接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等;(6)接种工具随时蘸95%酒精灼烧,避免交叉污染;(7)接种完毕后要清理干净并用70%酒精擦工作台。,第三节外植体的选择与培养,接种时的无菌操作技术:,.,(二)外植体培养,外植体培养:指把培养材料放在培养室里,使之生长,分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。,第三节外植体的选择与培养,.,培养的环境条件:,第三节外植体的选择与培养,.,定义:培养物在培养基上生长一段时间以后,由于营养物质枯竭,水分散失,以及代谢产物的积累,必须转移到新鲜培养基上培养,这个过程叫做继代培养。,第三节外植体的选择与培养,.,四、外植体成苗途径,1、外植体愈伤组织根、芽试管苗同时长芽和根先长芽,再长根先长根,再长芽2、外植体胚状体试管苗(胚状体途径)3、外植体根、芽试管苗(器官发生途径),第三节外植体的选择与培养,.,外植体,愈伤组织,胚状体,芽、根,根、芽,芽,芽,根,根,试管苗,外植体成苗途径:,第三节外植体的选择与培养,B,A,C,.,(1)、直接从器官上发生(2)、从愈伤组织发生(3)、从游离的单细胞发生(4)、从小孢子发生,(1)数量多(2)速度快(3)结构完整,第三节外植体的选择与培养,胚状体的产生途径:,诱导胚状体比诱导芽的优点:,.,五、培养过程中常出现的问题及解决方法,第三节外植体的选择与培养,污染,褐变,玻璃化现象,组织培养三大难题,.,第三节外植体的选择与培养,1、污染原因细菌污染真菌污染,(一)污染,真菌污染,.,2、污染的预防措施,第三节外植体的选择与培养,(1)减少或防止材料带菌(2)外植体灭菌要彻底(3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌(4)布质制品的灭菌(5)无菌室的消毒(6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。,.,1、定义:是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活,使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质,有时使整个培养基变褐,从而抑制其他酶的活性,影响材料的培养。,第三节外植体的选择与培养,(二)、外植体的褐变,.,植物品种生理状态培养基成分培养条件不当,第三节外植体的选择与培养,2、褐变的主要原因,.,选择合适的外植体:合适的培养条件:连续转移加抗氧化剂:加活性炭,第三节外植体的选择与培养,3、减轻褐变现象发生的措施,.,(三)玻璃化现象,1、定义:在长期的离体培养繁殖时,有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状,这种现象称为玻璃化。,第三节外植体的选择与培养,.,2、玻璃化现象产生的原因,细胞分裂素浓度较高时;琼脂浓度低时;温度低、光照时间长时;气体交换不良时;培养基中无机离子种类及比例不当时。,第三节外植体的选择与培养,.,适当控制培养基中无机营养成分;适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度;适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度,增加生长素量;增加自然光照,控制光照时间;降低培养温度,进行变温培养;增加容器通风,最好进行CO2施肥。,第三节外植体的选择与培养,3、预防措施:,.,第四节、试管苗驯化与移栽,第1章植物组织培养实验室构建及操作技术,试管苗,草莓,.,1、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌,一、试管苗的特点,第四节、试管苗驯化与移栽,百合试管苗,.,(1)生长细弱;(2)光合作用差(3)叶片气孔数目少,活性差(4)根的吸收功能弱(5)对逆境的适应和抵抗能力差,第四节、试管苗驯化与移栽,小麦试管苗,2、特点:(与常规苗相比),.,二、炼苗(驯化),驯化的目的:通过减肥、增光、降温、控水等措施,提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高光合作用的能力,提高试管苗的移栽成活率。,第四节、试管苗驯化与移栽,.,三、试管苗的移栽,1、直接移栽法2、常规移栽法3、嫁接移栽法,第四节、试管苗驯化与移栽,(一)移栽方法:,.,四、提高试管苗移栽成活率的途径,1、试管苗的生理状况:移栽壮苗2、植物生长调节物质:适当加入生长素,去除细胞分裂素,有利生根,提高成活率3、无机盐浓度:适当降低4、加入少许活性炭5、控制好移栽前10天的光、温、湿环境因子6、使试管苗从无菌向有菌逐渐过渡,第四节、试管苗驯化与移栽,.,本章小结:,(1)常用的培养基:MS培养基;B5培养基;White培养基;N6培养基;KM-8P培养基。(2)水、无机盐、有机物质、天然复合物、凝固剂是构成培养基的五种主要成分。(3)配制母液。即先配成大量元素10倍液;微量元素100倍液;铁盐100倍液;有机物100倍液。(4)培养基配置、分装、高压灭菌(5)筛选培养基方法,即单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法。,第1章植物组织培养实验室构建及操作技术,.,本章小结:,(6)植物培养技术:灭菌、接种、培养和驯化四个环节。(7)灭菌与消毒的方法。(8)接种程序:植物材料表面的消毒;切割

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