《高效液相色谱岛津LC1-0A基础知识》ppt课件

.1，第一节simaz LC-10AT型HPLC操作程序，2，目的：规范岛津LC-10AT型高效液相色谱的使用。范围：适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱的使用。责任：质量检查负责本程序的执行。3、1、2个LC-10ATvp溶剂泵(子/A泵和辅助/B泵)、Rheodyne7725i手动注入阀、SPD-10Avp uv-可见探测器、N2000色谱数据工作站和计算机，4，2，准备，1，准备必要的流化床，用适当的0.45m滤膜过滤，超声波除气20min。2、根据被检查样品的需要更换适当的洗脱柱(注意方向)和定量环。3、使用适当的0.45m滤膜取样和标准溶液(也可以在平衡系统中准备)。(注意腐蚀性和有机溶剂)4，确保仪器各部件的电源线、数据线和输液管道连接正确。5，开机，不间断电源，b泵，a泵，检测器，泵和检测器自检结束后，打开打印机，计算机显示器，主机，最后打开色谱工作站。3，启动，6、4、参数设置、1、波长设置：检测器显示初始屏幕时，按func键，输入所需的波长值作为数字键，然后按Enter键确认。按CE键退出初始屏幕。2，设定流速：当a泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需流速(柱联机时通常不超过1ml/min的速度)，然后按Enter键确认。按CE键退出。3，设定行程比例：a泵显示初始屏幕时，按conc键，输入行程b的浓度百分比作为数字键，然后按Enter键确认。按CE键退出。7，4，参数设置，4，渐变设置：4.1:泵显示初始屏幕时的edit键，Enter键；4.2:用数字键输入时间，按Enter键，重复按func键选择所需功能(FLOW设置流速，BCNC设置流动b的浓度)，按Enter键，用数字键输入设置值，然后按Enter键；4.3:要设置其他时间点，请重复前面的步骤。4.4:用数字键输入停止时间，反复按func键，直到屏幕上显示“STOP(停止)”，然后按Enter键。按CE键退出。8，5，更换移动相阵列气泡，将1: A/B线的吸入过滤器放置在准备移动相的储液罐中；逆时针旋转2: A/B泵的排水阀180，打开排水阀。按下3: A/B泵的purge键后，泵指示灯亮起，泵以约9.9ml/min的速度冲洗，3min(可设置)后自动停止；4:顺时针旋转排水阀，关闭排水阀。5:如果管路中仍有气泡，请重复此操作，直到排出气泡。6:如果按上述方法不能排出气泡，请从柱入口取出连接管，放入废液瓶，将流速设置为5ml/min，按pump键冲洗3min，按pump键停止泵，重新连接柱，将流速重置为规定值。9，6，平衡系统，1，基准视图：1.1: N2000色谱数据工作站操作规程打开联机色谱工作站软件，输入1.2:实验信息，设置每个方法参数，然后按1.3:数据收集页上的按钮。10，6，平衡系统，2，等也使用方法2.1: a泵的pump键，a，b泵同时启动，pump指示灯亮。用试验方法规定的流动相冲洗系统通常需要至少6倍的柱体积的流动相。2.2:确保每个管道连接没有泄漏。必须排除泄漏。2.3:观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动不应超过1MPa。如果超过，则第一次确定柱前管路中仍有气泡后，可以按检查并操纵管路。2.4:观察基线变化。用基准漂移0.01mV/min冲洗，噪声为25mmol/L的缓冲液4。每日专栏5。恒定注入条件，流动相调整6。采用防护罩，41，2，维持时间缩短，1。流速2。超载样品。3 .耦合损耗4。流动相成分变化5。温度增加，1 .检查泵，重置流速2。样品量减少3。流动相PH值保持为3-7.5确认列方向4。流动相蒸发或防止沉淀5。列恒温，42，3，延长保留时间，1。流速减小2。硅柱上的活动点变化3。接头损失4。流动相成分变化5。温度降低，1 .管道泄漏，更换泵密封，消除泵内气泡2。3使用乙胺等流动相改性剂，或从碱到钝化柱3。保持流动PH值为3到7.5，柱的方向为4 .防止流动相蒸发或沉淀5。柱子的恒温。43，4，旋转杆或分支点发生，1。样品的体积太大。2.样品溶剂太强3。柱子倒塌或形成短路通道。4.柱子的烧结不锈钢失效5。取样器损坏，1 .用流动来匹配样品，总样品体积小于第一个峰的15% 2。弱样品溶剂3。柱更换，弱腐蚀性条件4。更换烧结不锈钢，添加在线过滤器，过滤样品5。更换注入器转子，44，5，ghost peak，1。入口阀门残余峰2。样品中未知的物质3。列不平衡4。三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)5。水污染(反相)，1 .使用后用强力溶剂改善阀门清洗、阀门及样品清洗2。试样状态3。柱再平衡，使用流动相作为样品溶剂(尤其是离子对色谱)4。每日新配方，抗氧剂5。通过波动平衡时间进行水质检查，使用HPLC等级的水，45，6，基准噪音，1。气泡(尖峰)2。污染(随机噪音)3。探测器灯连续噪音4。电气干扰(偶然噪音)5。探测器有气泡，1 .流动相脱气，靠背压力2。用洗涤柱、净化样品、HPLC级试剂代替3。氘灯更换4。使用电源确定扰动的来源(例如水箱等)5。流动相脱气，忠州等压，46，7，峰值拖把，1。列过载2。峰值干扰3。硅羟基作用4。柱内烧结不锈钢失效5。柱塌缩或短路形成6。死区或柱外径太大7。热效应下降，1 .降低样品量，增加列径大容量固定相2。清洁样品，调整流动相3。三乙胺，碱钝化栏，缓冲液或盐的浓度增加流动相PH值减少，钝化样品4。烧结不锈钢更换，在线过滤器，样品过滤5。柱更换，应用弱腐蚀性条件6。最小化接头点，对所有接头点进行适当调整，尽可能使用细内径接头7。以低腐蚀条件更换立柱，使用保护柱，47，8，峰值扩展，1。入口体积太大2。入口阀门发生峰值扩展3。数据系统采样率太慢4。探测器时间常数太大，1 .流匹配样本，总样本体积低于第一个峰的15% 2。为了减少扩散，注入前后排出气泡3。设置速度必须大于每个峰值10点4。设定时间常数感兴趣的第一个峰半宽的10%，48，8，峰值扩展，5。流动相粘度过高