




已阅读5页,还剩27页未读, 继续免费阅读
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
In-Fusion克隆技术介绍,May23,2020,宝日医生物技术(北京)有限公司,基因克隆背景简介,May23,2020,2,TA克隆,限制性酶切克隆,平滑末端克隆,缺点:连接效率低耗时较长需要特定限制性酶切位点,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion克隆产品,May23,2020,3,Clontech专利,In-FusionHDCloningSystem,这是一款让您随心所欲地实现基因定向克隆的产品!,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion基因克隆特点,4,4,TitleofthePresentationcangohere,主要内容,May23,2020,5,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,6,主要内容,6,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion基因克隆技术原理示意图,Clontech专利,In-Fusion是一种快速、简单、高效的基因克隆技术!,7,7,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,8,主要内容,8,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion克隆技术的优点,May23,2020,9,TitleofthePresentationcangohere,简便、快速、高效的克隆技术,May23,2020,10,快速!,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,11,In-FusionHD无论是克隆长基因片段还是克隆多个基因片段都能保持较高的克隆效率。,高效!,简便、快速、高效的克隆技术,TitleofthePresentationcangohere,不附加任何多余序列,May23,2020,12,In-Fusion连接反应15min,不附加任何多余序列的重组载体,A,B,C,TitleofthePresentationcangohere,不受限制性内切酶酶切位点的限制,May23,2020,13,In-Fusion克隆不受限制性内切酶酶切位点的限制:在cDNA序列中插入内含子,荧光蛋白基因在cDNA序列添加UTRs转换纯化标签例如Myc转换为His缺失蛋白表达区域,表达载体,选择插入位点,PCR扩增,纯化,目的DNA片段,混合,引物设计,PCR扩增,重组载体,TitleofthePresentationcangohere,可同时克隆两个或多个DNA片段,May23,2020,14,Step2:目的DNA片段扩增,Step3:一次In-Fusion连接反应,Step1:制备线性化载体,片段1,片段2,片段3,线性化载体,重组载体,TitleofthePresentationcangohere,克服传统克隆技术的限制,May23,2020,15,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion克隆技术的应用,May23,2020,16,多片段克隆,构建载体模型,插入突变位点,高通量克隆,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,17,应用实例,TitleofthePresentationcangohere,引物设计及目的基因片段扩增,May23,2020,18,引物的5末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列引物的3末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列,TitleofthePresentationcangohere,载体线性化,May23,2020,19,TitleofthePresentationcangohere,In-Fusion连接反应,May23,2020,20,In-Fusion专利酶,反应液直接转化,In-Fusion连接反应5015min,【结果】,CloningEnhancer处理,3715min,8015min,TitleofthePresentationcangohere,引物设计原则,引物的5末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列引物的3末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列,May23,2020,21,21,TitleofthePresentationcangohere,引物设计原则,May23,2020,22,22,TitleofthePresentationcangohere,引物设计网络工具,May23,2020,23,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,24,主要内容,24,TitleofthePresentationcangohere,产品列表,May23,2020,25,TitleofthePresentationcangohere,基础款相关产品,May23,2020,26,5XIn-FusionHDEnzymePremixpUC19ControlVector,linearized(50ng/l)2kbControlInsert(40ng/l),In-FusionHDCloningKit(639648/49/50),组分,TitleofthePresentationcangohere,附带CloningEnhancer的相关产品,May23,2020,27,CloningEnhancer的作用:消除PCR反应液中的引物二聚体和dNTP等的影响无需对PCR产物进行胶纯化操作简单,In-FusionHDCloningKitw/CloningEnhancer(639633/34/35),TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,28,Upto5XHigherEfficiency,未经处理,CloningEnhancer处理,CloningEnhancer的实用例,TitleofthePresentationcangohere,May23,2020,29,主要内容,29,TitleofthePresentationcangohere,In-FusionKit常见问答,May23,2020,30,Q1.如何选择PCR酶?A1.可以使用任何PCR酶。由于科研人员进行克隆表达的实验较多,我们推荐使用高保真的PCR酶。Q2.载体和插入的DNA片段末端结构有限制吗?A2.没有特别的限制。无论是平滑末端、粘性末端或者末端有无A尾均可进行有效的连接反应。Q3.载体和插入的DNA片段的长度有限制吗?A3.没有特别的限制。载体和插入的DNA片段即使超过10kb也可以进行连接反应,只是连接效率会有所降低。插入的DNA片段只要不少于50bp就可进行有效的连接反应。Q4.线性化载体末端是否需要进行去磷酸化处理?A4.线性化载体末端磷酸基团的存在与否不会影响In-Fusion连接效率。因此,不需要对线性化载体进行去磷酸化处理。,TitleofthePresentationcangohere,技术支持,May2
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 工程常见质量通病防治手册
- 文化传播公司商业计划书
- 中国水雾冷却系统市场现状研究分析与发展前景预测报告
- 2025汽车维修中心劳动合同
- 2025四川省水果蔬菜种植买卖合同
- 《血清脂肪检查》课件
- 2025的水果供货仓储合同范本
- 2025生物技术公司研发合作合同
- 2025建筑工程的承包合同范本
- 《康复护理技巧》课件
- 2025江苏无锡江阴公用事业集团限公司招聘1人易考易错模拟试题(共500题)试卷后附参考答案
- 湖北省咸宁市2025年高考数学试题全真模拟卷
- 食品生产设施安全设计试题及答案
- 宁夏中考试题历史及答案
- 20025如皋统计局事业单位考试真题及答案
- 2024-2025学年二年级语文下册统编版第四单元达标卷(单元测试)(含答案)
- iata第 66版危险货物规则(dgr 66th)
- 《中国古代寓言》导读(课件)2023-2024学年统编版语文三年级下册
- 个人简历电子版表格下载
- GB/T 16823.3-2010紧固件扭矩-夹紧力试验
- 日常保洁报价表
评论
0/150
提交评论