实验：细胞化学染色POX

细胞化学染色、沧州医学专业医学技术系侯振江、细胞化学染色是一种基于形态，利用化学或生化技术对血细胞内各种化学成分进行定位、定性和半定量分析的方法。 为研究血细胞生理、病理、化学结构的临床诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制探讨提供重要依据。血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物是有色沉淀物，具有一定的稳定性。 血球化学染色显示糖原、脂质、酶、蛋白质等。物理法和化学法固定，(1)物理法固定，物理法固定干燥和火焰，化学法最常用甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。 血细胞化学染色工艺利用人工合成的酶基质，在酶的作用下产生降解产物，与重氮盐结合产生偶氮偶联，形成不溶性偶氮色素，证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放出新的生态氧，使无色联苯胺发生蓝色沉淀。3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 4、舍尔反应：高碘酸氧化细胞内糖类中的乙二醇基形成乙醛基，醛基和舍尔试剂作用，使无色品红色沉淀。 5、金属沉积法以外还有物理学方法，如脂溶性染料染色(显示脂质)、荧光显示、放射自显像及体外活体染色也常用于临床血细胞学诊断。(三)细胞化学定量粗略估计，根据染色反应的强弱、颜色浓淡，人为区别阴性和各种程度的阳性。 百分比法只能反映细胞的阳性率，不能反映颜色的强弱。 积分法是常用的半定量法，结合等级的估算和百分率，反映细胞阳性率的高低和细胞颜色的强弱。以下常用的细胞化学染色方法介绍方法学对白血病鉴别诊断具有重要意义。 一、过氧化物酶染色(POX )、(一)四甲基联苯胺法(TMB )【原理】颗粒和单核细胞细胞内的髓过氧化物酶(POXorMPO )分解过氧化氢，释放出新的生态氧，将白联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者又变成茶色化合物沉积在细胞质内、POX、新生态氧o111222卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡【试剂】取1%TMB亚硝基铁氰化钠饱和溶液1%过氧化氢溶液稀过氧化氢溶液瑞氏染色液、【操作】0.1%TMB乙醇溶液lml，取硝基2 .在新鲜干燥的血液片中，加入混合溶液0.5ml，放置lmin后，加入过氧化氢溶液0.7ml，染色6min。 3 .瑞氏染液重染1520min。 4 .油镜检查。【结果】细胞质内存在蓝黑色粒子者为阳性。 (-)颗粒无沉积()颗粒小，分布稀疏()颗粒粗，局灶分布()颗粒粗大，分布密集，占细胞质1/22/3 ()颗粒粗大，呈团块分布()的所有细胞质均可充满颗粒，复盖核。 (1)粒系： POX主要分布于粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟度的增加而增强，中性分叶核细胞呈强阳性。 嗜酸性粒细胞阳性度最强，其阳性粒子比嗜酸性粒细胞粗大，折射。 碱性粒细胞阴性。(2)单核细胞：原始单核细胞呈阴性反应，幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应，颗粒细腻、分散分布。(3)其他细胞淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细胞、巨核细胞均呈阴性反应。(4)血小板过氧化物酶主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜，作为原巨核细胞的一个标志物，有助于FABM7的识别。 过氧化物酶染色主要用于急性白血病类型鉴别，急性骨髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型最强，以MI和M5型最弱，有助于区别M3和M5型。 急性淋巴细胞白血病表现为POX阴性反应，是急性骨髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。注意事项、TMB制备在85%88%的乙醇溶液中染色效果好，不使用90%95%的乙醇，细胞表面的蛋白质会立即凝固，妨碍试剂渗透到细胞内，减弱或消失显色反应。 双氧水需要新鲜配制，其浓度和添加量不能随意改变。 涂膜中粒细胞未见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，表明过氧化氢过浓。 过氧化氢在血片上不产生气泡的话，表示无效。 染色液的适当pH为5.5，pH为10个铁粒子。 正常范围： 30%90%，平均60%，I型较多，无少见的ii型、iii、iv型。细胞内铁、(3)环状铁粒子红血球：有6个铁粒子，其中2/3以上的铁粒子在核周围排列成完全的环状或不完全的环状。 正常或有色颗粒幼细贫血无环状铁颗粒幼细胞、铁颗粒幼细贫血中环状铁颗粒幼细胞为6%。环铁粒幼细胞、【临床意义】1 .缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁明显减少，“一”“士”，细胞内铁平均为5.9%，仅为I型。 经过有效的铁剂治疗，外铁增加了。 因此，骨髓铁染色是诊断缺铁性贫血、指导缺铁剂治疗的重要方法。2.铁粒幼细胞性贫血时，外铁“2”和“3”为内铁平均70%，铁粒粗大，以iiiv型为主，出现很多环状铁粒幼细胞。 因此，本实验是诊断铁粒幼细胞贫血的有效方法。 MDS还出现环状铁粒幼细胞。3.缺铁性贫血如