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家畜生理学实验,血液生理之白细胞,张宇飞指导教师:赵怀平(高级实验室),一、实验目地,了解白细胞计数原理,掌握其技术方法、红细胞沉降速率的测定方法及测定、测定红细胞膜对低渗溶液的抵抗能力。,二、实验原理,白细胞旧称白血球,也被称为免疫细胞,体和动物血液及组织中的无色细胞,能吞噬异物或产生抗体,以帮助机体防御感染。白细胞一般有活跃的移动能力,它们可以从血管内迁移到血管外,或从血管外组织迁移到血管内。因此,白细胞除存在于血液和淋巴中外,也广泛存在于血管、淋巴管以外的组织中。血液中的白细胞有五种,按照体积从小到大是:淋巴细胞,嗜碱粒细胞,中性粒细胞,单核细胞和嗜酸细胞。白细胞是无色有核的血细胞,在血液中一般呈球形,根据形态差异可分为颗粒和无颗粒两大类。故白细胞计数具有重要的生理意义。,悬浮于低张溶液中的红细胞,由于溶液张力差异,可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。红细胞先变为球形;当达到临界容量时,则红细胞破裂溶解。观察上清液游离Hb量即可反映出红细胞脆性。,将抗凝血放入血沉管中垂直静置,红细胞由于密度较大而下沉。通常以红细胞在第一小时末下沉的距离表示红细胞的沉降速度,称为红细胞沉降率,即血沉。,三、实验材料,家兔血、血细胞计数板、显微镜、试管、血沉管,四、实验项目,1.白细胞计数WBC2.红细胞沉降率的测定3.红细胞的脆性实验,五、实验方法,1、白细胞计数3、白细胞计数吸血及血液的稀释:吸血及血液的稀释均在红细胞吸管中进行。推片及充液:在推片和充液前,先在显微镜下检查计数板和盖玻片是否清洁,若不干净则清洁后使用。推片是指用手指将盖玻片固定在计数板的正中间计数室边缘,然后大拇指将其缓慢的推行,使盖玻片贴在计数室两侧的槽上,充液是指将稀释好的血液摇匀后,先弃去吸管内的前两滴,然后用半滴放到计数室和盖玻片的间隙,同毛吸作用使血液进入计数室内。计数:稀释的血液进入计数室后,静置23分钟后,在低倍显微镜下找中央大方格,然后在高倍镜下数4个角上的小方格和中央小方格中红细胞数目。结果计算:N指细胞总数稀释200倍:x=N107稀释100倍:x=N2.5107,2.红细胞沉降率的测定用清洁、干燥的血沉管,小心吸血至最高刻度“0”处。绝对不能有气泡,如果有气泡重新做。将吸有血液的血沉管置于血沉管架上,分别在15min、30min、1h时读取血沉管上部血浆的高度,以毫米表示。,3.红细胞的脆性实验不同浓度氯化钠溶液的配制:,取决10支小试管;分别配制上述不同浓度的氯化钠溶液;各管再加入全血一滴;混匀后静置1小时观察结果。,六、结果分析,1、白细胞计数临床意义1生理变化(1)剧烈的体力劳动或情绪激动都使白细胞增加。(2)新生儿的白细胞数较成人高,3日后降到每微升10,000左右。(3)在妊娠期中,白细胞常轻度增多,分娩时增多可能更显著。(4)慢性特发性白细胞增多症,其白细胞总数可持续在10,00020,000l,但无其他异常发现。(5)高温作业、饮酒及饭后亦可能有轻度增加。,病理变化增高见于急性化脓性感染所引起的急性周身性感染,局部炎症(脓肿、脑膜炎、大叶性肺炎、兰尾炎、扁桃体炎、脓胸、败血症等)以及其他一些细菌感染(如猩红热、霍乱、白喉等)。此外,白血病、骨髓纤维化、恶性肿瘤、真性红细胞增多症、尿毒症、酸中毒、手术后、急性失血后、某些药物中毒和烧伤等亦常增高。其中尤以慢性白血病增高最多,有时可达几十万;骨髓纤维化大多在10,00020,000;真性红细胞增多症大多在12,00030,000。由于感染等所引起的类白血病反应,有时亦可高达数万。减少见于(1)某些感染:细菌(如伤寒、付伤寒、布氏菌病等);病毒(如流感、麻疹、风疹、登革热等)及各种重度感染(如粟粒性肺结核病、严重败血症等)。(2)脾功能亢进:见于肝硬化、班替氏综合征等。(3)血液病:再生障碍性贫血,急性粒细胞缺乏症(可减到只剩数百l),非白血病性白血病、恶性网状细胞增多症。(4)化学因素:可致白细胞减少的有抗癌药物(氮芥、环磷酰胺、长春花碱及长春新碱等)、解热镇痛药(氨基比林、氨替比林、保太松、复方阿斯匹林及水扬酸钠等)、抗甲状腺药(两基硫氧嘧啶、甲基硫氧嘧啶,他巴唑、甲亢平等)、抗癫痫药(苯妥英钠、巴比妥类等)、磺胺类(磺胺噻唑、磺胺嘧啶、长效磺胺、磺胺异恶唑等)、抗生素(氯霉素、合霉素、新生霉素、青霉素、链霉素、金霉素等)、抗疟药(奎宁、扑疟奎宁、伯氨奎宁等)、抗痨药(异烟肼、异烟宗、对氨基水扬酸、氨硫脲等)、抗组织胺药(苯海拉明、苯沙明等)、抗糖尿病药(D860、P607等)、抗高血压药(氯噻嗪氢氯噻嗪、甲基多巴、利血平、氯丙嗪等)、利尿药(汞利尿剂、利尿酸、乙酰唑胺等)、其它(苯、金盐、铋、有机砷、山道年、二硝基酚、DDT、青霉胺等)。(5)物理因素(X线、放射性物质)。注:白细胞计数,对病情动态观察具有一定的意义。鉴于白细胞的正常数值幅度较大,因此,临床在分析结果时,须与分类和原来的白细胞基数结合起来,否则易造成延误诊断。,2.红细胞沉降率的测定红细胞沉降率(ESR)测定临床意义ESR的变化主要同血浆中球蛋白,如2和球蛋白,尤其是与纤维蛋白原的含量多少有关,如果球蛋白与纤维蛋白原含量多于正常,血沉就增快,所以变化无特异性。但对任何一种血沉增速的疾病,在病程内定期观察血沉的动态变化,可以帮助推断病变的发展情况。增高见于:生理性:妇女月经期,妊娠后3个月到产后1个月,小儿和50岁以上的老人。病理性:(1)各种急性的全身和局部感染,如活动性结核病、疟疾、风温热和肺炎。(2)结缔组织性疾患,如多发性肌炎。(3)在产重贫血、白血病、某些恶性肿瘤、甲亢、肾炎以及铅、砷、酒精中毒时亦常增高。减低见于:真性红细胞增多症及继发性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、球形红细胞增多症、心脏代偿功能障碍等。,3.红细胞的脆性实验结果:开始溶血:上层液开始呈透明红色且管底有红细胞者;完全溶血:溶液为透明红色且管底无红细胞者;必要时可离心后再观察结果。,临床意义:脆性增加:遗传性球形红细胞增多症,口形红细胞增多症,椭圆形红
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