临床试验报告

神经元特异性烯醇化酶（NSE）定量检测试剂盒（时间分辨免疫荧光法）临床试验报告苏州新波生物技术有限公司临 床 试 验 报 告1. 基本内容1.1 引言1.1.1 NSE简介烯醇酶是参与糖酵解的关键酶，由、三种亚基以二聚体的形式组成、五种同工酶。其中型特异性存在于神经元和神经内分泌细胞中，称神经元特异性烯醇化酶（Neuron-Specific Enolase，NSE）。NSE广泛分布于人类及各种动物的成熟神经元、周围神经的神经内分泌细胞和一些感觉细胞中，NSE在正常人脑组织中含量最高，约占脑内可溶性蛋白的1.5%。1.1.2临床预期使用目的临床上，NSE可作为神经元损伤的标志酶；也是小细胞肺癌首选的肿瘤标志物，可用于对SCLC的鉴别诊断，放化疗效果、预后、恶变情况等的监测。现广泛应用于NSE检测的方法主要有酶免疫分析（EIA）、时间分辨荧光免疫分析（time-resolved immunofluorometric assay，TRIFMA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。1.1.3 实验原理和方法新波生物技术有限公司研制的NSE-TRIFMA采用双抗体夹心一步法。鼠抗人NSE单抗包被于96孔荧免板，校准品或样品中的NSE与包被单抗及铕离子（Eu3+）标记的单抗于微孔内表面发生免疫反应，微孔表面的夹心免疫复合物与游离标记单抗通过洗涤分离。微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的NSE浓度呈正比例，通过剂量反应曲线可得出样品中NSE浓度。1.1.4 国内外已批准上市产品应用现状目前，NSE检测应用较多的是Roche电化学发光分析法。1.2 研究目的验证本公司研制生产的神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒的质量水平和临床中的实际检测情况，让用户评价试剂的真实性。1.3 试验设计1.3.1试验总体设计及方案1.3.1.1 临床考核时间：2006年12月2007年4月1.3.1.2 考核单位（三家三级甲等医院）1）广西医科大学附属第一医院2）同济大学附属同济医院3）南京第二医院1.3.1.3 试剂1） 考核试剂：苏州新波生物技术有限公司生产的神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒（时间分辨免疫荧光法）。2） 参比试剂： 广西医科大学附属第一医院用瑞士Roche NSE ECLIA定量检测试剂盒 同济大学附属同济医院用瑞士Roche NSE ECLIA定量检测试剂盒 南京第二医院用瑞士Roche NSE ECLIA定量检测试剂盒1.3.1.4 标本来源血清标本采自以上三家考核单位内科、外科、核医学科等门诊病人或住院病人。1.3.1.5 考核方法1） 将新波公司试剂盒送至上述三家医院，由上述三家医院人员进行试剂盒的对比试验操作。2） 将经过进口试剂检测并妥善保存的血清样本作为考核样本，无需重新采集病人血样。3） 按照新波公司试剂盒说明书进行临床试验。4） 临床考核结束后按照临床考核报告格式由医院人员进行编写临床考核报告。5） 由医院医务科或科教科盖上公章，临床考核报告一式四份。1.3.2试验设计及研究方法选择1.3.2.1样本量及样本量确定依据本次临床试验所用标本量共计1039例。根据体外诊断试剂注册管理办法（试行）（国食药监械2007229号），NSE定量诊断试剂临床研究的总样本数至少为1000例。1.3.2.2样本选择使用血清样本。不得使用溶血样本。因红细胞和血小板中含有NSE，过久的保存全血、样本溶血或离心不彻底均可引起检测结果偏高。1.3.2.3样本采集和保存静脉穿刺采血，常规分离血清。28条件下样本可保存24h，20可保存更长时间。样本避免反复冻融。1.3.2.4对比试验产品的确立选择诊断试剂产品中应用最为广泛的Roche NSE ECLIA。1.3.2.5质量控制方法校准品A点荧光强度不高于5000，F点荧光强度不低于。1.3.2.6临床研究数据的统计分析方法对比新波和参比试剂的测量值，用Origin软件做回归曲线，得到相关系数。对比新波和参比试剂的阴、阳性，计算两种试剂的阴、阳性符合率以及整体符合率。1.4 临床研究结果及分析1.4.1 新波公司NSE TRIFMA与Roche公司的NSE试剂相比，灵敏度相当。在血样浓度评估方面，新波公司NSE TRIFMA与Roche NSE ECLIA试剂相关性良好，相关性系数都在0.95以上。1.4.2 将上述三家医院用进口试剂测定的NSE浓度值与新波公司NSE TRIFMA测定的NSE浓度值作t检验分析。分析结果表明，新波公司NSE TRIFMA测定值与Roche NSE ECLIA测定值无显著差异。1.4.2.1 广西医科大学附属第一医院：与Roche NSE ECLIA对比检测样本数共325例。t检验t值为1.647，P0.05，表明新波公司NSE TRIFMA测定值与Roche NSE ECLIA测定值无显著差异；1.4.2.2 同济大学附属同济医院：新波公司NSE TRIFMA与同济医院Roche NSE ECLIA对比样本数共364例。t检验t值为1.060，P0.05，表明新波公司NSE TRIFMA测定值与Roche NSE ECLIA测定值无显著差异；1.4.2.3 南京第二医院：新波公司NSE TRIFMA与南京二院Roche NSE ECLIA对比样本数共350例。t检验t值为3.303，P0.05，表明新波公司NSE TRIFMA测定值与Roche NSE ECLIA测定值无显著差异。1.4.3三家医院共计1039份样本，总体阴阳性符合率为98.2 %，统计数据如下表：新波试剂盒ROCHE试剂盒阳性（16.3ng/ml）阴性（16.3ng/ml）合 计阳性（14.0ng/ml）20812