第三节-骨髓检查PPT课件

第二章临床血液学检测第三节骨髓细胞学检验,临检教研室郭素红,第三节骨髓细胞学检验,一、骨髓细胞学检测的临床应用二、骨髓细胞学检测的方法和内容三、血细胞发育过程中形态演变的一般规律四、血细胞的正常形态特征五、血细胞的细胞化学染色六、细胞免疫分型七、细胞遗传分型,（一）骨髓细胞学检查的临床应用,1.确诊造血系统疾病，评价疗效，判断预后.,2.协助诊断某些疾病.,3.提高某些非造血系统疾病诊断率,白血病、AA、MA、MM、恶组、骨髓转移瘤等。,IDA、HA、MDS、ITP、脾亢等.,疟疾、黑热病、GaucherS病、Niemann-PickS病、转移癌肿等,一、概述,一、概述,（二）骨髓检查的适应症和禁忌症,（1）不明原因的肝、脾、淋巴结肿大,（2）不明原因的发热、骨痛、恶病质,（3）末梢血细胞过多、过少或幼稚细胞、形态异常,1.骨髓检查的适应症,一、概述,2.骨髓检查的禁忌症,（1）血友病、严重凝血功能障碍者,（2）晚期孕妇-慎作骨髓穿刺,（3）小儿及不合作者不易作胸骨穿刺,一、概述,1.标本采集的穿刺部位：,（三）骨髓标本的采集,1、穿刺部位(puncturelocation),髂后上棘:骨质薄易穿刺,髓液丰富,很少被血液稀释,5-10mL,培养.首选,髂前上棘：顶端后12cm处.,胸骨:2、3肋骨间胸骨中线,穿刺针固定在1cm以下,有一定危险性,脊突:腰椎或胸椎下段脊突,或3、4腰椎脊突体,胫骨粗隆：3岁以下小孩.,定位穿刺,一、概述,2.标本采集的注意事项：,（1）抽取骨髓液的量0.2mL,（2）多项检查先抽形态学检查标本,（3）厚薄适宜涂片张,血片46张,（4）作好标记：类型、姓名、编号、时间,（5）多部位、压痛点或X线检查穿刺,（6）干抽时，作骨髓活检,（三）骨髓标本的采集,（2）多项检查先抽形态学检查标本,（5）多部位、压痛点或X线检查穿刺,（1）抽取骨髓液的量0.2mL,（2）多项检查先抽形态学检查标本,（5）多部位、压痛点或X线检查穿刺,一、概述,3.判断骨髓取材质量标准：,(1)病人有特殊酸痛感,(2)骨髓小粒和脂肪滴,(3)有骨髓特有细胞,(4)杆状核/分叶核比例大于外周血,（三）骨髓标本的采集,(1)病人有特殊酸痛感,(2)骨髓小粒和脂肪滴,(3)有骨髓特有细胞,(1)病人有特殊酸痛感,(2)骨髓小粒和脂肪滴,(4)杆状核/分叶核比例大于外周血,(3)有骨髓特有细胞,(1)病人有特殊酸痛感,(2)骨髓小粒和脂肪滴,A中间涂片长短、厚薄适宜，片膜居中，符合要求。B下面一张取材好，有较多骨髓小粒。,-,12,二、骨髓细胞学检测的方法和内容,(一)肉眼观察,1.了解涂片取材、染色是否满意,2.判断骨髓增生程度,3.观察和计数巨核细胞,4.观察体积较大或成堆的病理细胞,(二)骨髓涂片的低倍镜观察,-,13,增生程度有核细胞/有核细胞/常见原因成熟红高倍镜极度活跃1:1100白血病、红白血病明显活跃1:1050100白血病、增生性贫血活跃1:202050正常骨髓象、某些贫血减低1:50510造血功能低（CAA）极度减低1:2005造血功能衰竭（AAA）,判断骨髓增生程度,-,14,极度活跃,明显活跃,增生活跃,增生减低,极度减低,-,15,Gaucher细胞,Niemann-Pick细胞,-,16,（三）骨髓涂片的油镜观察：,1.有核细胞分类计数,2.观察各系统细胞形态,3.观察有无寄生虫和异常病理细胞,（四）血涂片观察,1.白细胞分类计数,2.血细胞形态观察,二、骨髓细胞学检测的方法和内容,-,17,(四)总结分析：,1.骨髓象特征,2.血象特征,3.特殊检查,4.诊断意见及建议,二、骨髓细胞学检测的方法和内容,-,18,特殊检查：细胞化学染色,-,19,(五)正常成人骨髓象基本特征,1.增生活跃，G:E24:1,2.各系统、各阶段比值正常,相互间的比例正常,3.各系统、各阶段细胞形态正常.,4.无其他异常细胞和寄生虫.,5.有重叠造血细胞组成的造血岛,二、骨髓细胞学检测的方法和内容,1.增生活跃，G:E24:1,4.无其他异常细胞和寄生虫.,-,20,(1)粒系:占50%60%.,(2)红系:占20%.,(3)淋巴系:占20%.,(4)单核系:50%,急粒为阴性或弱阳性急淋为阴性,2.非特异性酯酶(nonspecificesterase,NSE),五、常用血细胞组织化学染色,六)铁染色,1.参考值：(1)细胞外铁：+(2)细胞内铁：铁粒幼红细胞20%90%,细胞外铁：铁蛋白和含铁血黄素贮存于骨髓基质或巨噬细胞。,细胞内铁：BM中可利用、贮存于幼红细胞.称为铁粒幼红细胞。,+,+,+,+,+,五、常用血细胞组织化学染色,2.铁染色临床意义,用于贫血的诊断和鉴别诊断.(1)IDA:外铁(-),内铁(15%.MDS-RAS,血清铁蛋白：体内贮存量，精确,(3)非IDA如MA,HA,AA等:内、外铁均正常或.(4)部分继发性贫血:外铁正常,内铁.,确证,常见急性白血病类型细胞化学反应鉴别,急淋白血病急粒白血病急单白血病,POX（-）,NSE,PAS,NAP,分化差的原始细胞(-)(+),分化好的原始细胞(+)(+),(-)(+),(+)成块/颗粒状,(-)/(+)，弥漫性淡红色,(-)/(+),弥漫性淡红/颗粒状,(-)(+)NaF抑制不敏感,(-),(+)被NaF抑制,增加,减少/(-),正常/增加,SE,(+)NaF抑制不敏感,(-),(-)(+)被NaF抑制,六、细胞的免疫分型,细胞免疫分型也称细胞免疫标记（表型）检测，它是用单克隆抗体及免疫学技术对细胞膜表面和（或）细胞质存在的特异性抗原进行检测，借以分析细胞所属系列，分化程度和功能状态的一种方法。,检测方法：1.免疫荧光法2.免疫酶染色法：APAAP、PAP、ABC法,-,52,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用（二）急性白血病细胞免疫表型特点,-,53,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用1.有助于识别不同系列的细胞2.识别不同的淋巴细胞3.用于检测T淋巴细胞亚群4.用于识别不同分化阶段的细胞5.有助于识别不同功能状态的细胞6.有助于对不同系列和不同分化阶段7.可用于各种白血病细胞的免疫表型分析8.可用于白血病微小残留病的检测,-,54,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用1.有助于识别不同系列的细胞髓系细胞标记：CD13-15、CD32-33、CD65、CD91、CD156、CD166淋巴细胞标记：CD1-5、CD7-10、CD19-20、CD52、CD77巨核细胞和血小板：CD41-42、CD61红细胞标记：血型糖蛋白A或B,-,55,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用2.识别不同的淋巴细胞成熟T淋巴细胞：CD2、CD3、CD4、CD7、CD8成熟B淋巴细胞：CD19、CD20、CD22NK细胞：CD16、CD56,-,56,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用3.用于检测T淋巴细胞亚群TH淋巴细胞：CD4+、CD8-TS淋巴细胞：CD4-、CD8+TH/TS(CD4+/CD8+)：判断机体免疫状态、某些疾病诊断、病期分析、检测治疗和判断预后的参数。,-,57,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用4.识别不同分化阶段的细胞造血干细胞标志：CD34+、CD90+、Lin+造血干细胞向髄系定向的标志：CD34+、CD33+T淋巴细胞系祖细胞的标志：CD34+、TDT+、CD10+、CD7+B淋巴细胞系祖细胞的标志：CD34+、CD19+,-,58,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用5.识别不同功能状态的细胞记忆T细胞：高表达CD45RO、不表达CD45RA活化T细胞：不表达CD45RO、强表达CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58,6.有助于对不同系列和不同分化阶段7.可用于各种白血病细胞的免疫表型分析8.可用于白血病微小残留病的检测,-,59,六、细胞的免疫分型,（一）细胞免疫分型的临床应用,6.有助于对不同系列和不同分化阶段7.可用于各种白血病细胞的免疫表型分析8.可用于白血病微小残留病的检测诊断依据：在完全缓解的白血病患者骨髓细胞中，出现CD19、CD22、CD10、CD7、CD5、CD13、CD37、CD34等任何一种抗原阳性,1.ALL免疫分型：T细胞(20%)，B细胞(80%),(2)B细胞系ALL：早期B-ALL：CD19+普通型ALL：CD19+、CD10+前B-ALL：CD19+、CD10+/-、CD20+、CyIg+B-ALL:CD19+、CD20+、CyIg+、SmIg+,2.AML的免疫学分型：CD34+造血干细胞的标志.CD33+急性髓系白血病.,(1)T细胞系ALL:前T-ALL：CD7+、TdT+、CD2-T-ALL：CD7+、TdT+、CD2+,(二)急性白血病免疫学分型(标记),六、细胞的免疫分型,急性白血病的免疫学分型CD19CD7CD13CD33HLA-DRMPOB系ALL+/-+-T系ALL-+-/+-AML-/+,M0：白血病原始细胞无颗粒、无Auer小体，胞体较大/较小，光镜MPO阴性，极似L2、L1型，但无B、T标志，CD33或CD13至少一种阳性，其他髓系标志如CD11b、电镜细胞化学或免疫细胞化学MPO常为阳性,(九)白血病MICM分型：,形态学（morphology）免疫学（immunology）细胞遗传学（cytogenetics）分子生物学（molecularbiology）,第五节常见血液病的血液学特征,*notreported,M3：t(15;17)(q22;q12)PML-RAR,2.分子生物学分型(molecularbiologyclassification),应用分子生物学技术检测与白血病发病机制有关的基因改变、基因重排及各种融合基因的形成。,T-ALL：TCR基因重排/缺失(80%);B-ALL：IgH基因重排,第五节常见血液病的血液学特征,M2b：t(8;2