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文档简介
密级 : 论文编号 : 中国农业科学院 博士学位论文 花生短肽制备及其功能活性研究 on of s s on of 1 摘 要 对酶解过程中 各种 影响因素进行了系统研究,通过正交旋转组合建立了短肽得率及水解度与各种影响因素的回归模型;在此基础上,选用 为花生蛋白酶解工具酶,结合实际生产确定出了 解花生蛋白的最适参数组合为水 解温度 53,底物浓度 4%,酶用量3637U/g,水解时间 105此条件作用下,花生短肽得率为 水解度为 在花生蛋白 解的研究基础上,对影响复合酶解 过程中 各种影响因素进行了系统研究,通过均匀设计建立了短肽得率与各种影响因素的回归模型;基于以上研究,选用 复合酶解 的工具酶,确定了 续 解花生蛋白的最适参数组合为 水解时间65水解温度 57,酶底比 2061U/g, 终花生短肽得率为 水解度为 在以上研究基础上, 对花生蛋白酶解动力学进行研究 。建立了 解动力学模型: , , 3352.0b , 失活 常 数 为 得 到 续 解 动 力 学 模 型 为 ,动力学常数 2629.0b ,失活常数为 建立了阴阳离子混合床脱盐法,确定了短肽脱盐最适参数组合为:水解液过柱速度为 510 倍柱体积 /h、水解液 阳离子树脂比例为 3:2,在此条件下花生短肽脱盐率和回收率均大于 80%,效果优于传统脱盐方法 ; 指标测定结果表明,脱盐花生肽纯度达到 分子量主要分布在 126 949间,游离氨基酸含量为 g。 采用超滤技术对花生短肽进行分离, 确定了 一级超滤最适操作条件为操作压力 液浓度 5% 操作温度 35; 二级超滤最适操作条件为操作压力 操作温度 40。 超滤后分子量小于 1花生短肽总得率为 利用体外化学模型证明 了 花生短肽具有抗氧化和 制活性,其中 制活性非常突出, 为 盐可以增强花生肽的 制活性,超 滤 则可富集 中分子量小于 1花生短肽的 制 mg/ 通过 机理研究 证明 了 分子量小于 1花生短肽对 抑制 属于竞争 性 抑制 且对 消化酶的水解具有一定的抗性;动物实验研究结果表明分子量小于 1花生短肽可显著降低原发性高血压大鼠的尾动脉收缩压( p 对原发性高血压大鼠的心率无影响 , 降压作用平稳,不会因服用剂量偏差而造成低血压现象 ,且可被 完整吸收进入血液循环进。 通过 散点图和非线性回归模型, 证明了 蛋白质中侧链不带电的极性氨基酸、碱性氨基酸和酸性氨基酸含量对蛋白质水解物 制活性无明显影响;疏水氨基酸、芳香族氨基酸和支链氨基酸含量高的蛋白质更适合作为酶法生产 制肽的原料。 基于以上研究,对花生短肽制 备工艺参数进行放大,放大实验发现,需 采用 截流分子量为150 纳滤 对花生蛋白酶解液进行预脱盐 , 纳滤 过程中样品稀释倍数为 10 倍时可有效提高混合床脱盐效率; 放大实验最终得到短肽产品纯度均大于 85%;总得率为 其中小于 1制 为 明花生短肽制备工艺 可以应用到 花生短肽产业化中。 关键词: 低变性 花生蛋白 粉 , 短肽 ,酶解,精制, 降血压活性 2 he of H, of by on to to of 3 , % , 637 U/g, 05 pH DH by of of by on to 5 7 , 061 U/g, pH DH on of , , 3352.0b , 120P , 1 4 5 1 5 6 2629.0b , by to of V/h, pH of .5 :2. 0%, of 26 949Da of g. by to of of % 5 of 0 . of KD CE of by CE of CE of CE 3 of CE of of KD mg/KD to to CE of by BP by KD KD BP be to to of CE of of of CE of of of CE of of on of be by of 50Da of of 0 of by 5%; of CE of KD mg/So of be to 4 目 录 图标索引 . I 缩 略 表 . 一章 引 言 . 1 生资源概况 . 1 国花生利用状况 . 2 生蛋白的营养价值与利用 . 3 生蛋白的营养价值 . 3 生蛋白国内外研究现状 . 3 能性短肽的生物学意义 . 5 能性短肽的吸收机制 . 5 能性短肽的功能活性 . 6 能性短肽的制备 . 9 白酶解法 . 9 成法 . 13 能性短肽的产业化及其存在的问题 . 15 外功能性短肽的产业化 . 15 内功能性短肽的产业化及存在的问题 . 17 题意义和主要研究内容 . 17 第二章 单一酶 法制备花生短肽研究 . 19 言 . 19 料与方法 . 19 剂与材料 . 19 要设备 . 19 验方法 . 20 果与讨论 . 23 溶性氮测定方法的改良 . 23 白酶的筛选 . 24 解花生蛋白的单因素试验 . 25 解花生蛋白的正交旋转组合试验 . 28 章小结 . 32 第三章 复合酶 法制备花生短肽研究 . 33 言 . 33 料 与方法 . 33 剂与材料 . 33 要设备 . 33 验方法 . 34 果与讨论 . 36 5 花生蛋白的酶解 . 36 合酶解蛋白酶的筛选 . 36 120P 水解花生蛋白的单因素试验 . 37 章小结 . 40 第四章 花生蛋白酶解动力学研究 . 41 言 . 41 料与方法 . 41 剂与材料 . 41 要设备 . 42 验方法 . 42 果与讨论 . 42 解动力学模型的推导 . 42 力学模型参数的推导 . 46 白酶失活常数的推导 . 49 力学模型的验证 . 51 章小结 . 52 第五章 花生短肽的精制 研究 . 53 言 . 53 料与方法 . 53 剂与材料 . 53 要设备 . 54 验方法 . 54 果与讨论 . 57 生短肽的脱盐 . 57 生短肽指标测定 . 59 生短肽的超滤 . 61 滤产物分析 . 63 章小结 . 66 第六章 花生短肽降血压活性的研究 . 67 言 . 67 料与方法 . 67 剂与材料 . 67 要设备 . 68 验方法 . 68 果与讨论 . 71 生短肽功能活性的初步研究 . 71 制对花生短肽 制活性的影响 . 73 生短肽 制活性机理研究 . 74 生短肽 体内降血压活性 的研究 . 76 生短肽的凝胶过滤分 离 . 79 白质氨基酸组成与其水解物 制活性关系的分析 . 80 6 章小结 . 84 第七章 花生短肽制备工艺放大研究 . 85 言 . 85 料与方法 . 85 要材料 . 85 要设备
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