夏建川生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用

结直肠癌,患者女 70岁住院号：127551介入科 入院诊断：直肠癌，肝转移 2003.7.20第一次入院行直肠癌Dixon切除术，手术后三周第二次住院，对肝脏的病灶进行射频消融，射频消融后2003.8.16-2004.12.16 进行8次CIK细胞免疫治疗, 出院情况：80分； 第三次入院：2004.1.25-2004.3.26 行4次自体NK细胞治疗；目前一般情况好，肝肾功能正常，小便正常, KPS 90分。到目前为此，共做30次细胞免疫治疗。2011年8月24号复查未见复发。患者每年到我们医院接受68次细胞免疫治疗。,乳腺癌（病例一）,病人，女，69岁，左乳腺癌术后患者。患者因左乳腺肿物3年于2004-7-29行左乳癌改良根治术，用环磷酰胺+阿霉素+5-氟脲嘧啶方案化疗2程，2004-10-22至2004-12-17行NK细胞回输6次,2005年4-9月行CIK细胞回输6次每年接受8次体细胞免疫治疗。2007-11-20 PET-CT示未见复发。 2011-10-18 PET-CT检查未见复发。目前，患者每年接受68次细胞免疫治疗。,病人 女 50岁 2009.3.17 PET-CT提示左乳肿物2009.3.20 左乳区段切除+左腋窝淋巴结清扫术术后病理：大小为2x1.5x1.5cm，浸润性导管癌，级，ER(-)，PR(-)，Her-2(-)术后分期：T1N1M0，A期2009.4.10-09.8.7 行剂量密集型“ACT”化疗各4程2009.8.31-09.10.14 左乳+左锁骨上放疗2009.6-10.8 细胞免疫治疗共24次，其中NK 8次，D-CIK 12次，CIK 4次，疗程间无长时间间隔。2011.8至今 病情稳定，一般情况良好。,乳腺癌（病例二）,病人 男 50岁 盲肠癌 （Dukes D, 肝转移）,200.12 CEA升高，肠镜病理：腺癌级，PET-CT：盲肠癌并肝转移瘤采用手术和化疗、生物治疗的综合治疗方案：术前新辅助化疗3次，术后辅助化疗9次，手术化疗期间均配合C225及细胞免疫治疗，之后进行以细胞免疫治疗为主的治疗。 具体过程：08.1.7-08.2.4 XELOX化疗3次 2008.2.22 右半肝切除术+肝内一个转移瘤切除术+区域淋巴结清扫术 2008.3.11 肝内另一个转移瘤射频消融治疗 2008.3.18 -08.7.8 CR+5Fu化疗1次，FOLFIRI化疗8次 2008.1-09.1 细胞免疫治疗22次，其中NK 6次，D-CIK 5次，CIK 10次， D-T 1次 2009.1- 至今 病情暂稳定,肺癌 （病例一）,患者男70岁住院号：151182综合科入院诊断：左上肺腺癌第一次住院行诱导化疗，后先后行gamma刀治疗及射频消融治疗，并于2005.12.6-2007.6.21 共行CIK治疗：26次；DC-CIK治疗：15次。出院时一般情况好，肿瘤标志物无升高，脑无占位，肺部病灶及纵隔淋巴结均无活性,到现在无瘤生存已36个月，这个病人是综合治疗的范例。,男，76岁，非小细胞肺癌术后2009年7月右侧胸腔出现胸水2009年8月开始链式-CIK细胞免疫治疗8月3日第一次抽血（病人50-60 ml）8月10日开始第一程链式-CIK回输到12月2日，共抽血培养9次，回输27次每次回输细胞数量8.231074.81082009年10月16日CT证实胸水明显减少，病人一般情况良好，自觉较前改善。,肺癌 （病例二）,女，65岁，非小细胞肺癌2009年8月开始链式-CIK细胞免疫治疗8月3日第一次抽血（病人50-60ml）8月10日开始第一程链式-CIK细胞免疫回输（静脉/皮下）到12月2日，共抽血培养8次，回输24次每次回输细胞数量51072108目前病灶稳定，似较前略有缩小，病人一般情况良好，自觉较前改善。,肺癌 （病例三）,肿瘤细胞,恶性增殖,免疫逃逸,三、肿瘤的免疫基因治疗Immuno-gene therapy of cancer,从广义上讲，根据免疫学的理论技术而建立的基因治疗方案，均属免疫基因治疗（Immune gene therapy或Immunogene therapy） 。,I ：493项I/II: 160项II : 118项II/III: 7项III: 19项,肿瘤的免疫基因治疗,抗 原 180 项细胞因子 247 项,500项,美国FDA批准Provenge (sipuleucel-T)，一种治疗晚期前列腺癌的患者免疫活性细胞，这标志进入新癌症治疗：自身免疫活性细胞治疗。（2010.4.29）,PROVENGE由自身外周血单核细胞组成，包括在确定的培养期间用一种重组人蛋白，PAP-GM-CSF已被活化的抗原提呈细胞(APCs)；前列腺酸性磷酸酶(PAP)，在前列腺癌组织中高表达的一种抗原，连接至免疫细胞激活剂粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF组成)。刺激自体的T淋巴细胞。将这些经体外刺激的细胞回输给前列腺癌患者， 从而达到治疗前列腺癌患者的目的。Sipuleucel-T成为FDA历史上第一个批准上市的肿瘤疫苗。,发病率高,病情进展缓慢,肿瘤相关抗原表达,化疗疗效有限,“非必需”组织,前列腺癌细胞免疫治疗获得成功的原因,PSA、PAP等,内分泌治疗无效的患者，此时肿瘤负荷较小，机体具有一定的抗肿瘤能力,Nat Rev Immunol. 2010, 10: 580-593.,肿瘤侵润性T细胞受体免疫基因治疗,免疫基因治疗在的肿瘤临床中的应用,Science. 2006 Oct 6;314(5796):126-9. Epub 2006 Aug 31,经基因修饰的自体DC细胞激活的T淋巴细胞的制备,T淋巴细胞,成熟DC细胞,DC细胞刺激的自体T淋巴细胞（DC-T）,肿瘤抗原,PBMNC （80-100ml）,共培养,TNF, IL-4GM-CSF,IL-2,负载肿瘤抗原的AAV感染,负载CEA 抗原的DC刺激的T淋巴细胞的表型,一些抗原与肿瘤的发生发展密切相关,Viral antigens:Primary hepatic carcinoma: Hepatitis B virus, Hepatitis C virusCervical cancer :Human papillomavirus: E6, E7.2. Self-antigens:Lung cancer: k19, Her-2/neu, etc.Primary hepatic carcinoma: -FP.Breast cancer: Her-2/neu, BA46, etc.Prostate cancer: PSA, PSMA,自体DC-T淋巴细胞在恶性肿瘤治疗中的策略,肿瘤患者外周血（80-100ml）,体外诱导DC-T淋巴细胞,回输DC-T淋巴细胞给术后的患者（一个月2次）,特异性杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤的复发和转移,前列腺癌,患者，男，年龄：68岁 2007年4月，常规体检时，发现PSA显著升高，100ng/L穿刺活检提示：前列腺癌，Gleason评分：10分。胸部CT: 未见异常。 行内分泌治疗：诺雷德 Zoladex（goserelin）+康士得/Casodex （Bicalutamide）。PSA迅速下降，9个月后降至0.2以下，继续维持9个月后，选择了间断治疗（停用这两种药物），PSA迅速上升，6个月后升至16，继续内分泌治疗，PSA迅速降至0.16，以后就逐步上升，倍增时间1416周。自2010年9月开始出现全身骨痛，以左髋部明显，胸腹部CT：椎体及髂骨广泛转移灶， 全身骨扫描：中轴骨广泛转移。左髋臼及多处肋骨转移。 2011.2-13: PSA: 1376 ng/ml ， 2011.3-28开始进行生物治疗，回输两次DCT，2011.4.25 PSA: 737 ng/ml，2011.5.25回输四次DCT（负载PSA抗原的DC刺激的自体T淋巴细胞）,一星期后检测 PSA 561 ng/ml。现在患者感觉精神改善，无明显副反应。生活能够完全自理，能够自由下床活动，左髋部不适改善，疼痛不明显，无需止痛药物。饮食可，精神可。,DCT 细胞免疫治疗,用负载前列腺癌细胞高表达抗原PSA和PSMA负载自体DC刺激的自体T淋巴细胞对前列腺癌患者治疗后，外周血中PSA水平明显下降,PSA: 1376 ng/ml,PSA 561 ng/ml,根据不同肿瘤的生物学特性(肿瘤类型、分期和肿瘤的免疫源性)、患者的遗传背景（是否具有家族倾向？）、目前的病情状况(体质，免疫状况)、前期治疗方法、年龄等，在传统肿瘤治疗模式的基础上，制定出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案。,三、如何制定出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案。,肿瘤体细胞免疫治疗与常规治疗有机结合的治疗策略,恶性肿瘤,手术治疗,放化疗敏感（常规放化疗）,疾病稳定期,专科治疗,不能手术（期，期）复发者,可手术,放化疗不敏感,细胞免疫治疗,化疗敏感 化疗后,细胞免疫治疗联合专科治疗,（靶向治疗）,细胞免疫治疗联合内分泌或靶向治疗,细胞免疫治疗,（微创介入）,（卵巢癌，乳腺癌，小细胞肺癌等）,放化疗间隙联合细胞免疫治疗,（肾癌，前列腺癌，黑色素瘤等）,（乳腺癌，卵巢癌，神经母细胞瘤，小细胞肺癌等）,化疗不敏感,（原发性肝癌，肾癌，前列腺癌等）,疾病稳定期,（一）针对老年肿瘤晚期患者，体质弱、免疫功能极度低下采取抽少量血多次回输的治疗方案,抽血30ml,第1天,先抽血30ml进行下个疗程治疗；同时进行第3次CIK回输,第1次CIK回输,第2次CIK回输,第4天,第8天,第12天,第14天,第16天,开始下一个疗程的治疗,(二）细胞免疫治疗与化疗有机结合,化疗前1天抽血，免疫细胞分离培养,第一周,第二周,7天,开始化疗,第2次开始化疗,回输CIK、NK、D-CIK等细胞,化疗前1天抽血，免疫细胞分离培养,（三）体细胞免疫治疗联合放疗的增效方案,放疗前抽静脉血50ml，上午,放疗,放疗,放疗,上午放疗后，下午回输免疫细胞,第2天周二,第3天周三,第1天周一,第4天周四,第6天周六,第7天周日,第5天，周五下午回输培养的CIK、NK、D-CIK等细胞,休息,休息,（四）抗肿瘤效应细胞交替使用方案,第一周NK,第二周D-CIK,第三周NK,第四周D-CIK,抽血30ml,回输第三周NK,抽血50ml,抽血30ml，回输第一周NK,抽血50ml，回书第二周D-CIK,第五周,第六周,回输第四周D-CIK,（五）体细胞免疫治疗联合抗肿瘤的细胞因子，抗肿瘤抗体，生物分子靶向药物增强疗效的方案,Threshold for tumor regression,Immunestimulation/inflammation,Spontaneous release of immune modulatorsby tumor cells,Spontaneous regression/response totherapy,Tumor progression,Antigen-specific Immunization，生物靶向药物 （抗肿瘤抗体和小分子化合物）,NK cells，CIK cells，D-CIK,IL-2.IFN-,采用的治疗方案,Threshold for tumor regression,Immunestimulation/inflammation,Spontaneous release of immune modulatorsby tumor cells,Spontaneous regression/response totherapy,Tumor progression,Antigen-specific Immunization，生物靶向药物 （C225, Iressa）,NK cells，CIK cellsIL-2. IFN-,恶性肿瘤发生转移的示意图,Induction of anti-tumor immunization in human with DC Vaccination,体细胞治疗在临床肿瘤治疗中的作用,1、恶性肿瘤综合治疗的一部分,常规治疗后的巩固治疗；2、一些免疫原性较强的恶性肿瘤（如肾癌，恶性黑色素瘤， 恶性神经胶质瘤）或对化疗和放疗不敏感肿瘤（原发性肝 癌）在手术或介入微创治疗，使肿瘤负荷降低后可直接进 行细胞免疫治疗。3、通常在进行体细胞免疫治疗前，要降低肿瘤负荷。4、体细胞免疫治疗联合抗肿瘤的细胞因子，抗肿瘤抗体，生 物靶向药物能取得更好的疗效； 因此，肿瘤患者在综合治疗原则下辅以个体化的细胞免疫治疗，能取得更好的预后。,Chester Southam: 在五十年代首次给志愿者注射活的癌细胞,结果:注射的癌细胞在健康人体内不生长.注射的癌细胞在癌症病人体内可长成大肿瘤。结论：癌症病人体内失去健康人所具有广谱抗癌活性。研究项目受到伦理学及法律的极大挑战。研究结果为抗癌界带来极大提示，1968年被推选成全美抗癌学会主席。,Science，1957年 一月 125: 158-160,首次证明人体内天然抗癌活性的存在,五、人体免疫与肿瘤的发生,非粒细胞单核细胞,粒细胞,血浆,红细胞,人体白细胞分离,离心,人体粒细胞抗肿瘤的研究,中性粒细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,单核细胞/巨噬细胞,人体内白细胞分类,粒细胞,非粒细胞,接触病原,自然免疫:自然杀伤细胞巨噬细胞中性粒细胞补体(需要几小时或几天),获得免疫：B 淋巴细胞 (抗体)T 淋巴细胞(需要几星期),免疫系统的两大分支,12.5,25.0,37.5,50.0,75.0,62.5,87.5,100.0,0,正常小鼠,人体T