细胞生物学大实验

培养基母液与培养基的配置摘要 本文主要详细地描述了三种培养基（MS、B5、N6）的微量元素母液的配置，和胡萝卜诱导培养基的配置，描述并分析在配置过程中遇到的问题以及解决方式，提出几点操作时的注意事项。1前言： 培养基是供植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，相当于人工配制的“土壤”，在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。培养基依据形态不同可分为固体培养基和液体培养基，前者因加有固化剂如琼脂或卡拉胶而呈固体状态，后者不加固化剂，为液体状态，两类培养基的操作和使用目的不同。在植物组织培养中，选用适当的培养基，是组织培养成功与否至关重要的因素。不同植物材料对培养基的要求不尽相同，在参考前人相关工作的基础上，设计系列培养基，并进行预培养和筛选，是非常必要的。2材料与方法2.1材料2.1.1 大量元素（如NH4NO3、KNO3、KH2PO4等）2.1.2微量元素（如KI、H3BO3、等）2.1.3有机成分（如甘氨酸、盐酸硫胺素、烟酸等）2.1.4肌醇2.1.5激素（6BA、NAA、2,4-D、KT）2.1.6琼脂2.1.7蔗糖2.1.8铁盐（Na2EDTA2H2O、FeSO47H2O）2.2方法：因我们组是配微量元素的母液，所以谨以此为例2.2.1 MS培养基微量元素母液（100x）的配置2.2.1.1用蒸馏水洗涤7个小烧杯，1个500ml容量瓶，玻璃棒若干2.2.1.2称取MnSO44H2O 1115mg，ZnSO47H2O 430mg，H3BO3 310mg，KI 41.5mg，Na2MoO42H2O 12.5mg，CuSO45H2O 1.25mg，CoCl26H2O 1.25mg分别用蒸馏水溶于不同烧杯。2.2.1.3将溶液倒入500ml容量瓶中混合，摇匀，用蒸馏水定容，写上配置日期，试剂名。2.2.1.4如所取量较小，如CoCl26H2O，则应配置10000x的溶液，然后定容至100ml容量瓶中，取其中的10ml于500ml容量瓶内。2.2.2 N6培养基微量元素母液（100x）的配置2.2.2.1用蒸馏水洗涤4个小烧杯，1个500ml容量瓶，玻璃棒若干2.2.2.2称取KI 40mg, H3BO3 80mg，MnSO44H2O 220mg，ZnSO47H2O 75mg分别用蒸馏水溶于不同烧杯2.2.2.3将完全溶解的溶液分别倒入500ml容量瓶中混合，摇匀，定容，贴上标签。2.2.3 B5培养基微量元素母液（100x）的配置2.2.3.1称取KI 37.5mg，H3BO3 150mg，MnSO44H2O 500mg，ZnSO47H2O 100mg，Na2MoO42H2O 12.5mg，CuSO45H2O 12.5mg，CoCl26H2O 12.5mg分别用蒸馏水溶于不同烧杯。2.2.3.2将完全溶解的溶液分别倒入500ml容量瓶中混合，摇匀，定容，贴上标签。2.2.4胡萝卜诱导培养基的配置2.2.4.1依次量取MS母液中的大量元素20ml（10x），微量元素2ml（100x），铁盐2ml（100x），有机成分2ml（100x），肌醇2ml（100x）于150ml三角瓶中，再加入2ml 0.1mg/L的2,4-D。2.2.4.2称取6g蔗糖与1.4g琼脂加入三角瓶中溶解后，加水至80ml，与微波炉中加热溶液至琼脂完全溶解。2.2.4.3用干净的玻璃棒沾取一点稍稍降温的溶液于PH试纸中，测其PH，然后加入酸或碱调节至5.65.8这一范围。2.2.4.4定容至100ml，用锡纸盖好瓶口，贴上标签，用高温加压锅灭菌，然后分装四个灭菌培养皿中。3讨论 3.1培养基母液3.1.1在称量之前要准确地计算用量。3.1.2要清晰地知道倍数的换算。3.1.3注意不同培养基母液的差异（成分所需不同）。3.1.4每种元素都需要分别溶解，不然可能造成不溶解等一系列后果3.2培养基3.2.1在配置之前应该了解清楚所培养的植物组织所需哪一种培养基，按照其所需加入，不能盲目。3.2.2培养基内的琼脂一定要保证全部溶解3.2.3加热后的溶液不能立刻测量PH，需稍稍放冷后进行，因温度或影响PH的大小，导致误差。胡萝卜再生体系的建立摘要 本实验以新鲜胡萝卜块根，用MS培养基愈伤诱导组织，然后培养其继代、分化以建立起胡萝卜的再生体系。实验结果表明胡萝卜形成层的愈伤诱导率为75%。另外，胡萝卜分化的出绿率达80%，出苗率为70%。与其他组的结果比较显示诱导率、出绿率、出苗率都普遍的偏高，原因应该与培养基有关和实验员的操作技术密切相关，后面会有详细的分析。1前言 胡萝卜(Daucuscarota L.)属于伞形花科植物，是世界上最重要的蔬菜作物之一。胡萝卜块根营养丰富，富含糖和植物纤维等，特别是富含胡萝卜素，是一种重要的营养保健品，因此，对胡萝卜进行遗传育种研究已成为迫切需要。2材料与方法材料 新鲜胡萝卜块根方法2.1培养基的配置（因本人在第一组，所以采用的第一组的培养基）2.1.1胡萝卜愈伤诱导培养基2.1.1.1 MS+2,4-D 0.1（mg/L）+糖30g/L+琼脂7g/L 2.1.1.2 B5+2,4-D 0.1+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.3 MS+2,4-D 0.5+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.4 B5+2,4-D 0.5+糖30g/L+琼脂7g/L PH 5.82.1.1.5 MS+2,4-D 0.5+NAA0.05+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.6 MS+6BA 0.2+NAA0.05+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.7 MS+6BA 0.2+NAA0.1+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.2胡萝卜继代培养基 MS+2,4-D 0.5（mg/L）+糖30g/L+琼脂7g/L PH 5.82.1.3胡萝卜分化培养基2.1.3.1 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L2.1.3.2 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L2.1.3.3 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.3.4 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.3.5 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.3.6 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.3.7 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L+谷氨酰胺0.7g/L2.2胡萝卜愈伤组织的培养2.2.1按上述数据配好培养基；2.2.2把一应需要用到的器具（250ml三角瓶 、4个培养皿、5个广口瓶、一个含有多张滤纸的培养皿、刀片）及培养基灭菌；2.2.3将新鲜的胡萝卜切成大小适中的四块，把其浸到0.1%的升汞中十分钟，然后取出，再依次把其放到无菌水上洗涤。2.2.4把洗干净的一块胡萝卜放到有滤纸的培养皿中，切去表皮，将含有形成层的小块接到已凝固的培养基上，封口，放到培养室25，暗培养。.2.2.5观察，记录数据2.3胡萝卜愈伤组织的继代培养2.3.1用灭菌镊子取若干块凝实的胡萝卜愈伤组织，放到灭菌的培养基上。2.3.2放好后封口，25，暗培养。2.4胡萝卜愈伤组织的分化2.4.1小心挑取色泽新鲜、状态好的胚性愈伤组织。2.4.2接入灭菌的培养基中，每瓶接种34块愈伤组织，共四瓶。2.4.3封口，贴上标签，放置在培养室25,2000lx每天光照10h。3结果与分析3.1胡萝卜愈伤诱导和继代 不同培养基对胡萝卜愈伤诱导的影响培养基污染率(%)愈伤诱导率(%)MS+2,4-D 0.1（mg/L）+糖30g/L+琼脂7g/L2575B5+2,4-D 0.1+糖30g/L+琼脂7g/L250MS+2,4-D 0.5+糖30g/L+琼脂7g/L1000B5+2,4-D 0.5+糖30g/L+琼脂7g/L33.3366.67MS+2,4-D 0.5+NAA0.05+糖30g/L+琼脂7g/L1000MS+6BA 0.2+NAA0.05+糖30g/L+琼脂7g/L1000MS+6BA 0.2+NAA0.1+糖30g/L+琼脂7g/L46.753.3与其他小组的实验结果比较可发现，我们的诱导率偏高，造成这个原因的我们可从表格上分析出来。第一，是我们实验的污染率太高以致不能准确地比较不同培养基成分对于胡萝卜愈伤诱导的影响。这个问题的原因很大的一部分是属于操作的失误，由于操作的不规范导致污染率的居高不下，进而影响整个实验的发展，这是我们需要反思的问题。另外，我们形成的愈伤组织比较致密，颜色微黄。愈伤组织继代后，在大块的愈伤组织旁会出现一些小的，偏白的，刚成形的愈伤组织，而大块的愈伤组织也有增大的现象。3.2胡萝卜愈伤组织的分化 不同分化培养基对胡萝卜愈伤分化的影响 分化培养基出绿率（%）出苗率（%）MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L8070MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L1000MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L1000MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L00MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L100120MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L1000MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L+谷氨酰胺0.7g/L00 从表格上看出，除开少数的数据误差，各组的出绿率都非常的高，而我们组偏低的原因，应该与我们配置的培养基成分有关，可以看到，我们的培养基是没有添加任何的激素的，这样就使胡萝卜愈伤分化时所需的营养不足，导致分化不了或分化时间增长。可以说我们的这个出绿率还是可以接受的。另外，我们组的出苗率相比与其他组是高了，究其原因，是大家实验操作的问题，因为与其他的组相比，相对营养较少的我们应该出苗率不会比他们高才对，另外的一个可能就是胡萝卜出苗不需要太多的激素。4讨论可以说，胡萝卜愈伤诱导率的偏低在很大的程度上是人为的操作失误，具体表现在高的污染率中，在超净工作台的操作中，老师也发现了我们很多操作上的问题并一一指出，这对我们接下来的实验很有好处。水稻再生体系的建立摘要 本实验主要以水稻的成熟胚为材料进行愈伤的诱导和愈伤组织的分化，通过配置不同的培养基，发现不同成分的培养基对水稻愈伤诱导、分化的影响，从而为以后一系列的相关实验提供依据。实验数据表明，本组的水稻愈伤诱导率为50%，污染率为40%，水稻愈伤分化的出绿率为10%，出苗率为0%。下面会就本组的实验数据以及本组数据与其他组数据对比的一些情况作出详细的分析。1前言 水稻是我国主要的粮食作物，为了创造新的种质资源，组织培养及基因工程技术被广泛用于水稻育种研究。现代生物技术育种的过程中，愈伤组织经常作为外源基因的受体，因此愈伤组织质量的好坏及其分化植株能力的高低，直接影响着水稻基因工程的进展，也影响着水稻种质资源的创新。本实验主要是在不同条件下建立水稻的再生体系，以期找到最合适的水稻愈伤，分化培养条件。2材料与方法材料 水稻成熟胚方法2.1培养基的配制2.1.1水稻愈伤诱导培养基2.1.1.1N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.2 N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.3 N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.4N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.2水稻愈伤继代培养基2.1.2.1N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+2,4-D 2.0mg/L2.1.2.2 N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+2,4-D 2.0mg/L2.1.2.3 N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+2,4-D 2.0mg/L2.1.2.4 N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+2,4-D 2.0mg/L2.1.3水稻愈伤分化培养基2.1.3.1 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L2.1.3.2 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L2.1.3.3 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.3.4 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.3.5 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.3.6 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.3.7 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L+谷氨酰胺0.7g/L2.2水稻愈伤组织的培养和继代2.2.1按照所需配好培养基2.2.2将所需培养基、培养皿等器具进行高压高温灭菌2.2.3将成熟水稻种子去壳，去壳后种子放入纱布中，用棉线捆好，剪掉多余的纱布和棉线，将捆好的种子放入75%酒精中浸泡30s后取出，在放到0.1%的升汞中15min后取出，然后在无菌水中洗涤五次。2.2.4在净工作台中剪开纱布，把种子小心地接到已灭菌的培养基上。每瓶接种45个，接4个培养皿，暗培养.2.2.5观察，记录数据，计算污染率，诱导率。2.2.6挑选致密的愈伤组织，用灭菌镊子夹出若干小块，放到灭菌的培养基上。2.2.7每个培养基放45个，共四个培养基，封口，贴上标签，暗培养。2.3水稻愈伤组织的分化2.3.1小心挑取色泽新鲜、状态好的胚性愈伤组织。2.3.2接入灭菌的培养基中，每瓶接种34块愈伤组织，共四瓶。2.3.3封口，贴上标签，放置在培养室25,2000lx每天光照10h。3结果与分析3.1水稻愈伤诱导 不同培养基对水稻愈伤诱导的影响愈伤培养基污染率（%）诱导率（%）N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L5040N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L1080N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L25100N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L10100 从实验的数据可知道，我们组的水稻愈伤诱导率为40%，污染率为50%。可以说我们的污染率实在是太高了，这个和我们操作的不规范有密切的关系。污染的过多不仅会导致实验的可信性下降甚至失败，也导致了资源的浪费，药品的浪费等问题。虽然现在做的实验可能花费不多，但就长远地看来，尽可能地减小污染率是对我们以后的发展有重要的意义。愈伤组织继代后，在大块的愈伤组织旁会出现一些小的，偏白的，刚成形的愈伤组织，而大块的愈伤组织也有增大的现象。3.2水稻愈伤分化 不同培养基对水稻愈伤分化的影响水稻愈伤分化培养基出绿率（%）出苗率（%）MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L100MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L6550MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L1515MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L100100MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L00MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L400MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L+谷氨酰胺0.7g/L00 实验结果表明，我们组的水稻愈伤分化培养中，出绿率为10%，出苗率为0，我们一共接种了18个水稻愈伤组织，只有两个是有出绿现象。另外还有不小的污染率。4结论与讨论4.1通过与其他小组的实验结果的对比发现，我们的诱导率比其他组的都小，原因应该在于培养基的成分，可以从表格上看出，我们的培养基没有加入激素的成分，这个对于愈伤的生长会有很大的影响，从而导致了我们较低的愈伤诱导率，而可以发现，加的激素多少和激素的种类同样对愈伤的生长有不同的影响。第三组与第二组的对比告诉我们，激素越多，愈伤生长的越好，第一组与第四组对比告诉我们，激素的种类越多，愈伤生长的越好，当然，激素的量的最大值与种类的确定都取决于所要诱导的愈伤种类，这里只是就本实验的结果讨论。4.2同样地，我们在水稻愈伤分化的实验上发现，激素的多少与种类直接地影响了愈伤分化的程度，而且通过这个实验，发现了比较适合分化水稻愈伤组织的培养基成分为MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L，其出绿率与出苗率都达到了100%，这个结果对我们以后要进行相关实验提供了很好的例子，依据。悬浮细胞系的建立及胚状体的诱导与观察摘要 本实验用水稻的愈伤组织建立悬浮细胞系，了解植物悬浮细胞培养过程，掌握悬浮细胞系建立和继代的保持方法，以及学习和掌握植物细胞悬浮培养物诱导胚状体的基本方法和过程。1前言 植物细胞悬浮培养是将单个游离细胞或小细胞团悬浮在液体培养基中进行培养增值的无菌培养技术。植物离体细胞作为生物反应器具具有生产周期短，提取简单，易规模化，不受外界环境干扰，而且产量高，化学稳定性和化学特性好等特点。因此熟练地掌握细胞悬浮培养技术，研究出最合适的植物离体细胞生长条件是非常重要的。2材料与方法材料 水稻成熟胚 水稻愈伤组织 玉米幼胚方法2.1培养基的配置2.1.1水稻愈伤诱导培养基2.1.1.1N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.2 N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.3 N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.1.4N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L2.1.2悬浮培养基N6+2,4-D 2mg/L+30%糖2.1.3玉米胚状体诱导培养基N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+2,4-D 2.0mg/L2.2水稻愈伤组织的诱导2.2.1按照所需配好培养基2.2.2将所需培养基、培养皿等器具进行高压高温灭菌2.2.3将成熟水稻种子去壳，去壳后种子放入纱布中，用棉线捆好，剪掉多余的纱布和棉线，将捆好的种子放入75%酒精中浸泡30s后取出，在放到0.1%的升汞中15min后取出，然后在无菌水中洗涤五次。2.2.4在净工作台中剪开纱布，把种子小心地接到已灭菌的培养基上。每瓶接种45个，接4个培养皿，暗培养.2.2.5观察，记录数据，计算污染率，诱导率。2.3悬浮细胞系的初建立2.3.1配置悬浮培养基N6+2,4-D 2mg/L+30%糖，分装四个烧瓶，每瓶100ml，灭菌。2.3.2将手洗干净，用75%酒精将手消毒，进入超净工作台开始接种操作2.3.3点燃酒精灯，将镊子，解剖刀在酒精灯下烤干。 2.3.4打开固体烧瓶盖，瓶口灭烧2.3.5打开液体烧瓶盖，瓶口灭烧2.3.6用镊子将固体愈伤夹一块放入液体瓶中，不断摇动并用镊子刮下松软的愈伤进入液体，最后剩下的愈伤捞出，继续放到固体培养基中2.3.7盖好液体瓶盖，将其放在摇床上180r/min 7d左右。2.4悬浮细胞系的继代2.4.1再次配置新鲜的培养基N6+2,4-D 2mg/L+30%糖2.4.2小心地将原有的培养基倒出1/3，再把新配制的培养基倒入烧瓶2.4.3封好瓶口，将其放在摇床上180r/min 2.5玉米胚状体的诱导2.2.1水稻成熟胚的愈伤诱导2.2.1.1按照所需配好培养基：N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/LPH5.82.2.1.2将所需培养基、培养皿等器具进行高压高温灭菌2.2.1.3将成熟水稻种子去壳，去壳后种子放入纱布中，用棉线捆好，剪掉多余的纱布和棉线，将捆好的种子放入75%酒精中浸泡30s后取出，在放到0.1%的升汞中15min后取出，然后在无菌水中洗涤五次。2.2.1.4在净工作台中剪开纱布，把种子小心地接到已灭菌的培养基上。发芽的培养基中，光培养的接6瓶，暗培养接2瓶，诱导愈伤的接4个培养皿，暗培养2.2.1.5观察，记录数据，计算污染率，诱导率。2.2.2悬浮细胞系的初建立2.2.2.1配置悬浮培养基N6+2,4-D 2mg/L+30%糖，分装四个烧瓶，每瓶100ml，灭菌。2.2.2.2将手洗干净，用75%酒精将手消毒，进入超净工作台开始接种操作2.2.2.3点燃酒精灯，将镊子，解剖刀在酒精灯下烤干。 2.2.2.4打开固体烧瓶盖，瓶口灭烧2.2.2.5打开液体烧瓶盖，瓶口灭烧2.2.2.6用镊子将固体愈伤夹一块放入液体瓶中，不断摇动并用镊子刮下松软的愈伤进入液体，最后剩下的愈伤捞出，继续放到固体培养基中2.2.2.7盖好液体瓶盖，将其放在摇床上180r/min 7d左右。2.2.3悬浮细胞系的继代2.2.3.1再次配置新鲜的培养基N6+2,4-D 2mg/L+30%糖2.2.3.2小心地将原有的培养基倒出1/3，再把新配制的培养基倒入烧瓶2.2.3.3封好瓶口，将其放在摇床上180r/min 2.2.4玉米胚状体的诱导配好培养基，灭菌，挑选致密的玉米愈伤组织放到培养基中，封口，贴上标签。3结果与分析3.1水稻愈伤诱导 不同培养基对水稻愈伤诱导的影响愈伤培养基污染率（%）诱导率（%）N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L5040N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L1080N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L25100N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L10100 从实验的数据可知道，我们组的水稻愈伤诱导率为40%，污染率为50%。可以说我们的污染率实在是太高了，这个和我们操作的不规范有密切的关系。污染的过多不仅会导致实验的可信性下降甚至失败，也导致了资源的浪费，药品的浪费等问题。虽然现在做的实验可能花费不多，但就长远地看来，尽可能地减小污染率是对我们以后的发展有重要的意义。愈伤组织继代后，在大块的愈伤组织旁会出现一些小的，偏白的，刚成形的愈伤组织，而大块的愈伤组织也有增大的现象。3.2水稻愈伤N6悬浮培养基 圖1 圖2 圖3图1、2、3分别是不同时期的水稻愈伤组织培养的情况。，从图上可看出两个趋势。一个是愈伤组织由少到多的趋势;一个是小块愈伤组织越来越多的趋势。随着摇床的不断震动，大块的愈伤组织逐渐松散，分离出去，分离出去的愈伤吸取了培养基的营养，然后不断地壮大，所以有了越来越多的愈伤组织。3.3胚状体的诱导观察冒形胚状体心形胚状体子叶形胚状体 如图所示，通过观察玉米的胚状体，我们能从中发现，心形、子叶形、冒形的胚状体。4讨论4.1通过与其他小组的实验结果的对比发现，我们的诱导率比其他组的都小，原因应该在于培养基的成分，可以从表格上看出，我们的培养基没有加入激素的成分，这个对于愈伤的生长会有很大的影响，从而导致了我们较低的愈伤诱导率，而可以发现，加的激素多少和激素的种类同样对愈伤的生长有不同的影响。第三组与第二组的对比告诉我们，激素越多，愈伤生长的越好，第一组与第四组对比告诉我们，激素的种类越多，愈伤生长的越好，当然，激素的量的最大值与种类的确定都取决于所要诱导的愈伤种类，这里只是就本实验的结果讨论。4.2因为我们班用胡萝卜进行悬浮培养的材料全部都污染了，所以不能进行水稻悬浮培养与胡萝卜悬浮培养的对比。水稻的遗传转化摘要 本实验主要通过农杆菌，介导水稻愈伤组织的遗传转化，来实现对具有抗性的愈伤的筛选。实验结果得出抗性愈伤组织的获得率为20%，文章后面会详细地分析在实验的过程中影响有效基因获得率的一些因素。1前言 农杆菌介导法对双子叶植物转化最为有效，80%的转基因植株均是采用农杆菌转化法获得的，具有很大的普遍性，因此，了解农杆菌介导法的基本原理和一般步骤，以及掌握农杆菌介导植物遗传转化的基本操作技术是具有重要意义的。2材料与方法材料 水稻成熟胚 水稻愈伤组织 方法2.1培养基的配制2.1.1LB培养基：15g酵母+10gNaCl+10g蛋白胨+25ug/mlKam PH7.02.1.2悬浮培养基：B5基本培养基+AS+糖30%2.1.3共培养基：B5+AS+糖30%+琼脂2.1.4杀菌筛选培养基：B5+头孢25g/L+羧卞25g/L+潮霉素20mg/L+30%糖+琼脂2.1.5水稻愈伤组织诱导培养基N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L PH5.82.2水稻成熟胚的愈伤诱导2.2.1将所需培养基、培养皿等器具进行高压高温灭菌2.2.2将成熟水稻种子去壳，去壳后种子放入纱布中，用棉线捆好，剪掉多余的纱布和棉线，将捆好的种子放入75%酒精中浸泡30s后取出，在放到0.1%的升汞中15min后取出，然后在无菌水中洗涤五次。2.2.3在净工作台中剪开纱布，把种子小心地接到已灭菌的培养基上，诱导愈伤的接4个培养皿，暗培养2.2.4观察，记录数据，计算污染率，诱导率。2.3农杆菌的培养、侵染与筛选2.3.1农杆菌培养条件LB，27，KamOD600=0.52.3.2在烧杯内取10ml悬浮培养基，再加入1ml农杆菌液2.3.3将水稻愈伤夹小到3mm大小后浸泡其中5min2. 3.4捞出到铺了滤纸的皿上2.3.5再转移到有滤纸的盖上沥去菌液2. 3.6接种到共培养基上（黑暗。24,2-3d）2.3.7把共培养基上的水稻愈伤转接到杀菌筛选培养基上2.3.8观察，记录数据，计算筛选获得率，污染率等。3结果与分析3.1水稻愈伤诱导 同培养基对水稻愈伤诱导的影响愈伤培养基污染率（%）诱导率（%）N6+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L5040N6+2,4-D 2.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L1080N6+2,4-D 4.0mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L25100N6+6BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L+谷氨酰胺700mg/L+水解酪蛋白300mg/L10100 从实验的数据可知道，我们组的水稻愈伤诱导率为40%，污染率为50%。可以说我们的污染率实在是太高了，这个和我们操作的不规范有密切的关系。污染的过多不仅会导致实验的可信性下降甚至失败，也导致了资源的浪费，药品的浪费等问题。虽然现在做的实验可能花费不多，但就长远地看来，尽可能地减小污染率是对我们以后的发展有重要的意义。愈伤组织继代后，在大块的愈伤组织旁会出现一些小的，偏白的，刚成形的愈伤组织，而大块的愈伤组织也有增大的现象。3.2抗性愈伤的获得 图1 图2实验结果显示，我们组的获得率为20%。图1为刚刚把愈伤组织放到杀菌筛选培养基上的图片，可看到因为愈伤组织表面的农杆菌没有搽干净，导致了农杆菌的繁殖。图2为在杀菌筛选培养基中培养了一段时间愈伤组织的情况，图中可看到有一些愈伤已经死亡，呈干枯的状态，而中间有一个成长良好的愈伤，应该就是获得了抗性的水稻愈伤组织了。4讨论4.1通过与其他小组的实验结果的对比发现，我们的诱导率比其他组的都小，原因应该在于培养基的成分，可以从表格上看出，我们的培养基没有加入激素的成分，这个对于愈伤的生长会有很大的影响，从而导致了我们较低的愈伤诱导率，而可以发现，加的激素多少和激素的种类同样对愈伤的生长有不同的影响。第三组与第二组的对比告诉我们，激素越多，愈伤生长的越好，第一组与第四组对比告诉我们，激素的种类越多，愈伤生长的越好，当然，激素的量的最大值与种类的确定都取决于所要诱导的愈伤种类，这里只是就本实验的结果讨论。4.2影响遗传效率的因素。首先是材料的选取，应该选取比较容易接受外源基因的物种和比较容易培养材料。而遗传的基因本身的特性也是一项重要的因素。然后就是操作人员的操作技术了，如何避免材料的污染，熟练的技术是必不可少的因素。然后是愈伤组织被侵染后转到杀菌筛选培养基时表面一定要搽干净，不要让多余的农杆菌出现，以致污染材料。当然了，培养时的温度，环境也会对遗传的效率有影响。烟草的组织培养摘要 本实验利用烟草花叶为材料，通过不同的培养基诱导其芽和根部的增值，以了解不同培养条件对烟草培养效果的影响。1前言 高等植物的组织培养（tissue culture）技术是指分离一个或数个体细胞或植物体的一部分在无菌条件下培养的技术。通常我们所说的广义的组织培养，是指通过无菌操作分离植物体的一部分(即外植体explant)，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。而烟草组培繁殖速度快，繁殖方式的多样，后代整齐一致的特性，对于获得无菌苗，工厂化生产有重要的意义。2材料与方法2.1材料 烟草叶2.2方法2.2.1培养基的配置2.2.1.1诱导芽的培养基：Ms+6BA 2mg/L+NAA0.1mg/L+30%糖+琼脂30g/L2.2.1.2诱导根的培养基：Ms+6BA 2mg/L+IBA 0.5mg/L+30%糖+琼脂30g/L2.2.2外植体的消毒2.2.2.1次氯酸钙10%中洗涤8min2.2.2.2无菌水洗涤3次2.2.2.3 0.1%升汞中浸泡15min2.2.2.4无菌水再次洗涤3次后备用2.2.3接种2.2.3.1将手洗干净，用75%酒精将手消毒，进入超净工作台开始接种操作2.2.3.2点燃酒精灯，将镊子，解剖刀在酒精灯下烤干。2.2.3.3取一无菌培养皿，然后用解剖刀切去1-2片无菌叶片置于无菌培养皿中，将也片切成2mm2左右大小2.2.3.4将切好的片块放到无菌的培养基上，盖好盖子，封上胶条并写上时间，名字。一种培养基做两个重复2.2.3.5将封好的培养基放到25-27的温度下，记录观察，统计污染率与诱导率3结果与分析3.1 不同培养基对外植体的影响 培养基污染率（%）诱导率（%）诱导芽：Ms+6BA 2mg/L+NAA0.1mg/L+30%糖+琼脂30g/L092诱导根：Ms+6BA 2mg/L+IBA 0.5mg/L+30%糖+琼脂30g/L093图一 图二图三 图四实验结果显示对于烟草发芽的诱导率为92%，对其长根的诱导率为93%。图一、二是生根培养基中不同时期烟草的生长情况，可见培养时间较长的图二中，烟草花叶有明显的增大。图三、四为发芽培养基中不同时期的烟草生长情况，同样地，图四中的烟草花叶也比图三种的要大。图二、图四的烟草叶表面有一层毛毛的增生，叶片由平躺到向内或向外弯曲，叶片的颜色也变得越发鲜艳、明亮。4讨论对于同一外植体来说，不同成分的培养基能诱导其不同部位的增值。而不同的外植体对于同一种的培养基也会有不同的效果。在设计实验的时候，必需遵循一定的原则，即保持大多数参数的一致，只改变一个，或两个的参数，这样能让我们更有效地得到某一参数对其实验结果的影响。如我们的实验式通过了保持培养温度、光照、外植体的一致，改变的是培养基的成分。而实验的结果就表明了就算是同样的外植体，对于不同成分的培养基，会增值出不同的器官。百合的组织培养摘要 本实验利用新鲜百合的不同部位放置于不同成分的用于诱发芽增值的培养基中进行培养，以期得到不同外植体部位对培养的影响以及不同培养条件对培养效果的影响1前言 高等植物的组织培养（tissue culture）技术是指分离一个或数个体细胞或植物体的一部分在无菌条件下培养的技术。通常我们所说的广义的组织培养，是指通过无菌操作分离植物体的一部分(即外植体explant)，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。百合是世界著名的观赏花卉之一，其栽培品种繁多，花色鲜艳，适宜温室周年栽培，鲜花市场销量很大，鲜花需求量逐年增加，在我国花卉市场占有重要地位。但百合的种球生产对环境条件要求较高，生产周期长，生产成本高，传统的繁殖方式容易导致百合种球感染病毒，造成种性降低。为了提高生产量，降低生产成本，组织培养是一项有效的途径。2材料与方法材料 新鲜百合方法2.1培养基的配置2.1.1MS+0.5mg/L 6BA+0.5mg/L NAA+3%蔗糖+琼脂 7g/L2.1.2 N6+0.5mg/L 6BA+0.5mg/L NAA+3%蔗糖+琼脂 7g/L2.1.3 B5+0.5mg/L 6BA+0.5mg/L NAA+3%蔗糖+琼脂 7g/L2.2百合的芽增殖2.2.1打破休眠48温水中每隔23min提起再泡入，反复23次后在4水中浸泡1h（冰箱中也可以）2.2.2将磷=鳞茎用自来水冲洗干净，分瓣，在自来水下冲30min于超净台内75%乙醇10s左右2.2.3放到0.1%升汞中15min后用无菌水洗5次2.2.4切去烂的部分，每块0.5cm21.0cm2接种，取上，中两部分，采取平躺式放入培养基培养，各接种四个培养基，一个培养基34块。2.2.5封口，贴上标签。观察，记录数据，计算出绿率和出芽率，污染率。3结果与分析3.1 不同部位不同培养基对外植体的影响 通过实验结果我们发现三种培养基对于百合不同部位的出绿率都差不多，主要的分歧在于出苗率的不同。对于培养百合的芽增殖来说，选用N6培养基更好，因为后者的比MS、B5要稳定，对于百合的上部与中部都有一定的效果，但若果我们要培养百合中部的话，选用MS的培养基会比较适合，因为我们能看到MS培养基对于中部的诱发有很好的效果，出苗率高达80%。而B5的培养基主要作用在百合的上部分。4讨论这个试验中一共有两个参数的变化，分别是外植体的种类和培养基的种类。在设计实验的时候，必需遵循一定的原则，即保持大多数参数的一致，只改变一个，或两个的参数，这样能让我们更有效地得到某一参数对其实验结果的影响。 玉米幼胚再生体系的建立摘要 本实验以玉米的幼胚为实验材料诱导愈伤组织，实现愈伤组织的分化培养。实验的结果表明，愈伤的诱导率为86.5%，出绿率为8.1%，出苗率为5.4%。下面会用本组的数据与其他组数据做对比从而得出一系列的结论。还会讨论在玉米幼胚培养是所要注意的事项。1前言 植物组织培养首先不仅可以生产大量的优良无性系，而且可以获得人类需要的多种代谢物质，其次，细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲和性障碍，在植物新品种的培育和种性的改良中发挥着巨大的作用。玉米是重要的粮食、饲料和工业用农作物，它的组织培养一直受到人们的普遍重视，建立高效的再生系统是进行突变体筛选、抗性、育种工作，特别是转基因研究的基础。2材料与方法材料 玉米幼胚方法2.1培养基的配置2.1.1玉米幼胚的愈伤诱导培养基2.1.1.1MS+2,4-D 2mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L 2.1.1.2 N6+2,4-D 2mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L2.1.1.3MS+6BA 0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L 2.1.1.4 N6+6BA 0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L2.1.1.5 MS+2,4-D 4mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L2.1.1.6 N6+2,4-D 4mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L2.1.1.7 MS+2,4-D 2mg/L+NAA 0.1mg/L2.1.2玉米幼胚愈伤组织的分化培养基2.1.2.1 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L2.1.2.2 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L2.1.2.3 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.2.4 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L2.1.2.5 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.2.6 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L2.1.2.7 MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3g/L+谷氨酰胺0.7g/L2.2玉米幼胚的诱导2.2.1按照所需配好培养基2.2.2将所需培养基、培养皿等器具进行高压高温灭菌2.2.3将玉米颗粒用纱布包好，用棉线捆好，剪去多余的纱布与棉线，把捆好的玉米放到0.1%升汞中灭菌10min，然后用无菌水洗涤四次后取出，解开纱布，用解剖刀和镊子找到玉米颗粒中的幼胚，将其取出放到培养皿中，一个培养皿放6-8颗，放四个培养基。2.2.4封口，贴上标签，观察，记录数据，计算污染率和诱导率。2.3水稻愈伤组织的分化2.3.1小心挑取色泽新鲜、状态好的胚性愈伤组织。2.3.2接入灭菌的培养基中，每瓶接种34块愈伤组织，共四瓶。2.3.3封口，贴上标签，放置在培养室25,2000lx每天光照10h。3结果与分析3.1玉米幼胚的愈伤诱导 不同培养基对玉米幼胚的愈伤诱导影响愈伤诱导培养基污染率（%）诱导率（%）MS+2,4-D 2mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L2.786.5N6+2,4-D 2mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L390.9MS+6BA 0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L00N6+6BA 0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L10100MS+2,4-D 4mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L050N6+2,4-D 4mg/L+糖 30g/L+琼脂 7g/L3070MS+2,4-D 2mg/L+NAA 0.1mg/L509.3 实验结果表明我们组的玉米幼胚愈伤诱导率为86.5%，污染率为2.7%。玉米的愈伤如图显示，比较致密、颜色微黄，出的苗也不多，为比较理想的诱导结果。3.2玉米幼胚的愈伤分化 不同培养基对玉米幼胚的愈伤分化影响玉米幼胚愈伤分化培养基出绿