微生物纯培养和显微技术

微生物学,生命科学学院,Microbiology,第2章 微生物的纯培养和显微技术,微生物的基本特点：,小！,在多数情况下都是利用微生物群体来研究其属性；微生物 (菌株)一般是以群体形式进行繁衍、保存。,培养技术在微生物学研究中具有重要意义！,混合培养物：含有多种微生物的培养物。,纯种培养物：只有一种微生物的培养物(pure culture)。,通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，纯培养技术是进行微生物学研究的基础！,培养物(culture)：,在一定的人为条件下，培养、繁殖得到的微生物群体。,微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术。,微生物的基本特点：,小！,因为绝大多数微生物的个体都远远低于肉眼的观察极限，形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。,实际上，正是由于显微技术和培养技术的建立，才使我们得以认识丰富多彩的微生物世界，真正使微生物学研究发展成为一门科学。,显微技术是进行微生物学研究的基础！,显微技术包括显微标本的制作、观察、测定、分析和记录等一系列内容。,第1节 微生物的分离和纯培养,微生物通常是肉眼看不到的微小生物，从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。,一 无菌技术,在分离、转接及培养纯培养物时，防止被其它微生物污染， 自身也不污染操作环境的技术， 称为无菌技术 (aseptic technique)，是保证微生物学研究正常进行的关键。, 微生物培养的常用器具及其灭菌,常用的器具：,试管、烧瓶、培养皿等。,1887年，R. J. Petri 发明,Petri dish,试管、烧瓶、培养皿是最常用的微生物培养器具，在使用前必须进行灭菌，使容器中不含任何生物。为了防止杂菌，试管和烧瓶用塞子塞口，空气可以通过，但是空气中的微生物不能进入。,培养皿是由正反 2 个平面板互扣而成，可以防止空气中微生物的污染。,高压蒸汽灭菌。有的玻璃器皿也可以采用高温干热灭菌方法。,最常用的灭菌方法：,通常使用棉花塞，也可用塑料帽或硅胶塞等。, 接种,火焰附近 (酒精灯、煤气灯)进行，防止培养器皿被环境中的其它微生物污染。,火焰灼烧灭菌。,在无菌条件下，用接种环或接种针挑取微生物，把它由一个培养器皿转接到另一个培养器皿中进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。,接种环 (针)：镍铬合金，易于迅速加热和冷却。,接种操作：在无菌箱或无菌室内的无菌环境下进行。无菌箱或无菌室的空气在使用前通过紫外灯或化学药剂灭菌。,琼脂,二 用固体培养基获得纯培养,培养基：,液体培养基半固体培养基固体培养基,培养微生物的营养物质,最早用来培养微生物的培养基是液体状态，固体培养技术首先是由德国细菌学家柯赫建立。,1882年，柯赫助手的妻子F. Hesse 具有丰富的厨房经验，听说荷兰用琼脂制作果冻和果酱，就建议使用琼脂作为凝固剂。,柯赫助手W. Hesse与夫人,菌落(colony)：,分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。,众多菌落连成一片,菌苔(lawn),当固体培养基表面上的众多菌落连成一片时，称为菌苔。,培养平板(culture plate) 最常用的固体培养基形式，是冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的固体培养基平面，简称平板(plate)。,不同微生物在特定平板培养基上生长，形成的菌落或菌苔一般具有稳定的特征，如形状、颜色等，可以成为对某种微生物进行分类、鉴定的重要依据。,同一种细菌在不同培养平板上形成不同特征菌落,使用固体培养基怎样获得微生物纯培养？,10倍系列稀释！,单个微生物可以在培养基表面或内部形成孤立菌落。一个孤立菌落非常可能就是单个微生物活体细胞生长、繁殖形成的纯培养。,获得单个微生物的活体细胞，最简单常用的方法就是：,1 稀释平板法(pour plate method),操作比较麻烦 (50)，对于好氧菌和热敏感菌的分离效果不好！,一定稀释度样品与溶化培养基混合,将与样品混合后的培养基倒入无菌培养皿,细菌菌落可能出现在平板的表面及其内部,一定稀释度的含菌材料,这个菌落可能就是由一个微生物细胞繁殖形成。,2 涂布平板法(Spread plate method),一定稀释度的含菌材料,使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！,预先准备琼脂平板，取一定稀释度样品涂布均匀,细菌的菌落一般只在平板表面生长,这个菌落可能就是由一个微生物细胞繁殖形成。,如果含菌材料稀释得当，在平板表面或内部就可能出现有一个微生物细胞繁殖形成的分散单个菌落纯培养物。,因此更常用的纯种分离方法是涂布平板法。,将含菌材料加到温度较高的培养基中倒平板容易造成某些热敏感菌的死亡。,采用稀释平板方法会使一些严格好氧菌被固定在琼脂中间因缺乏氧气而影响生长。,3 平板划线法(streak plate method),平板划线方法是使用接种环，通过无菌操作蘸取少量要分离材料，在平板表面划线，微生物细胞数量随划线次数的增加而减少。,如果划线适宜，分散后的微生物细胞经过培养后，可以在平板表面得到单个菌落。,划线法与平板法的比较,4 厌氧微生物的分离,厌氧罐：采用化学方法清除容器内的氧气,分子氧对厌氧微生物有毒害作用，必须在无氧条件下生长。,如果某种厌氧微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置于缺氧的密闭容器中培养。,稀释摇管培养法(shake tube method),将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基与空气隔开。 培养后在琼脂柱中央有厌氧菌菌落形成。,先将一系列盛有无菌琼脂培养基的试管加热，使琼脂熔化后冷却并保持在50左右。,用于分离严格厌氧菌：,三 用液体培养基分离纯培养,接种物在液体培养基中进行顺序稀释，得到高度稀释效果，使一只试管中分配不到一个微生物细胞。如果稀释后某个稀释度的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管中可能就是纯培养物。,主要用于原生动物和藻类等较大个体微生物的纯化分离，采用液体培养基分离纯培养的方法稀释法。,稀释法进行液体培养基分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数 (一般应超过95%)表现为不生长。,四 单细胞(孢子)分离,一般采用显微操作仪在显微镜下进行。,操作难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物易于操作，而细菌则较难。,采取显微分离技术从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体，经过培养后获得微生物纯培养物，这项技术称为单细胞(孢子)分离。,液体培养基稀释法的缺点是只能分离混杂微生物群体中占数量优势的种类。,单细胞分离对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究。,五 选择培养分离,根据分离微生物的特点，或抑制大多数微生物生长，或造成有利于目的菌株的生长环境，培养后目的菌株在群落中数量上升，再通过稀释方法获得纯培养。,选择培养分离是群落中数量占少数的微生物分离纯化方法。,当样本中某种微生物存在的数量与其它微生物相比较非常少时，仅采用一般的平板稀释方法几乎不可能分离到该种微生物，故需采用选择培养分离法。,待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制。,高温下培养：分离嗜热细菌；,培养基中不含N： 分离固氮菌；,培养基加抗生素：分离抗性菌。, 选择培养,待分离微生物的生长特征明显不同于其它微生物。,颜色反应：分离特定的菌株。,牛奶平板：分离蛋白酶产生菌株。,利用特定细菌的滑动特点进行分离纯化。,唾液链球菌,轻链球菌,如螺旋菌、粘细菌、蓝细菌等，能在琼脂平板表面滑行，这种滑行可以把它们与其它微生物分开。,即富集培养条件, 如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等，环境条件的选择可以考虑物理、化学、生物等各个方面的因素。, 富集培养,从自然界中分离到所需要的特定微生物,特定的环境条件,仅适应于该条件的微生物旺盛生长,待分离微生物在群落中的数量大大增加,是利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，适应于该条件的微生物旺盛生长而且在群落中的数量大大增加，使人们可以更容易的分离到需要的特定微生物，这种分离目的微生物的技术称为富集培养。,富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理条件的不同组合形式，可满足从自然界选择特定微生物的需要。,根据微生物特殊要求，从自然界分离出特定微生物种类。,分离培养在特定环境中生长的微生物,例如：利用富集培养从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物,富集培养技术用途,以对羟基苯甲酸为唯一碳源,培养基变混浊说明大量微生物生长,重复几次目的微生物占优势,七 微生物的保藏技术,菌种保藏的任务，是避免菌种：,1 衰退；,2 污染；,3 死亡。,通过分离纯化得到微生物纯培养，能够保持性状稳定是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。,中国普通微生物菌种保藏中心 (CGMCC)、中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)，及其美国典型菌种保藏中心(ATCC)等。,菌种保藏的基本原理：,根据菌种特性和保藏目的的不同，为菌种提供特定的保藏条件, 如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等, 降低微生物代谢强度和水平, 从而限制微生物生长和繁殖速度，使其处于半休眠或完全休眠状态。, 传代保藏,原理： 在4低温下，微生物代谢强度明显下降。,缺点：保藏时间短、传代频、易退化、易污染、工作量大。,改良：例如硅胶塞取代棉塞，液体石蜡封存。改良原则是降低培养物代谢、防止培养基干燥。,方法：针对不同菌种，选择琼脂斜面、半固体琼脂柱、液体培养基或者蒸馏水、缓冲液等在一定时间内接种。置于 4 冰箱保藏，定时传代。,保藏时间由于菌种的不同而有很大差异，有些可以保藏数年，有些菌种仅可保藏几周。,优点：适用于各种微生物，简便易行、易于观察，是进行微生物保藏的基本方法。, 冷冻保藏,原理：微生物处于冷冻状态，代谢作用停止，可以达到保藏目的。,微生物通过冷冻进行保存，在降温或升温过程中细胞内的水分形成冰晶，可能引起细胞尤其是细胞膜的损伤。为了减少冷冻过程对细胞的影响，宜采用“速冻速融”的方法，可以因为形成的冰晶小而减少对细胞或细胞膜的损伤。,甘油或二甲亚砜等可以透入细胞，通过降低强烈的脱水作用而保护细胞；大分子物质如糊精、血清蛋白、脱脂牛奶或聚乙烯吡咯烷酮等虽不能透入细胞，但是可以通过与细胞表面的结合而防止细胞膜冻伤，所以冷冻保藏菌种时加入保护剂可以提高培养物存活率。,冷冻时介质的保护作用可以显著减少细胞损伤。,缺点：需专门设备，适合专业保藏机构。,液氮保藏,冰箱保藏,一般来说，保藏温度越低，保藏效果越好。液氮保藏可以达到 -196，从适用范围、存活期限、性状稳定等方面来看，是微生物保藏方法中比较理想的一种。,冰箱保藏是使用更为普遍的菌种保藏方法。,一般推荐在-70低温冰箱中保存处于特殊生理状态 (如添加甘油20%(v/v) 做保护剂)菌株。,也可以使用 -20-30 的普通冰箱，但是普通冰箱的微小温度变化可能引起培养物的反复融化和再结晶，对菌体造成强烈损伤，保藏效果远低于低温冰箱。,将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管。一般将菌种接种斜面，培养后长出大量孢子，洗下制成孢子悬液。加入无菌沙土管中，减压干燥，抽干水份。用石蜡、胶塞封闭管口，置冰箱保存。, 干燥保藏,沙土管保藏,基于水分对生命活动的重要性，深度干燥是菌种保藏技术中的常用手段。,优点：简便易行，可以将微生物保藏较长时间。适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏。,冷冻真空保藏,将加有保护剂的菌体预先冷冻，然后在真空下通过升华除去水分。干燥密封的样品可以置于低温保存，菌种处于干燥、缺氧及低温条件，生命活动处于休眠状态，可以长期保藏。,菌种一般密封于安瓿管中，保存、邮寄、使用都很方便。,与显微镜自身特点有关，另外也取决于显微镜的正确使用及良好的标本制作技术和观察技术，这就是显微技术。,第2节 显微镜和显微技术,决定显微观察效果的三个重要因素：,放大 分辨率 反差,微生物个体微小， 必须借助显微镜放大系统的作用才能观察微生物的个体形态和内部构造。,：显微镜能辨别两点之间最小距离的能力。,观察对象区别于背景的程度。,观察对象区别于背景的程度。,：观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！,观察对象放大后分辨率才能提高,一 显微镜的种类及原理, 普通光学显微镜,普通光学显微镜暗视野显微镜 透射电子显微镜相差显微镜 扫描电子显微镜荧光显微镜 扫描隧道显微镜,简单显微镜,现代的普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，称为复式显微镜。,机械装置,镜座镜臂载物台调焦装置,光学系统,物镜目镜聚光器,机械装置是显微镜的基本组成单位，保证光学系统的灵活调控，一般固定不变。,光学系统决定着显微镜性能，是显微镜的核心。,光学显微镜的最大放大倍数是多少？为什么？,目镜10-15；物镜100 ；总放大倍数1000-1500。,怎样实现光学显微镜的最大放大倍数？其原理？,使用油镜，即在100物镜和载玻片之间滴加香柏油。,光学显微镜物镜的特性,肉眼的分辨能力在 0.2mm 左右，显微镜油镜可以达到的最大分辨率0.18mm，因此光学显微镜的有效最大放大倍数(使用油镜)是1000到1500，再进一步提高显微镜的放大能力，对观察效果的改善并无帮助。, 暗视野显微镜,普通光学显微镜又称明视野显微镜，其照明光线直接进入视野，属透射照明。,暗视野显微镜，是利用特殊聚光器实现斜射照明，光线不是直接穿过物镜，而由样品反射或折射后进入物镜。,整个视野是暗的而样品是明亮的，样品与背景反差增大如星星。主要用于观察生活细菌运动性。,二 显微观察样品的制备,样品制备是显微技术的一个重要环节，要根据显微镜和样品的特点来进行。注意尽量使样品生理结构保持稳定，并通过各种手段提高反差。, 活体观察,可以避免染色过程对微生物细胞结构的破坏，用于研究微生物的运动能力、摄食特性及生长过程中的形态变化，如细胞分裂、芽孢萌发等动态过程。,可以将菌悬液滴于载玻片上，加盖盖玻片后立即进行显微镜观察。,1 压滴法,2 悬滴法,涂布放线菌或霉菌孢子悬液于平板表面，然后铺上无菌小块玻璃纸，经培养，取下玻璃纸置于载玻片上，用显微镜对菌丝的形态进行观察。,在盖玻片中央加一小滴菌悬液后反转置于特制的凹载玻片上后进行显微镜观察，为防止液滴蒸发变干，一般还应在盖玻片四周加封凡士林。,3 菌丝埋片法,根据染料和方法的不同，细菌染色分为很多种类：,一般微生物菌体微小、无色透明，菌体被染色后借助颜色的反衬作用可以提高与背景间反差。,细菌染色法,死菌,正染色,负染色,简单染色法,鉴别染色法,革兰氏染色法,抗酸性染色法,芽孢染色法,荚膜染色法等,用美蓝或TTC(氯化三苯基四氮唑)等做活菌染色,姬姆萨染色法, 染色观察,活菌,结核分枝杆菌等抗酸性细菌的染色方法,血涂片的染色方法，主要检查疟原虫、立克次氏体、骨髓细胞等。, 革兰氏染色方法,丹麦医师C. Gram于1884 年发明，是微生物学研究中一种常用的染色方法。,操作过程可以分为初染、媒染、脱色和复染，其中脱色是染色试验成败的关键。,1 革兰氏染色结果,革兰氏阳性菌，G+。,革兰氏阴性菌，G-；, 用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染。, 用碘溶液进行媒染，提高染料和细胞间的相互 作用从而使二者结合得更牢固。, 用乙醇冲洗脱色。不易被酒精脱色的菌体仍然 为紫色，容易被脱色的菌体成为无色。, 用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂 片进行复染。例如沙黄，它可以使无色的细菌 最后呈现红色，而紫色细菌继续保持深紫色。,2 革兰氏染色过程,观察革兰氏染色结果,有关革兰氏染色机制，因为与细菌细胞壁的构造关系密切，所以学习完细胞壁构造后，再详细介绍。,第3节 显微镜下的微生物,微生物类群庞杂，种类繁多。包括细胞型和非细胞型两类，这里主要介绍细胞型微生物。,一 细菌和古生菌,从系统发育来看，细菌和古生菌是完全不同的生物类群，但是细胞结构基本一致，在显微镜下的形态十分类似。,凡是具有细胞形态的微生物称为细胞型微生物，按照系统发育和细胞结构，它们分属于细菌、古生菌和真核生物。,Woese三域学说,1 形态和排列,球状,杆状,螺旋状,基本形态,自然界中存在的细菌，在显微镜下进行观察时千差万别，基本形态主要有三种。,细胞呈球形或近似球形，不同种类的球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排列方式，这在分类鉴定上有着重要意义。, 球菌, 细菌,其中，杆菌最为常见，球菌次之，而螺旋菌最少。, 单球菌：细胞分裂沿一个平面进行，新个体分散而单独存在。如尿素微球菌(Micrococcus ureae), 双球菌：细胞分裂沿一个平面进行，新个体成对排列。如脑膜炎双球菌(Neisseria meningococcus), 链球菌：细胞分裂沿一个平面进行，新个体排成链状。如乳链球菌(Streptococcus lactis), 四联球菌：细胞分裂沿两个互相垂直的平面进行，分裂后的四个细胞特征性地连在一起，成田字形。如四联微球菌(Micro-coccus tetragenus), 八叠球菌：细胞分裂沿三个互相垂直的平面进行，分裂后每八个细胞特征性地叠在一起， 呈立方体状。例如尿素八叠球菌(Sarcina ureae), 葡萄球菌：细胞分裂无一定方向，分裂后多个细胞排在一起，犹如一串葡萄。如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。,我们介绍了球菌的六种排列方式， 但是无论对于那种类型的球菌培养物，其排列特点并不能经常保持一致。,在同一个葡萄球菌涂片中， 可以看见有的单个存在，有的成对存在，有的呈链状存在；在双球菌或链球菌涂片上，也可以见到分散存在或者聚集成堆的菌体。,细菌液体培养物或者固体培养物制成涂片，其排列方式也有差别。例如：在液体中生长的葡萄球菌很少成葡萄状，大多数分散存在或以短链存在。而液体中的链球菌则能连在一起形成长链；在固体培养基上，链球菌则以短链聚集成堆，同葡萄球菌类似。,要观察某种细菌排列方式，主要看占优势的排列，占优势的排列方式才能作为种的特征，才具有分类学意义。,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),皮肤感染,毛发根部感染金黄色葡萄球菌纵切示意图,手背处长出“疖子”,在脖子后面长出“粉刺”, 杆菌,细胞呈杆状或圆柱形，一般粗细(直径)比较稳定，而长度则因为培养时间、培养条件的不同而有较大变化。,根据杆菌的长和宽比例，杆菌可以分为：,短杆菌：近似球形，长与宽比值小，与球菌很难区分。 长杆菌：圆柱形，有的甚至呈丝状。,炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis ),皮肤炭疽病，是一种不痛的溃疡，但是非常难以治愈；肠炭疽就严重很多。,不管是哪一种类型的炭疽，都会发展成为败血症炭疽或者肺炭疽病，很容易引起死亡。, 螺旋菌,细胞呈弯曲杆状的细菌统称为螺旋菌。细胞分裂后常以单个分散状态存在。,弧菌,螺菌,弧菌,菌体只有一个弯曲，其程度不足一圈，形似“C”字或逗号。常与略弯曲的杆菌很难区分。,霍乱弧菌,螺菌,菌体回转如螺旋，弯曲超过一周以上，螺旋数目和螺距大小因种而不同，细胞壁坚韧，菌体较硬。,显微镜下的螺菌,幽门螺菌 Helicobocton pyloni, 其它形态, 柄杆菌(prosthecate bacteria),细胞上有柄(stalk)、菌丝(hyphae)、附器(appendages)等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性细柄。,一般生活在淡水中固形物表面，异常形态使得菌体的表面积与体积之比增加，能有效吸收有限的营养物质。,2 放线菌,放线菌是具有菌丝、以孢子进行繁殖、革兰氏染色阳性的一类原核微生物，属于细菌范畴。,放线菌具有分枝发达的菌丝，菌丝按照形态和功能可以划分为营养菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。,营养菌丝,孢子丝,气生菌丝, 营养菌丝,放线菌孢子在固体培养基表面萌发后，向基质内层扩展，形成大量颜色较浅、具有吸收营养和排泄废物功能的菌丝，也称基内菌丝。一般无隔膜，直径0.2 -0.8 mm，有的可产生色素。, 气生菌丝,放线菌形成营养菌丝的同时，不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗分枝菌丝，覆盖整个菌落表面，称为气生菌丝。直径较粗1-1.4 m，有的产色素。, 孢子丝,放线菌的气生菌丝发育到一定阶段，上面可以分化出形成孢子的菌丝，即孢子丝。其形状和排列方式因种而异，常被作为对放线菌进行分类的依据。,放线菌孢子丝类型,直形,弯曲丛生,成束,单轮生无螺旋,开环钩形原始螺旋形,松螺旋,紧螺旋,螺旋单轮生,无螺旋两级轮生,螺旋两级轮生,3 影响细菌形态的因素, 遗传因素：“龙生龙、凤生凤”，球菌的子代 细胞仍然是球菌，杆菌的子代细胞也仍然是 杆菌。, 环境条件：细菌形态明显受环境条件的影响， 如培养时间、培养温度、培养基的组成、pH 等各种条件发生改变，都可能引起细菌形态 改变。,4 异常形态,在较老的培养物中，或不正常条件下，细胞常出现不正常形态，例如杆菌细胞膨大、出现梨形或产生分枝、菌体显著伸长等，这些不规则的形态，统称为异常形态。,理化学因子刺激,培养时间过长,阻碍细胞正常发育,细胞衰老,营养缺乏,自身代谢产物积累过多,正常形态,条件正常,异常形态, 古生菌,1977年，Carl Woese 以rRNA 序列依据，提出独立于真细菌和真核生物之外的第三种生命形式。,Eubacteria 真细菌,Archaea 古生菌,Eukarya真核生物,最初称古细菌(Archaebacteria)；后称古生菌(Archaea)。,在分类上与真细菌和真核生物并列为三域(Domain)，并且在进化谱系上更接近真核生物。,在细胞形态构造上与真细菌较为接近，同属原核生物。,古生菌多生活在条件恶劣的极端环境当中(如高温、高盐、高酸等)，在显微镜下古生菌与细菌具有类似的个体形态。,星形细菌(star-shaped bacteria ),方形细菌(square-ahaped bacteria),隐蔽热网菌(Pyrodictium occultum)形如丝网，最适生长温度是105, 细菌与古生菌的细胞大小,细胞大小随种类的不同差别很大，较小细菌在光学显微镜下勉强可见，较大的细胞同藻类差不多，几乎用肉眼就可以看到，但是多数居于二者之间。,最小：,与病毒相仿(50nm);,最大：,肉眼可见(0.75mm).,费氏刺骨鱼菌(Epulopiscium fishelsoni，0.08 mm 0.6 mm)比大肠杆菌大 100 万倍(1985年发现),德国科学家H. N. Schulz等 1999年在纳米比亚的海底沉积物中发现一种细菌, 可达0.75mm，Thiomargarita namibiensis “纳米比亚硫磺珍珠菌”, 菌体几乎与果蝇头部大小相当。,纳米细菌(nanobacteria)（50nm）1998年芬兰科学家E. O. Kajander等报道的最小细菌，可以引起尿结石。,最大和最小细菌的个体大小悬殊,纳米比亚硫磺珍珠菌(Thiomargarita namibiensis，0.75mm),10亿 100 亿倍,球菌的大小用直径表示；杆菌和螺旋菌的大小用宽度和长度表示。注意：螺旋菌长度不是它真正长度，而是菌体两个端点距离。如果测量螺旋菌真正长度，应按照螺旋直径和回转圈数进行计算。,细菌和古生菌的细胞大小的常用单位是微米(m)。,使用显微镜测微尺可以比较容易、比较准确的测出菌体大小。,0.5 - 1mm,0.2-1mm1-80mm,0.3-1mm1-50mm，长度是菌体端点间距离。,影响细菌大小的因素, 影响细菌形态的因素同样影响细菌大小。如遗传因素、培养时间、培养温度、培养基组成、pH等。, 细菌大小与染色方法、固定方法有关。用负染色方法菌体常大于普通染色方法， 甚至比活菌体还大，具有荚膜的细菌容易出现这种现象。细菌大小与固定方法有关， 经过固定的菌体，比活菌体的度一般要缩短1/3-1/4。 谈到细菌大小的时候， 一般要说明染色方法。, 菌龄。一般幼龄细菌比老龄细菌大，如枯草杆菌，培养4h比培养24h的菌体长5-7倍，但是