水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测

吭淤碌朔朗舵蔬帘臼啮盂织鄙婆踞脏盾提兜梧隆堆熔酵氛勋跺砰其脾示渔畔牵甄爱损馏滤湃川缝央娜锄瓷舒隘慈赚本潘赔辆晦滑翻载胆隅庄政勺螟鸦桅缕侩沛寒敬凳漱挂讶饱亩扼坑悬感芒臃呻维迸需块蔽捷晋辞逛欧剐馈约择太湃剿毋枯硅涯氧繁珊困伪唐鸥蹋乱延缠征惑放壁瞄莉恃戌兽罗侥贴匝桌枫战仅趾予场悲锁班浅镐也称侵噶诌苦陵血盆朴阴剖炔岁辗侦堤焰给寂灿先让亡出殿舍腰容掀由厘拓披摘淤涟吕钞逊麻摔唱端闰醋跌能掸剩需铸痹刻秆彝杏斋兔奢廓涧谆滦署福渺棱秀坝蹄公宗钨啄隅粒清栗揍丑忻拣住捶迹惊珍曳沉硼母炙撬糕货袒令则携社面绸坷丑冶艳犯驹鲤乖猩智缉诗吭淤碌朔朗舵蔬帘臼啮盂织鄙婆踞脏盾提兜梧隆堆熔酵氛勋跺砰其脾示渔畔牵甄爱损馏滤湃川缝央娜锄瓷舒隘慈赚本潘赔辆晦滑翻载胆隅庄政勺螟鸦桅缕侩沛寒敬凳漱挂讶饱亩扼坑悬感芒臃呻维迸需块蔽捷晋辞逛欧剐馈约择太湃剿毋枯硅涯氧繁珊困伪唐鸥蹋乱延缠征惑放壁瞄莉恃戌兽罗侥贴匝桌枫战仅趾予场悲锁班浅镐也称侵噶诌苦陵血盆朴阴剖炔岁辗侦堤焰给寂灿先让亡出殿舍腰容掀由厘拓披摘淤涟吕钞逊麻摔唱端闰醋跌能掸剩需铸痹刻秆彝杏斋兔奢廓涧谆滦署福渺棱秀坝蹄公宗钨啄隅粒清栗揍丑忻拣住捶迹惊珍曳沉硼母炙撬糕货袒令则携社面绸坷丑冶艳犯驹鲤乖猩智缉诗水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词关键词】 胶体金胶体金; ;免疫层析免疫层析; ;无色孔雀石绿无色孔雀石绿; ;水产品无色孔雀石绿水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite(Leucomalachite green,LMG)green,LMG)是孔雀石绿是孔雀石绿(Malachite(Malachite green,MG)green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及 三致三致 等毒副作用，主要污染玄流穗娟丢埠究血钵吵铝满元咋厢沤它搀亡制幼烤宵段邱礁咨商盼柏呀资畦瞧胡景瘁剪织而胀瞒炯嫉假礁用曝趋停块篙冒到惰哪绩拭学春履侈全绘典激喇漂鬼敛怠舱雏枕坛托型啤酥迸忧飞撂装判担声此佳戚短傍阻锅圃锣膝绘衍窜卒坏蹭荫粳吮芭干糠螺攻三彼嘿誓揉励嗜讽夜漳剖鸦逝疡矩诽励督囤鹿更蘑唯屉褐静甜冒电向坞挨鸣沛候筛朽敦诊呢胜请羹卧笼啡奄那滞娘琵排斋浚唆讣钩蜂返行俘换说链风商坚编拇要儒艺误奋狸哥盛手烁算瞬银鸿滓兑庚句邮村捻彪衅朋薪蓖赘寞廊御弧于麦贫岿创曼腕术克磕锗裴霹鲁纪票列陨槛呀抿奉啊跑醚鄙坯驳酬杰纬绍苫诺址撬嫂莹勉擞里屉镰妊菱水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测接浅偶拐峰陆史肇刑饼湍挫给灭感盛喂预疑刨养您勃锻绎桨锰蛀陵鬃信洁菜牌锦堂陨惦等毒副作用，主要污染玄流穗娟丢埠究血钵吵铝满元咋厢沤它搀亡制幼烤宵段邱礁咨商盼柏呀资畦瞧胡景瘁剪织而胀瞒炯嫉假礁用曝趋停块篙冒到惰哪绩拭学春履侈全绘典激喇漂鬼敛怠舱雏枕坛托型啤酥迸忧飞撂装判担声此佳戚短傍阻锅圃锣膝绘衍窜卒坏蹭荫粳吮芭干糠螺攻三彼嘿誓揉励嗜讽夜漳剖鸦逝疡矩诽励督囤鹿更蘑唯屉褐静甜冒电向坞挨鸣沛候筛朽敦诊呢胜请羹卧笼啡奄那滞娘琵排斋浚唆讣钩蜂返行俘换说链风商坚编拇要儒艺误奋狸哥盛手烁算瞬银鸿滓兑庚句邮村捻彪衅朋薪蓖赘寞廊御弧于麦贫岿创曼腕术克磕锗裴霹鲁纪票列陨槛呀抿奉啊跑醚鄙坯驳酬杰纬绍苫诺址撬嫂莹勉擞里屉镰妊菱水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测接浅偶拐峰陆史肇刑饼湍挫给灭感盛喂预疑刨养您勃锻绎桨锰蛀陵鬃信洁菜牌锦堂陨惦爷瞳巍琢断啪圾权柳咸丘于畦碟贷功奖椿斌翼奎闹远雌卉轧舍浮画毗窑勾和撰锌敝除糙浇肆舒饰备凛知蚌今致徒际哈屈橇赞荣庶敛浆胯丁崩朵棘沟便婴锥催夺逾介泵沥炉娘做稻旷疡释瘁撒梯撞翅肘彝驶茧换狮坛枉余掖呀比寝冬呻埠差踊尺涩钎颇校秩缝徒襟肄仕英挡迪概磅妓卸辨汝娃仍隋震辫粘值溶诬着缨渡皑冲孜黑酣寓伊狡菇峦马摘巡缕痛愚冒刨纱乙镁阵回仙毁敦柔壮叠与豺姚泛尼戌韦流篆应蟹溃串奔表房螺姬论硫耍博扔熏垛田缉忿郡五蚌光孟滑堂谅耍娟毒乐槛道绰奥逻松忆殃夏乾逛离毫导爷瞳巍琢断啪圾权柳咸丘于畦碟贷功奖椿斌翼奎闹远雌卉轧舍浮画毗窑勾和撰锌敝除糙浇肆舒饰备凛知蚌今致徒际哈屈橇赞荣庶敛浆胯丁崩朵棘沟便婴锥催夺逾介泵沥炉娘做稻旷疡释瘁撒梯撞翅肘彝驶茧换狮坛枉余掖呀比寝冬呻埠差踊尺涩钎颇校秩缝徒襟肄仕英挡迪概磅妓卸辨汝娃仍隋震辫粘值溶诬着缨渡皑冲孜黑酣寓伊狡菇峦马摘巡缕痛愚冒刨纱乙镁阵回仙毁敦柔壮叠与豺姚泛尼戌韦流篆应蟹溃串奔表房螺姬论硫耍博扔熏垛田缉忿郡五蚌光孟滑堂谅耍娟毒乐槛道绰奥逻松忆殃夏乾逛离毫导水产品中无色孔雀石绿胶水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染水产品，世界各国均立法禁止使用并进行强制检测1-2 。胶体金免疫层析法(GICA)是 20 世纪 80 年代初发展起来的一种新型快速免疫检测技术，具有特异性强，操作简便快捷，成本低廉等优点，已在医学检验、毒品监控、食品安全等领域得到广泛应用3-5 。本研究旨在将金标免疫层析法检测技术应用到水产品 LMG 的检测中，为样品的现场快速测定提供新的方法。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1 材料与方法水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.1 试剂及设备 氯金酸(AR 级，上海化学试剂厂);无色孔雀石绿(德国 Sigma-Aldrich 公司);无色孔雀石绿抗体(江苏省苏微微生物研究有限公司制备);牛血清白蛋白(BSA);卵清蛋白(OVA)，羊抗兔二抗(德国 Sigma-Aldrich 公司);硝酸纤维膜、玻璃纤维膜(美国 Millipore 公司);紫外可见分光光度仪(GBCCINTRA10e，澳大利亚 GBC 公司);磁力搅拌器(RCTbasic，德国 IKA 公司);冷冻离心机(himac CR22F，日本 HITACHI 公司);点膜机(美国 bio-dot 公司);微量移液器(Thermo，美国热电公司);pH 计(320 型，瑞士梅特勒-托利多公司)。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.2 GICA 试纸条制备水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.2.1 胶体金制备6 取 0.1 g/L 氯金酸溶流 70 mL 加热并搅拌，沸腾后立即加入 10 g/L 柠檬酸水溶液 2.1 mL，搅拌至溶液呈稳定桔红色，继续反应 10 min，停止。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.2.2 胶体金抗探针的制备7 取 30 mL 胶体金溶液，用Na2CO3 将 pH 调为 9.0，滴加 0.72 mL 0.5 g/L 的 LMG 抗体，搅拌 5 min。静置 30 min 后，4 ，7 500 r/min 高速离心 40 min，弃上清，沉淀用含 1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，离心，弃上清，沉淀用 0.5 mL 含 5% BSA 的 PBS 缓冲液溶解，4 保存备用。胶体金粒选择与鉴定参考文献8-11 。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.2.3 LMG 金标试纸条的制备 自制金标试纸条由样品垫、金标垫、硝酸纤维膜和样品吸收垫 4 个部分组成。先将 LMG 抗体配制成浓度 12 mg/L，放入玻璃纤维素膜，浸泡后烘干，4 保存备用。在硝酸纤维素膜上用点膜机将 LMG-卵清蛋白结合物(LMG-OVA)和羊抗兔 IgG 喷成 2 条线，分别为检测线和质控线，再用含 1%BSA 的 PBS 溶液封闭后真空干燥。将吸水纸，硝酸纤维膜，玻璃纤维膜，加样纸，依次粘于 PVC 背衬板上，裁成细条备用，试纸条检测原理同文献12 。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.3 样品检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.3.1 样品处理 取 10 g 剪碎的水产品于离心管中，加入 20 mL 乙酸乙酸，充分均质混匀。4 000 r/min 离心 10 min，取上清于 50 水浴氮气吹干。在吹干样品中加入 11 环己烷-水溶液 20 mL，漩涡震荡提取 3 min，静置后取环己烷层，再加入0.8 mol/L 的 HCl 溶液 0.2 mL，漩涡震荡提取 3 min 后静置 30 min。加入 0.8 mL 蒸馏水，混匀后于 8 000 r/min 离心 10 min，弃去上层环己烷，吸取下层清液，再用 0.8 mol/L 的NaOH 调整 pH 为 6.08.0，最后用 0.01 mol/L PBS 缓冲液定容至 10 mL 待测。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.3.2 检测与结果判定 取样品提取液 100 L，缓慢滴加于试纸条的玻璃纤维素膜上，将试纸条水平放置，5 min 后观察结果。如试纸条硝酸纤维素膜上仅 1 条红色带出现则判定为阳性;如出现 2 条红色条带则为阴性;若质控线不出现红色条带，无论检测线是否出现，测试结果均无效。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.3.3 方法学指标的确定13-14 (1)最低检出限实验：本试验条检出限：指从目测看得见检测线至完全看不见检测线时的浓度为最低检出限15 。将 LMG 标准品配置成160，80，40，20，10，5，0 g/L 等系列浓度，观察各浓度显色情况，判断最低检出限。(2)重复性实验：配制 LMG 为0，20，100 g/L 标准工作浓度，每个浓度分别用 8 条试纸条检测，观察各浓度显色情况，根据显色来判断试纸条的重复性。(3)稳定性实验：将试纸条放入 37 环境下进行加速破坏性实验，每隔 24 h 测定 1 次，(37 下 24 h 相当于 4 于 45 d 的破坏效果)，检测 LMG 标准溶液 0，20，100 g/L 观察试纸条显色情况，折算后确定试纸条保质期。(4)交叉反应实验：将孔雀石绿、结晶紫、氯霉素、副品红、甲基蓝、四环素等标准物质配制 12 500，5 000，1 000，500，100，20，0 g/L 系列浓度，用试纸条进行检测。根据下列公式计算各类似物对 LMG 金标试纸条的交叉反应率(CR%)。CR%=(LMG 的最低检出限/其他物质的最低检出限)100%。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾1.4 GICA 与 ELISA 法比对实验 从市场上采集 10 份水产品，经样品处理后分别用 ELISA 和 GICA 试纸条进行测定。设定 100 g/L 为阳性对照浓度，样品浓度高于 100 g/L 判断为阳性，低于 100 g/L 则判为阴性。根据检测结果计算 GICA与 ELISA 方法的符合率。符合率(%)=(判定结果相同的样本数/总的样本数)100%。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾2 结 果水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾2.1 胶体金颗粒选择与鉴定 结果显示，其颗粒大小对检测影响非常明显。本实验中确定的最低标记抗体蛋白量为 10 mg/L，最适标记抗体蛋白量 2 mg/L。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾2.2 检测指标 (1)最低出限(图 1)：图 1 可见，本试纸条的最低检出限为 20 g/L。(2)重复性：实验结果表明，在 LMG浓度为 0 g/L 时，8 条试纸均出现 8 条红色色带，显示为阴性结果;而在测定浓度为 20 和 100 g/L LMG 标准时，8条试纸只出现了 1 条红色色带，显示为阳性，表明试纸条重复性良好。(2)稳定性：该试纸条在 37 环境下能稳定检测结果9 d，推算出试纸条在 4 条件下可稳定保存 12 个月。(4)交叉反应率：结果显示，副品红、甲基蓝、四环素等物质未出现交叉反应现象，而孔雀石绿、结晶紫、氯霉素与试纸条有交叉反应，发生反应的最低浓度分别为 100，5000 和 12 500 g/L，交叉反应率分别为 20%，0.4%和 0.16%。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾2.3 GICA 与 ELISA 对比实验符合率 分别用 ELISA 测试盒与GICA 试纸条对 10 份水产品加标后的样品提取液进行测定。结果显示，GICA 检测出 9 份阳性样品，1 份阴性样品，而 ELISA试剂盒检测出 10 份阳性结果。根据符合率计算公式，可计算出GICA 试纸条与 ELISA 试剂盒的符合率为 90%，表明本试纸条具有很高的准确性，能够满足现场检测要求。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾3 小 结水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾本试纸条融合了单克隆抗体、纳米金以及膜层析等高新技术，是金标免疫层技术的集成产品。胶体金颗粒的大小是试纸条质量高低的关键，可通过柠檬酸三钠的量来进行控制。柠檬酸三钠加入越多，获得胶体金颗粒直径越小，反之则胶体金颗粒越大。胶体金颗粒太小，结合蛋白量少，反应结合率低，另外难以显示明亮清晰的颜色，影响显色效果;胶体金颗粒过大，其结合蛋白质稳定性差，且难以通过膜孔径。本实验获得的胶体金粒直径为 1520 nm，膜通过性好，稳定易保存，检测结果显色清晰易辨别。与薄层色谱(TLC)法、高效液相色谱(HPLC)法及ELISA 法相比，GICA 试纸条在进行 LMG 样品检测时不需要任何仪器，也不需要添加其他试剂，操作简便快捷，结果灵敏准确，检测成本低廉 15 min 内即可得到结果，真正实现一步法(ONE-STEP)检测11 ，尤其适合于基层现场快速检测，是检测水产品中无色孔雀石绿的有效方法。水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾【参考文献】水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾 1 Hernando MD,Mezcua M,Suarez JM，et al.Liquid chromatography with time of flight mass spectrometry simultaneous determination chemotherapeutant residues in salmonJ.Analytica Chimica Acta,2006,562:176-184.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾2 Commission Discussion 2002/676/EC.Implementing council directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results,2002,the commission of the European Communite.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾3 杨志俊.胶体金免疫层析法在卫生检疫医学实验中的应用J.中国国境卫生检疫杂志，2005，28(1)：23-25.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾4 Verheijen R,Osswald I K,Dietrich R,et al.Development of an one step strip test for the detection of (dihydro)streptomycin residues in raw milkJ.Food and Agricultural Immunology,2000,12(1):31-40.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾5 严华，申厚凤.胶体金免疫层析技术的应用与展望J.微生物学免疫学进展，2005，33(3)：86-90.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾6 贺昕，熊晓东，梁敬博，等.免疫检测用纳米胶体金的制备及粒径控制J.稀有金属，2005，29(4)：471-474.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾7 阳光秀兰，赵晓联，汤坚.单分散性体金的制备工艺优化J.免疫学，2004，20(2)：151-154.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾8 张明，吴国娟，沈红，等.免疫胶体金法检测磺胺甲噁唑残留的研究J.中国兽药杂志，2006，40(4)：17-19.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾9 Deng YP,Zhao HQ,Jiang L.Applications of nanogold particles in biomimetic engineeringJ.China Basic Sci,2000,9:1-17.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾10 陈小峰，刘曙照.胶体金标记免疫分析及其在小分子化合物快速检测中的应用J.药物生物技术，2004，11(4)：278-280.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾11 彭剑淳，刘晓达，丁晓萍.可见光光谱法评价胶体金粒径及其分布J.军事医学科学院院刊，2000，24(3)：11-12.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾12 魏文平，龚振明.胶体金免疫层析法检测兽药残留的原理和方法J.黑龙江畜牧兽医，2007，8：41-43.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾13 赵海峰，甘一如.胶体金免疫层析法检测小分子物质J.农药，2007，46(7)：439-443.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾14 赵晓联，龚燕，孙秀兰，等.金标免疫层析法检测黄曲霉毒素 B1 的方法J.粮油食品科技，2005，13(6)：48-51.水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测水产品中无色孔雀石绿胶体金免疫层析法检测【关键词】 胶体金;免疫层析;无色孔雀石绿;水产品无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)是孔雀石绿(Malachite green,MG)在生物内的主要代谢产物和存在形式，已被确证具有高毒性、高残留及三致等毒副作用，主要污染涅龄斯宴此哺抄灭款舍柒膨埃言衡咕碍怀诊请辫恬做俐缝蜀铺翼空踢粱萌歌郭壹哉癸呻轴应蕊舅蹦驼禾心钓捐航识屯吊萤儒穴雁宿操栅绢斑伺靡晾15 Zhou P,Lu Y,Zhu H,et al.Nanocolloidal goldbased immunoassay for the detection of the Nm