毛细管电泳

毛细管电泳技术在糖类物质分析中的应用,三.毛细管电泳在糖类分析中的应用,四.毛细管电泳在糖类分析中的前景,二.毛细管电泳在药物研发中的应用,一.毛细管电泳概述,报告内容,毛细管电泳原理,利用目标分子荷质比的差异进行分离,毛细管电泳仪,类型 检测限/mol 特点紫外-可见 10-1310-15 加二极管阵列，光谱信息荧光 10-1510-17 灵敏度高，样品需衍生激光诱导荧光 10-1810-20 灵敏度极高，样品需衍生电导 10-1810-19 离子灵敏，需专用的装置；,检测器,高效毛细管电泳特点及分离模式,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,一、离子分析,阳离子,阴离子,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,二、手性化合物分析,常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性剂（氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂）,手性药物的对映体在生物体内因为立体选择性，将作为不同的分子加以识别。导致具有各自的药理活性和毒性。例如：R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形；,王竞,程煜凤,吴小丽。基于毛细管电泳法人血清的代谢组学研究J。中国抗生素杂志,2013,38(9):648-695.,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,氨基酸,三、核酸和氨基酸分析,核酸,Tomoyoshi S, Motohiro I. Capillary electrophoresis method for the analysisof inorganic anions, organic acids, amino acids,nucleotides, carbohydrates and other anionic Compounds.Electrophoresis 2001, 22: 34183425,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,四、临床应用和食品安全检查,毛细管电泳法测定微量清蛋白/肌酐( Alb/Cr)比值，用于诊断糖尿病肾病,2 赵绍林, 吴惠毅, 吉艳等,高效毛细管电泳法同时测定尿液清蛋白和肌酐 J.临床检验杂志,2007,25(5):338-340.,1 钦雄, 童 敬, 郭 平等,高效毛细管电泳法测定牛奶和奶粉中残留的三聚氰胺J. 色谱，2009,26(6)：755-758.,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,五、药物代谢中的应用和蛋白相互作用分析,毛细管电泳测定血浆中班布特罗和特布他林。3.班布特罗、4.特布他林。,1史爱欣 , 李可欣 , 曹国颖等，高效毛细管电泳法测定班布特罗及其代谢物特布他林的血药浓度。药物分析杂志, 2001，21(4)：290-293.,2 He XY, Ding YS, Li DZ. Recent advances in the study of biomolecular interactions by capillary electrophoresisj. Electrophoresis 2004:25:697711.,高效毛细管电泳在糖类物质分析中的应用,高效毛细管电泳在糖类物质分析中的应用,其灵敏度较低、分离能力较差，该方法只适合于糖类物质定性分析,快速、微量、自动化、高灵敏度和低分析成本，但稳定性相对较差，方法建立困难。,其灵敏度高、分离能力强，稳定性好，但成本高，方法建立困难，通用性差。,需多步衍生反应，操作繁杂，稳定性差，且容易产生异构体，造成数据偏差，,单糖组成测定（结构分析和质量控制）,10种单糖标准品毛细管电泳图谱,茯苓总多糖单糖组成,淫羊藿总多糖单糖组成,日内精密度为3%内，检测限为0.05mM,单糖组成测定（结构分析和质量控制）,8种单糖标准品未衍生的电泳图谱,牛膝总多糖单糖组成与单糖标准品的比对图,牛膝总多糖单糖组成与单糖标准品的比对图,日内精密度为5%内，检测限为0.1mM,目标多糖定量分析和手性拆分,多糖酶解产物定量分析：1 甘露糖 2甘露二糖,多糖酶解产物定量分析 1 葡萄糖 2 果胶二糖 3 果胶三糖 4 半乳糖糖醛酸。,Despina AT,Raluca SS,Constantina P.Kapnissi-Christodoulou1Chiral selectors in CE: Recent developments and applications J. Electrophoresis 2013, 34:178204.,细菌脂多糖和蛋白聚糖测定,毛细管电泳测定Escherichia coli K4 脂多糖（LPS）,1.Odile FR, Donatella C, Mario DR. High-performance CE of Escherichia coli K4 cell surface polysaccharides J. Electrophoresis 2009, 30:38773883.,2. Nicola Volpi, Francesca M , Jiraporn S. Electrophoresis for the analysis of heparinpurity and qualityJ. Electrophoresis,2012, 33:15311537.,氧端和氮端糖基化能够影响蛋白稳定性，配体结合能力，免疫原性和血清半衰期。,等点聚焦和毛细管等点聚焦对比图,单克隆抗体糖基化检测（抗体类药物质量控制）,胶束毛细管电泳定量测定糖基化和非糖基化修饰蛋白,Satoru K, Kazuaki K, Evaluation of glycosylation for quality assurance of antibody pharmaceuticals by capillary electrophor