第九章维生素的分析.ppt

第九章 维生素类药物的分析 概述 维生素 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资 人体不能合成维生素 VitA D2 D3 E K1等 脂溶性 水溶性 VitB族 B1 B2 B6 B12 VitC 叶酸 烟酸 泛酸等 分类 按溶解度分 返回 H维生素A醇 COCH3维生素A醋酸酯 COC15H31维生素A棕榈酸酯 R 第一节维生素A ChP收载 人工合成的维生素A1醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液 维生素A胶丸 维生素AD胶丸 维生素AD滴剂 USP收载 维生素A醋酸酯及棕榈酸酯混合物的食用油溶液 BP收载 人工合成浓缩维生素A油是维生素A醋酸酯 丙酸酯和棕榈酸酯混合物的植物油溶液 为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 一 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物 VitA2 VitA3 易发生脱氢 脱水 聚合反应 鲸醇 或有金属离子存在时氧化 条件无水无醇 CHCl3 蓝色 紫红 BP2000 max为326nm一个吸收峰 max为350 390nm三个吸收峰 USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值 BP杂质对照品法显色剂三氯化锑 利用维生素A在325 328nm波长处有最大吸收峰进行含量测定 但其最大吸收峰的位置和百分吸收系数随溶剂不同而略有差异 一 UV法原理 立体异构体氧化降解产物合成中间体 一 UV法 维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸 三点校正法 法定方法 1 原理 1 杂质的吸收在310 340nm波长范围内呈一条直线 且随波长的增大吸收度减小 2 物质对光的吸收具有加和性 2 波长的选择 1 1VitA的 max 328nm 2 2 3分别在 1的两侧各选一点 测定对象VitA醋酸酯 12nm 测定对象VitA醇 1 325nm 2 310nm 3 334nm 测定法 1 基本步骤 第一步A的选择选择依据 所选A值中杂质的干扰已基本消除 注意 C为混合样品的浓度 第二步求 第三步求效价 换算因数由纯品计算而得 第四步 求标示量 方法 2 第一法 维生素A醋酸酯 判断是否在326 329nm之间 在326 329nm之间 改用第二法 是 否 求算并与规定值比较 规定值差值 判断差值是否超过规定值的 有一个以上超过 无超过 计算A328 校正 用A328计算 讨论 VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法 即代数法 推导而来 VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法 几何法或称6 7定位法 推导而来 在应用三点校正法时 除其中一点在最大吸收波长处测定外 其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定 在测定前务必要校正波长 测定的样品应不得少于两份 VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品 规格10000VitAIU 丸 装量差异项下 平均装量0 07985g 丸 的内容物0 1287g至10ml烧杯中 加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 精密量取2 0ml 置另一50ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 以环己烷为空白 测定最大吸收波长为328nm 并在下列波长处测得吸收度为 A300 0 374A316 0 592A328 0 663A340 0 553A360 0 228 A300 A328 0 564A316 A328 0 893A328 A328 1 000A340 A328 0 834A360 A328 0 344 求本品中维生素A占标示量的百分含量 A300 A328 0 564A316 A328 0 893A328 A328 1 000A340 A328 0 834A360 A328 0 344 0 5550 9071 0000 8110 299 0 01 0 010 0 02 0 04 A328 校正 3 52 2A328 A316 A340 3 52 2 0 663 0 592 0 553 0 637 适用于维生素A醇 等吸收比法 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法 6 7A法 3 第二法 水溶性 脂溶性 判断 max是否在323 327nm之间 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算 是 否 判断A300 A325是否 0 73 是 否 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325 校正 三氯化锑比色法 二 优点简便快速 max618nm 620nm 标准曲线法 二 返回 氨基嘧啶环 CH2 噻唑环 季铵碱 第二节维生素B1 HCl Cl 一 溶解性 1 易溶于水 2 水溶液呈酸性 二 UV 共轭双键 max 246nm 与生物碱 三 硫色素反应 四 五 盐酸根呈氯化物的反应 用于鉴别 ChP 硫色素 2H VitB1 H H H H 喹那啶红 亚甲蓝 紫红 天蓝 反应摩尔比为1 2 二 1 灵敏度高 线性范围宽 2 代谢产物不干扰 适用于体液分析 第三节维生素C L 抗坏血酸 烯二醇结构 二酮基结构 烯二醇结构 有活性 有活性 无活性 糖类的显色反应 50 结构与糖类相似 C3 OH的pKa 4 17 C2 OH的pKa 11 57 一元酸 L 抗坏血酸活性最强 手性C C4 C5 与碱反应 1 与AgNO3反应 2 与2 6 二氯靛酚反应 ChP2005 氧化型 玫瑰红色 ChP2005 玫瑰色 无色 3 其他氧化剂的反应 亚甲蓝或高锰酸钾试剂褪色碱性酒石酸铜砖红色沉淀磷钼酸钼蓝 或盐酸 50 吡咯 USP 蓝色 糠醛 戊糖 BP 0 01mol LHCl 三 杂质检查 1 溶液的澄清度与颜色 有色杂质分光光度法2 铁 铜离子 原子吸收分光光度法 指示剂淀粉指示液 H 取本品约0 2g 精密称定 加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解 加淀粉指示液1ml 立即用碘滴定液 0 05mol L 滴定 至溶液显蓝色 在30秒内不褪 每1ml碘滴定液 0 05mol L 相当于8 806mg的C6H8O6 1 酸性环境d醋酸 2 新沸冷H2O 减慢VitC被O2氧化速度 3 立即滴定 赶走水中O2 减少O2的干扰 4 附加剂干扰的排除 片剂 滑石粉 过滤 USP JP 2 快速滴定2min内 1 酸性环境HPO3 HAc 稳定VitC 防止其他还原性物质干扰 3 剩余比色测定 定量过量 测剩余染料 4 缺点 需经常标定 贮存 一周 干扰多氧化力较强 维生素D2 甾醇衍生物 维生素D3 维生素D2与D3结构区别 维生素D3侧链无双键和少一个甲基 第四节维生素D 一 结构与性质 开环的甾体 具有甾类化合物的显色反应 可用于鉴别 手性碳原子 具有旋光性 可用于鉴别 多烯 可进行紫外检测 二 鉴别试验 1 显色反应 三氯化锑反应橙红色渐变粉红 三氯化铁反应橙黄色 二氯丙醇和乙酰氯反应绿色 2 比旋度鉴别 维生素D2 维生素D3 溶剂 浓度 比旋度值 无水乙醇 无水乙醇 40mg ml 5mg ml 102 5 107 5 105 112 注意事项 应于容器开启30分钟内取样 在溶液配制后30分钟内测定 3 区别反应 以96 乙醇为溶剂 加乙醇和85 硫酸 D2显红色 在570nm处有最大吸收 D3显黄色 在495nm处有最大吸收 4 其他方法 TLC HPLC 制备衍生物测熔点 三 杂质检查 维生素D2中麦角甾醇的检查 加洋地黄皂苷溶液 混合 放置18h不得发生浑浊或沉淀 前维生素D的光照产物 四 含量测定方法 中国药典 2000年版 采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量 定量方法为内标法 内标物为邻苯二甲酸二甲酯 该法分为三个方法 固定相 硅胶流动相 正己烷 正戊醇 997 3 第一法 用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况 步骤如下 1 系统适用性试验 测定重复性和分离度 2 测定校正因子 AS mSf1 Ar mrf2 ASmr f1mSAr1 Ar2mS 3 含量测定 mi f1Ai1 f2Ai2 mS AS 第二法 用于有杂质的干扰的情况 步骤如下 1 皂化处理 皂化 乙醚提取 洗涤提取液 蒸除乙醚 制备供试液A 2 净化 供试液A经液相色谱分离 准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液 制备成供试液B 固定相 ODS流动相 甲醇 乙腈 水 50 50 2 3 含量测定 取供试液B按第一法测定 第三法 用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况 步骤如下 1 制备供试液 取供试液A 净化 水浴加热 得供试液C 制备对照液 对照品储备液 稀释 加热 2 含量测定 在第一法的色谱条件下 交替精密进样对照液和供试液 按外标法定量 返回 苯并 二氢吡喃醇 第五节维生素E dl 生育酚醋酸酯 苯环 二氢吡喃环 饱和烃链 1 UV 2 乙酰化的酚羟基易水解 醌型化合物 杂质 需检查 生育红 一 硝酸反应 橙红色 橙红色 生育红 生育酚 HNO3 强氧化剂 生育酚 对 生育醌 弱氧化剂 血红色 41 0 45 5 max 284nm min 254nm 0 01 无水乙醇中 UV法 三 薄层板硅胶G 展开剂环己烷 乙醚 4 1 显色剂硫酸 105 5 VitERf 0 7 生育酚Rf 0 5 生育醌Rf 0 9 TLC法 四 2 游离生育酚 杂质检查 三 原理 酸度以NaOH滴定液 0 1mol L 体积控制 M生育酚 430 8 例 取本品0 10g 加无水乙醇5ml溶解后 加二苯胺试液1滴 用硫酸铈液 0 01mol L 滴定 消耗硫酸铈液 0 01mol L 不得过1 0ml 2 15 限量 GC法 法定方法 一 GC特点 1 选择性好灵敏度高速度快分离效能好 挥发性低 不稳定 极性强 衍生化易受样品蒸气压限制 载气 N2固定相 硅酮 OV 17 担体 硅藻土或高分子多孔小球柱温 265 检测器 氢火焰离子化检测器 FID 内标 正三十二烷n 500R 2 内标法加校正因子 内标法 供试液 样品 内标 内标物 对照液 对照 内标 是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近 校正因子 W W K K VitE 1 2 稀释倍数 稀释倍数 样 对 实际工作中的计算方法 二 HPLC法外标法此外 还有铈量法 比色法和荧光法 返回 练习与思考 A型题 1 维生素B1的鉴别方法是A 三氯化铁反应B 硫色素反应C 柯柏反应D 与碱性酒石酸铜试液反应E 双缩脲反应 2 维生素E 中国药典 规定的含量测定方法为A 非水溶液滴定法B 旋光法C HPLC法D 紫外分光法E GC法 B型