临床生物化学实验室技术与管理.ppt

1 临床生物化学实验室基本技术与管理 2 教学目标和要求 掌握光谱分析中的对比法 摩尔吸收系数法 荧光法和比浊法测定的方法原理 在生化检验中的应用及注意事项 区带电泳的原理 应用及影响因素 离子选择性电极法测定的原理和注意事项 熟悉离心技术 其它电泳技术和层析技术中的HPLC及亲和层析的原理和应用 免疫分析技术 生物传感技术的概念和应用原理 了解光谱 层析等常用生化技术的应用原理和方法 生物芯片技术的概念和应用原理 3 本章主要内容 色谱检验技术电泳技术免疫学检验技术电化学分析技术生物传感技术光谱检验技术 4 第一节光谱检验技术 5 利用各种化学物质都具有发射 吸收或散射光谱谱系的特征 以此来确定物质性质 结构或含量 根据物质对光谱响应特征的不同 可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术 吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类 在临床生物化学检验中 光谱分析是一类十分重要的技术 应用极为广泛 它既可以研究物质的结构分析 也可以对特定物质进行定性或定量的分析 6 一 吸收光谱分析法 吸收光谱是指波长连续分布的光透过物质时 某些波长的光被物质吸收而产生的暗线或暗带组成的光谱 它是物质定量测定的基础 7 一 吸收光谱分析法 利用吸收光谱对物质进行定量的技术就是吸收光谱分析法 是实验室最常用的分析技术之一 它操作简便 快速 线性范围较宽 应用广泛 目前最常应用的技术有可见 紫外光光度分析和原子吸收分光光度法 8 可见 紫外光分光光度法 1检测原理可见 紫外光分光光度法的理论基础基于朗伯 比尔定律 可见 紫外光区一般是指波长从200nm至760nm范围内的光 其中小于400nm的是紫外光 该分析是根据物质的分子对光的吸收特性进行物质定量分析或分子结构分析的方法 9 2 测定方法在可见 紫外分光光度法中 通常在测定未知样品浓度的同时 与同一个已知浓度的标准物作比较 可以利用以下公式计算而求出其浓度 即比较法 因为As KCsbAx KCxb其中A为吸光度 C为溶液的浓度 其下标s x分别表示属标准物 待测物 k为常数 b为比色杯的光径 10 用比较法定量时 选用的标准品溶液的浓度若接近于样品溶液的浓度 可减少误差 11 若将一系列浓度不同的标准液按照一定操作过程显色后 分别测吸光度 以吸光度为纵坐标 浓度为横坐标绘制标准曲线 从标准曲线找出相对应的待测样品的浓度 即标准曲线法 12 4 分光光度法的建立 首先要确定显色液的最大吸收峰 在其它条件不变的情况下 在一定范围内以一定的步长调整波长 并记录相应波长时的吸光度 然后以波长为横坐标 吸光度为纵坐标作图 就是该反应液的吸收光谱 如图2 1 在吸收曲线上的峰称吸收峰 其对应的波长称最大吸收波长 即可确定该显色液的测定波长 13 图2 1吸收光谱图 波长的选择可按 吸收最大 干扰最小 的原则进行 14 二 发射光谱分析法 临床生物化学检验常用的有荧光分析法和火焰光谱法 由于火焰光谱法目前应用越来越少 在这里就不再详细描述 15 荧光分析法 fluorometry 有些物质物质受到有较高能量的光 如紫外光 照射时 在吸收了某些波长的光后 会发射出不同波长和不同强度的光 照射停止 发光亦随之消失 这种光称为荧光 16 荧光分析法 fluorometry 在一定条件下 荧光物质的浓度愈大 发射的荧光强度也愈强 对荧光物质进行定量测定的方法称为荧光分析法 荧光分析的灵敏度比分光度法高 通常可达10 13g L 对特定物质甚至可达到10 15g L 17 荧光分析技术的应用 荧光物质的最大吸收波长和最强荧光波长是鉴定物质的依据 该法灵敏度高 取样量少 因此被广泛应用于各领域 在临床生物化学检验中主要用于糖类 胺类 甾族化合物 DNA与RNA 酶与辅酶 维生素等物质的分析 18 第二节 电化学分析技术 19 电化学传感器在临床生化分析的应用中占据着主导的地位 其原理是将电极浸入待测溶液中组成原电池 其中一支电极的电极电位与待测离子的活度有关 此电极称为指示电极 另一支电极是电位已知并且恒定的所谓参比电极 目前最常用的参比电极有甘汞电极和银 氯化银电极 这里主要介绍离子选择电极分析法 20 离子选择电极法的原理 离子选择电极分析法 ionselectiveelectrode ISE 是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子活度的一种电化学分析法 21 离子选择电极法的原理 ISE法的核心是指示电极上带有对被测离子选择性响应的敏感膜 膜的一面与被测离子的溶液相接触 另一面则与电极内所充的一定活度的被测离子溶液和内参比电极接触 膜内外的离子活度的差异引起离子从高浓度向低浓度迁移 从而产生电位改变 其数值可在等电流的条件下测定 22 ISE的特点 选择性好 多数情况下共存离子的干扰小 组成复杂的试样往往不需分离处理即可直接测定 灵敏度高 可达10 5 10 8mol L 线性范围宽 溶血 脂血及黄疸不影响测定 对有色 浑浊溶液都可进行分析 设备简单 分析速度快 易于自动化 标本用量少 应用范围广 23 离子选择性电极的分类 离子选择电极最常用的电极有以下几种 一 玻璃膜电极 二 气敏电极 三 酶电极 24 由于离子选择电极在技术方面的优越性和制造技术的进步 电极的稳定性和寿命大大增强 有的电极还是免维护的 因此 最新临床化学分析系统倾向于多电极组合和智能化 电解质 血气和酶电极 主要是葡萄糖 尿素和乳酸传感器 集中在同一台设备中 犹如一个小型实验室 利用这种设备 同一标本一次便可以完成所有的测试 同时也可以有选择地做其中的某一项或几项测定 离子选择性电极的发展 25 第三节电泳技术 26 电泳技术应用广泛 在生物化学实验技术中占有重要地位 主要用于蛋白质 核酸等的分离 鉴定和定量 27 电泳技术的原理 原理 带电粒子在电场中的移动现象称为电泳 Electrophoresis 带负电荷的粒子向电场的正极移动 带正电荷的粒子则向负极移动 各种物质由于所带净电荷的种类和数量不同 因而在电场中的迁移方向和速度不同 利用物质的这种性质可以对物质进行分离和鉴定 普通电泳设备简单 操作方便 分辩率较高 已成为医学检验中不可缺少的常用技术 28 电泳类型及应用 电泳的分类方法很多 在这里主要根据支持介质分为纸电泳 薄层电泳 醋酸纤维素薄层电泳 琼脂糖 琼脂 电泳 淀粉胶电泳等 下面介绍几种常用的电泳类型及其应用 29 一 醋酸纤维素薄膜电泳 celluloseacetateelectrophoresis 醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化而形成的纤维素醋酸酯 由它制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜 30 一 醋酸纤维素薄膜电泳 celluloseacetateelectrophoresis 它具有分辩力好 对蛋白质吸附极少 拖尾现象轻微 不吸附染料 对区带周围的染料能完全洗去 不干扰测定 样品需要量少 介质又可以透明后定量扫描等优点 临床生物化学上分离血清蛋白 糖蛋白 脂蛋白 血红蛋白 甲胎蛋白及同工酶等大分子物质 31 二 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamidegelelectrophoresis PAGE 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶 由丙烯酰胺单体和交联剂在催化剂和加速剂的作用下聚合而成三维网状结构的凝胶 32 聚丙烯酰胺凝胶兼有电泳支持介质及分子筛的功能 大大提高了分离能力 是目前分辨率最高的电泳支持介质 它能精细地分离各种蛋白质组分 在蛋白质的电泳中 为了使被测物质的泳动速率的大小完全取决于分子量 在电泳系统中加入一定量的十二烷基硫酸钠 SDS 以消除或减少电荷对蛋白质移动的影响 33 聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于 蛋白质分子的分离鉴定 蛋白质分子量的测定 核酸的分析 非解离体系 核酸的序列测定 解离体系 以及尿蛋白电泳等诸多方面 是目前最常用的电泳技术之一 34 三 等电聚焦电泳 两性电解质的载体 在电场中可以形成一个连续的pH梯度 蛋白质具有多解离基团 在不同pH下处于不同的荷电状态 当周围环境的pH值低于蛋白质的等电点 pI 时 蛋白质呈正电性 在电场中向负极移动 在移动过程中 正电性逐渐减弱 直至零 此时蛋白质移到了pH等于pI的区域 不再移动 原理 35 反之 溶液pH高于蛋白质的等电点时 蛋白质呈负电性 在电场中向正极移动 最终也将停在pH等于pI处 只有当溶液的pH等于蛋白质的等电点 为电中性 蛋白质在电场中才不移动 利用蛋白质的这个性质 将其放在由两性电解质形成的pH梯度中 可以依不同蛋白质的等电点不同 达到分离的目的 等电聚焦电泳 36 等电聚焦电泳的优点 等电聚焦电泳的分辩率很高 可达0 001pH单位 主要用于样品组分较复杂但pI不同的蛋白质的分析 如血红蛋白和同工酶的分析 37 第四节 常用免疫分析技术 38 随着单克隆抗体的开发和使用 各种标记技术的发展使得免疫学进入了一个新的时期 由于免疫分析技术具有特异性好 快速 灵敏度高等 使得其应用范围十分广泛 在临床生物化学中可以对内分泌激素 蛋白质 多肽 核酸 神经递质 受体 肿瘤标志物 血药浓度等血清微量物质进行定量测定 39 一 免疫比浊分析 带有小颗粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光线的性质 散射光谱分析法就是利用悬浮颗粒的混浊液的散射光强度或对入射光减弱的原理进行定量分析的方法 其方法原理类似比尔定律 常规应用主要有两类 透射比浊法和散射比浊法 40 一 散射免疫比浊分析 散射比浊法 nephelometry 是指一定波长的光沿水平轴照射 通过溶液时遇到抗原抗体复合物粒子 光线被粒子颗粒折射 发生偏转 光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关 41 散射光的强度与复合物的含量成正比 即待测抗原越多 形成的复合物越多 散射光强度越强 散射比浊法分析是免疫比浊分析中最常用的一种方法 42 二 透射免疫比浊分析 透射比浊法 turbidimetry 是测定一定体积的溶液通过的光线量 光通量 当光线通过时 由于溶液中存在抗原 抗体复合物粒子对光线的反射和吸收 引起透射光的减少 测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比 在透射比浊中 测量的是透过不溶性复合物到达探测器而未被散射或吸收的光线 测定角度与正前方夹角为0 43 三 免疫比浊分析的临床应用 该方法主要用于检测血浆 体液中的特定蛋白系列 这些特定蛋白成分的定量检测 可为临床诊断与治疗提供有效的病理生理指标 而且是作为临床诊断 判断治疗效果 分析预后的依据 44 补体C3 C4反应补体的消耗情况 前白蛋白 PA 可作为营养不良和肝功能不全的指标 AAT缺乏者可发生年青人肺气肿 新生儿和成人肝损害 TRF用于贫血的鉴别诊断 急性时相反应蛋白C 反应蛋白 载脂蛋白A和B ApoA ApoB 尿微量蛋白和一些小分子量的治疗性药物浓度等 45 二 酶免疫分析 酶免疫分析 enzymeimmunoassay EIA 是将酶催化的放大作用与抗原 抗体的免疫反应相结合的一种标记免疫分析技术 46 二 酶免疫分析 与放射免疫分析相比其最大优势在于避免了放射性核素对人体的损害 核素标记的抗原或抗体批间差异大 酶标记物具有明显较长的有效期和不需特殊设备等 近年来在EIA中又引进了放大系统 派生出荧光酶免疫分析 增强化学发光酶免疫分析等 使检测的灵敏度大大提高 47 酶免疫分析的原理 酶是一种能催化化学反应的特殊蛋白质 其催化效率超过目前所用的人造催化剂 此外 酶还具有高度的专一性 酶标记抗原或抗体后 既不影响抗原或抗体的免疫反应特异性 也不改变酶本身的催化活性 48 在测定时 把待测样品 测定其中的抗原或抗体 与固相表面的抗原或抗体结合 洗涤后加入酶标记抗原或抗体 反应后经洗涤去除游离的酶标记物 加入酶反应底物 底物被酶催化产生呈色反应 呈色的深浅与样品中待测物质的量直接相关 故可以进行定性或定量分析 49 双抗体夹心法示意图 50 EIA在临床生物化学中的应用 目前EIA在临床生化中主要用于治疗药物 如地高辛 激素 如性激素 维生素 酶和同工酶 受体 肿瘤相关抗原的超微量 微量 半定量 定性分析 此外还用于自身抗体 细菌 病毒 寄生虫和基因工程产物等的定量 定性 或定位分析 51 第五节 其他检验技术 52 一 离心技术 离心机是利用物质的高速旋转时产生强大的离心力 使置于该旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮 从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离的目的 离心机的种类繁多 用途各异 53 离心机的应用 目前在生物医学领域内常用的离心机种类繁多 按其离心转子能到达最高转速分类有 低速离心机 在6000rpm以下 高速离心机 在25000rpm以下 超速离心机 在30000rpm以上 在超速离心机中 根据用途不同 又可分为制备型 分析型和制备分析两用型 54 离心机的应用 制备型和分析型超速离心机的主要区别在于分析型有附设的光学系统 可以在离心分离过程中通过光学系统 将大分子的沉降行为以扫描或照相的形式记录下来 有的有观察镜 在可见光波段内直接观察颗粒的沉降行为 55 二 高效液相层析法 高效液相层析法 HighPerformanceLiqiudChromatography HPLC 是用特制微粒 10um 充填的层析柱作为固定相 通过高压使液体流动相快速通过层析柱而达到快速有效分离液相中各种物质的层析技术 56 二 高效液相层析法 它具有分离效果好 分析速度快 检测灵敏度高等特点 在医药卫生和生物化学中得到广泛的应用 蛋白质 糖类 核酸 氨基酸 生物碱 类固醇和类脂等大分子以及高分子聚合物都能用HPLC测定 57 高效液相层析法是目前最好的血药浓度监测方法 但在实际应用中存在一些问题 如每遇到一个新药必须摸索测定的最佳条件 各种药物的测定条件不同 要不断的更换流动相甚至色谱柱 每次只能测定一种药物 至多只能测定一类药物 无法测定性质不同的药物 因此 高效液相层析法用于常规血药浓度监测 只适用于少量 常用的某些特定药物 大大限制了它的推广应用 58 鉴于临床的需要 国外一些公司设计了自动高效液相色谱仪 该仪器具有如下优点 固定色谱柱和流动相 使一台仪器适合多种药物的检测 利用计算机技术 储存几百种药物的图谱 能自动识别未知药物 为提高图谱鉴别能力 该机利用了三维光谱 出峰时间等多种手段 自动进样系统使仪器自动定量或定性测定 分析多达50个样品 59 三 放射免疫分析 放射免疫分析 radioimmunoassay RIA 是体外竞争性放射结合分析方法中应用最为广泛的一种免疫分析方法 由于它利用了现代放射性测量技术的高度敏感性和精确性 其灵敏度可达10 9 10 12g ml 是一种超微量的分析技术 同时 由于其分析原理是基于抗原与抗体间高度专一性的结合反应 因而它具有很高的特异性 能从组分十分复杂的样品中准确地测出某一特定组分的含量而不受其它组分的干扰 60 四 生物传感技术 生物传感器 biosensor 是指固定化的生物体内成分 酶 抗原 抗体 激素等 或生物体本身 细胞 细胞器 组织等 为敏感元件组成的传感器 61 生物传感器这种新的检测手段与传统的生物化学相比具有以下的主要特点为 生物传感器是用选择性好的生物体材料作为敏感材料 因此一般不需要进行样品的前处理 一般也不需另加其他试剂 使用简便 快速 准确 62 由于它的体积小 可以实现连续在位检测 联机操作 响应快 样品用量少 且由于敏感材料是固定化的 可以反复多次使用 传感器连同测定仪器的成本远低于大型的分析仪 便于推广普及 63 生物传感器根据利用的生物物质的不同可分为两类 一类是利用酶 细胞内小器官 细胞 组织等具有辅酶特性物质的生物催化传感器 酶传感器 微生物传感器和组织传感器属于此类 另一类是利用抗体 结合蛋白质 激素受体 DNA RNA等具有亲和性物质的传感器 免疫传感器 受体传感器 DNA传感器属于这类 64 五 生物芯片技术 生物芯片 biochip 是指采用光导原位合成或微量点样等方法 将大量生物大分子比如核酸片段 多肽分子甚至组织切片 细胞等等生物样品有序地固化于支持物 如玻片 硅片 聚丙烯酰胺凝胶 尼龙膜等载体 的表面 组成密集二维分子排列 然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交 通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速 并行 高效地检测分析 从而判断样品中靶分子的数量 种类等信息 65 由于常用玻片 硅片作为固相支持物 且在制备过程模拟计算机芯片的制备技术 所以称之为生物芯片技术 根据芯片上的固定的探针不同 生物芯片包括基因芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 另外根据原理还有元件型微阵列芯片 通道型微阵列芯片 生物传感芯片等新型生物芯片 如果芯片上固定的是肽或蛋白 则称为肽芯片或蛋白芯片 如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA 就是DNA芯片 66 用计算机控制的高分辨荧光扫描仪可获得结合于芯片上目的基因的荧光信号 通过计算机处理即可给出目的基因的结构或表达信息 检测扫描仪根据原理不同可分为两类 一是激光共聚焦显微镜的原理 另一种是CCD摄像原理 前者的特点是灵敏度和分辨率较高 扫描时间长 比较适合研究用 后者的特点是扫描时间短 灵敏度和分辨率较低 比较适合临床诊断用 67 生物芯片技术在医学中的应用 l 基因测序2 新药开发3 寻找新基因 68 第六节生物化学检验的标本 69 生化检验对临床疾病诊断有重要的价值 临床医生在申请某项生化检查时 应考虑到结果对诊断 治疗的意义 如果结果与预期值相差很大 则可能是初诊错误 标本错误 分析错误或结果报告错误 除初诊错误外 后三者分别称作分析前误差 分析中误差和分析后误差 其中分析前误差在所有误差中比重最大 只有严格的加以控制 才有助于分析后结果的正确解释 分析前因素包括标本采集 标本处理和病人的准备等 70 标本的采集 一份完整的申请单应包含以下内容 条码号 门诊号 住院号 病人的姓名 性别 出生日期 病房 床位号 临床诊断 问题或特殊检验注意事项 申请检查项目 标本类型 采样时间 标本接收时间 年 月 日 时 分 有关治疗情况 用药情况 医生姓名等 一 检验申请单 71 二 血液标本的采集 毛细血管采血主要用于儿童 静脉血是最常用的标本 静脉穿刺是最常用的采血方法 血气分析多使用动脉血 72 一 静脉采血法 注意事项 1 防止溶血 造成溶血的因素有注射器和容器不干燥 不清洁 淤血时间过长 穿刺不顺利 组织损伤过多 抽血速度太快 血液注人容器时未取下针头或注人速度过快产生大量泡沫 震荡过于剧烈等 若用普通注射器采血后 未取针头直接将血注人真空管内 也易造成溶血 体内溶血属合格标本 但应在报告单上注明 73 注意事项 2 避免充血和血液浓缩 采血时应动作迅速 尽可能缩短止血带使用时间 用止血带压迫时间最好不超过半分钟 否则将使生化结果升高或下降 3 若病人正在进行静脉输液 不宜在输液同侧手臂采血 若女性病人做了乳腺切除术 应在手术对侧手臂采血 74 注意事项 4 采血的体位 体位改变可引起一系列的生理变化 使血液中的许多指标发生改变 一般采取直立位采血 其二标本的测定值比卧位高5 15 因此 采血时要注意保持正确的体位 坐位或卧位 以及体位的一致性 75 注意事项 5 采血时只能向外抽 决不能向静脉内推 以免注人空气 形成气栓而造成严重后果 6 很多生化成分受膳食影响 因此 采血前要确认病人是否空腹 76 二 动脉采血法 肱动脉 股动脉 桡动脉以及其它任何部位的动脉都可以作为采血点 但多选择肱动脉和桡动脉 77 三 真空采血法 标准真空采血管采用国际通用的头盖和标签颜色显示采血管内添加剂种类和试验用途 可根据需要选择相应的盛血试管 78 三 尿液标本的采集 定量生化分析多收集24小时尿液 24小时尿标本采集方法如下 嘱病人在早晨8时排尿弃去 以后每次排尿均收集于一大容器内 至次日早晨8时最后一次尿亦收集于容器内 测量并记录24小时尿液总量 然后混匀尿液 取适量尿液送检 79 三 尿液标本的采集 尿标本收集后应12时内送检 以免细菌作用和化学成分分解 若不能及时检验 如收集24小时尿液 将标本置冰箱保存 若加人防腐剂 保存效果更佳 80 四 特殊标本的采集 脑脊液的采集 将脑脊液标本收集于三支无菌试管中 第l管作细菌检查 第2管作生化检查 第3管作细胞计数 脑脊液标本应尽量避免凝固和混人血液 标本采集后要立即送检 以免因标本放置时间过长使其成分变化 如葡萄糖分解 使葡萄糖含量降低 81 标本的处理 标本处理不当将可能引起比分析更大的误差 因此 应根据分析目的选择合适的抗凝剂 防腐剂和处理方法 82 标本的处理 肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖 其抗凝机理主要是对抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性 阻止血小板聚集 肝素抗凝血常用于血气分析和部分生化项目的测定 使用1 og L的肝素溶液0 5ml可抗凝5ml血液 83 标本的处理 草酸钾一氟化钠草酸钾可与血中钙离子生成草酸钙沉淀 从而阻止血液凝固 草酸钾溶解度大 抗凝作用强 氟离子能结合钙而抗凝 但抗凝效果较弱 氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化酶 防止糖酵解 若未加氟化钠 血标本中葡萄糖含量将以每小时6 的速度下降 而在氟化钠的存在下 血糖浓度在25 可稳定24小时 4 可稳定48小时 因此 草酸钾一氯化钠是血糖测定标本常使用的抗凝剂 84 影响检验结果的生物学因素 除病理性因素外 引起生化测定结果变化有两大原因 即分析学因素的变化和生物学因素的变化 通过严格进行实验方法的选择和评价 以及开展生物化学检验的质量控制 可有效的控制分析因素的变化 本节着重讨论生物学因素变化对检验结果的影响 85 影响检验结果的生物学因素 一 生理因素的影响 一 年龄 二 性别 三 体型 四 妊娠 五 昼夜节律的变化 六 运动 86 二 饮食和药物的影响除了急诊或其它特殊原因外 一般主张空腹12小时以后取血 维生素C是一种还原剂 可干扰葡萄糖氧化酶法测定血糖 口服含黄体酮成分的避孕药引起血清胆固醇的升高 利尿药增加血钠和血钾浓度 87 可影响肝功能试验的药物很多 如非那西丁 别嘌呤醇 氨基水杨酸 雄激素 环磷酸胺 红霉素 消炎痛 异烟肼 6一巯基瞟吟 阿的平 烟酸 保泰松 磺胺药 吩噻嗪等 这些药物可使血清碱性磷酸酶 胆红素 丙氨酸氨基转移酶 天门冬氨酸氨基转移酶浓度或活性升高 吗啡可使血清淀粉酶 脂肪酶 氨基转移酶 碱性磷酸酶 胆红素等升高 使胰岛素 去甲肾上腺素等降低 大麻可使血钾 钠 氯 尿素和胰岛素等升高 而使肌酐 尿酸 血糖降低 88 第六节自动生物化学分析仪的应用与原理 89 自动生化分析仪由电脑控制 将生化分析中的取样 sampling 加试剂 混匀 保温反应 检测 detect 结果计算 可靠性判断 显示和打印 以及清洗 cleaning 等步骤组合在一起自动进行操作的分析仪器 自动生化分析仪的定义 90 自动生化分析技术的应用 提高了临床生化检验质量和速度 减轻检验人员的劳动强度 节约样品和试剂 增加检验项目 提高检测精密度 减少实验误差 并且有利于临床检验标准化的实现 91 自动生物化学分析仪的类型 按其工作方式不同分为 连续流动式 continuousstreamingmovementstyle 或管道式 已很少用离心式 centrifugationstyle 已很少用分立式 discretestyle 应用最广泛干片式 dryingstyle 急诊多用 92 分立式自动生物化学分析仪 一 工作原理 分立式自动生物化学分析仪是按人工操作的方式编排程序 并以有序的机械动作代替人工 按程序依次完成各项操作的自动分析仪器 仪器操作过程中的各环节用传送带连接 按程序依次操作 93 二 基本结构1 样品盘或样品架 样品盘 specimendisc 放置待测样品的转盘 可放置一定数量的样品杯 specimencup 或不同规格的采血试管 通过样品盘的转动来控制不同样品的进样 94 2 试剂室和试剂瓶 转盘式试剂室 reagentchamber 内装放置试剂瓶的转盘 一般可放置20种以上具有一定形状的塑料试剂瓶 大型分析仪可放置30 45种试剂瓶 试剂瓶容量一般为10 100ml 通过试剂转盘的转动来选用不同试剂 95 大型分析仪同时备有第一试剂室和第二试剂室 即具备对同一检测项目添加两次试剂的功能 个别分析仪还具有加入第三试剂的功能 对有条形码装置的仪器可将带条形码的试剂瓶放在试剂室转盘上的任意位置 仪器能自动识别试剂的种类 批号和有效期 试剂室均具有冷藏装置 可将试剂保存在4 10 96 3 反应杯和反应盘 反应杯 reactioncup 是样品与试剂进行化学反应的场所 同时用作比色杯 由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成 比色杯光径不同分析仪有0 5 0 7厘米不等 大多数分析仪在计算时将其折算为1厘米光径 97 反应盘 reactiondisc 100只或更多的反应杯围成一圈组成 在测定过程中反应盘作恒速的圆周运动 在静止时向反应杯中加入样品 试剂或进行搅拌混匀 当反应盘恒速圆周运动经过检测窗口的比色杯可进行吸光度检测 98 4 取样和加试剂装置 1 取样装置 samplingassembly 由取样针 取样臂 取样管路 取样注射器和阀门组成 能定量吸取样品并加入到反应杯 不同分析仪的取样容量有不同的范围 一般为2 35 l 步进0 1微升不等 99 取样针设有电子液面感应器 取样针于样品上方下降 一旦接触到样品液面即停止下降而开始吸样 适用于不同的采血试管上机测定 100 多数加样装置设有防撞功能 遇到阻碍时取样针立即停止运动并报警 某些取样针还设有阻塞报警功能 当取样针被样品中的凝块 纤维蛋白等物质阻塞时 机器会自动报警 冲洗取样针 并跳过当前样品 进行下一个样品的取样检测 101 取样针防交叉污染 crossingcontamination 措施 绝大多数采用水洗方式 又有瀑布式和涌泉式之分 在吸取另一个样品前对接触样品的样品针内外壁进行冲洗 也有采用化学惰性液 c