疟原虫常识与镜检

,疟原虫常识与镜检 技术的临床应用儋州市第一人民医院检验科 范学成 2010.12.13,主要内容： 一. 疟原虫的种类与分布 二. 疟原虫生活史与病症概述 三. 疟原虫的形态与镜检技术 四. 培训实时测验,“疟”字释疑： 根据新华字典 “疟” 属 多音字 1. 疟（读Yo） 指疟疾，俗称。 2. 疟（读N） 指疟疾，一种急性传染病，病原体 是疟原虫，传染源是蚊子，为周期性 发冷发热的症状。,历史回顾,3千多年前， “疟”的象形文字出现在隋代诸病源候论，及以后国内外某些医学家均认为疟疾是 “瘴气”所引起的。,1880年法国人Alphonse Laveran在疟疾病人红细胞中发现疟原虫。 1897年英国人Ronald Ross发现蚊虫与传播疟疾的关系。 1948 -1960年 Shortt及Garnham证实了人类疟原虫的肝细胞外期。 1977-1980年 Lysenko 和Krotoski等 提出“休眠子”学说。 经过一个世纪的研究，疟原虫生活史得以基本阐明。,疟原虫的分布与种类 分 布 疟原虫主要分布在地球热带、亚热带各国，即非洲、东南亚、南美等地区，约有20亿人口在疫区。每年死于疟疾的儿童约100万。我国在华南、华中的某些地区，特别是云南和海南省，因此，疟疾仍是我国重点防治的寄生虫病之一。种 类 至今全球发现疟原虫有130多种，宿主：人类、哺乳动物、鸟类及爬行类。 寄生于人体的疟原虫共有如下四种：,目前，我省只有间日疟和恶性疟。 卫生部要求： 我省应在2012年消除疟疾！,寄生于人体的四种疟原虫,通过按蚊叮咬进入人体,二.疟原虫生活史概述,子孢子,雌蚊吸血，经皮肤侵入人体,移入肝细胞,速发型子孢子迟发型子孢子（约6-12个月休眠）,无性裂体生殖,裂殖体,胀破肝C释放,裂殖子,某些因素刺激,侵入血流,进入RBC,环状体,裂体增殖,大滋养体,早期裂殖体,成熟裂殖体,裂殖子,胀破RBC,释放,经过几次,裂体增殖,雌配子体雄配子体,雌蚊吸血,进入蚊胃,雌配子雄配子,合子,配子结合,动合子,穿过胃壁,在胃壁下,卵囊,孢子增殖,侵入新的RBC,遗传基因多态性分型,自然气温16-30蚊体内P.V 8-9天P.f 10天,RBC外期P.V 8天 P.f 5天,RBC内期P.V 48hP.f 36-48h,内潜伏期,外潜伏期,人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两个宿主。 1. 在按蚊体内进行有性繁殖，按蚊是疟原虫的终末宿主。 2. 在人体内进行无性增殖，人是疟原虫的中间宿主。,电镜下MP感染的RBC和裂殖子的释出（人卫版本科教材）,疟疾病症典型症状： 周期性寒战、高热（T：39-40 ）、出汗, 每次发作时间 610h。热 型： 即周期性与红内期裂体增殖周期一致。 P.v、P.o 48h P.f3648h，渐不规则 P.m72h贫 血： A. 与RBC大量直接破坏有关。 B. 脾亢，脾肿大 、单核巨噬细胞增生所致，26 倍大，巨噬细胞增多，吞噬增强 。 C. 骨髓中RBC生成障碍。D. 自身免疫破坏RBC。,发烧,发烧,裂体增殖,48h,隔日,PV热型与原虫发育的关系,海南省琼中县儿童因疟疾引起的脾脏肿大（人卫版本科教材）,疟原虫营养代谢胞饮、吞噬摄取营养蛋白质：氨基酸来自血红蛋白、血浆 RBC珠蛋白+血红素疟色素（R除外各期 消化分解Hb后的最终产物 ）能量： 葡萄糖来自血浆，但要利用RBC 中的G6PD 缺乏G6PD的病人对疟原虫有选择抗性,疟原虫的寿命,疟原虫在人体内有一定的寿命，恶性疟原虫约1年，其中大部分只活到68个月；间日疟原虫为1年半至3 年，不超过4年。 人体免疫力对疟原虫的生存是有影响的，所以，这里说的疟原虫的寿命与指疟原虫在一定条件下的寿命；或者说是感染后的疟疾病程。,疟原虫的形态与镜检技术 1. 形 态 人体 疟原虫的基本构造：胞核、胞质和包膜 疟原虫形态检查三要素：胞核、胞质和虐色素 胞 核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。 胞 质 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。 疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈细小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。,各期疟原虫形态比较英文缩写代号： MP疟原虫 P. v间日疟原虫 P.f 恶性疟原虫 P.m 三日疟原虫 P.o 卵形疟原虫 R 环状体（小滋养体） T 大滋养体 S 裂殖体 G 配子体 P.f的T、S主要在皮下、脂肪和内脏微血管中发育， G成熟后，约在无性体出现后710天才见于外周血液中。 因此，通常外周血检查只见到R和G这两期的P.f，这是鉴别P.v、P.f的要点之一。,被疟原虫寄生的RBC变化 虫种 RBC大小 RBC颜色间日疟 胀大 变淡 恶性疟 正常或缩小 正常,薄血膜中 P.v 的形态环状体(P.v.R),P.v.R,约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状体和一个环状体有2个核。,P.v.R,大滋养体(P.v.T),经810小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点,成熟裂殖体（P.v.S）,红细胞： 胀大，褪色，可见薛氏小点。大 小： 个体较大。胞浆和核：裂殖子1224个平均16个，排 列不规则，核红色，胞浆浅兰色。色 素： 黄褐色常集于疟原虫的一边。,P.v.S,实体标本镜检形态（吉氏染色）,间日疟原虫雄配子体(P.v.G),间日疟原虫雌配子体(P.v.G),虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素分散,虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散,P.V雄配子体,P.V雌配子体,实体标本镜检形态（吉氏染色）,P.V.G的雌雄实体,间日疟大滋养体(T)与配子体(G)的区别,T G虫体： 较小 较大胞浆： 边缘不规则可见空泡 边缘规则无空泡 核： 较小、不规则 较大有不染色带色素： 较少、分布不匀， 色素分布均匀,T,G,薄血膜中 P.f 的形态,虫体：约占RBC的1/5-1/6,环状。常见几个虫同时寄生在同一细胞核： 小致密规则、常见2个核胞浆：纤细完整,P.f.R,P.f.G,P.f.G,疟原虫厚、薄血膜镜检的主要形态变异,薄血膜：原虫寄生在红细胞里,形态典型,易鉴别,但一般只用于教学和虫种鉴别. 厚血膜：经染色血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。 厚血膜由于细胞重迭，干燥缓慢，虫体形态发生较大变化,特别是小滋养体和大滋养体变化就更大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；飞鸟“.”、“V”状。而大滋养体空泡消失，胞浆断裂成块是它的特点。裂殖体和配子体的形态则无明显变化。虽然大、小滋养体形态千变万化，但只要掌握疟原虫的核、胞浆、色素三个要点是不难鉴别的。,厚血膜 一般门诊须检查2001000个油镜视野（相当于0.52.5l血量），才能确保镜检的敏感性和可重复性。通常的敏感性可达约1020个原虫/l血。 由于厚血膜比薄血膜用血量大，涂布面积小，阳性检出率较高。查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。因此，疟疾诊断性镜检应以检查厚血膜为主。均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。,间日疟原虫,恶性疟原虫,厚血膜集中视野,各种不同时期疟原虫形态的比较,薄血膜,P.v.R P.f.R大小：约占RBC的1/3 约占RBC的1/5部位：RBC里少见多个虫同时寄生 RBC的边缘 、常见多个虫同时寄生核： 大、较松、两核少见 小、致密、两核多见 胞浆：较粗、不规则 纤细、规则,P.v.R 对 比 P.f.R,厚血膜,厚血膜,P.v.G 对 比 P.f.G,血片中的PC、杂质,注意杂质与疟原虫的区分,P C,杂质,镜 检 技 术,1. 采血时间： P.v 发作后10小时内采血，各期（R、T、S、G）疟原虫均可查见。 P.f 发作时采血可查到 R；发作后10天左右采血可查见 G。 2. 厚薄片的制作： 厚血膜取约4ul血液置于玻片合适位置上，用推片一角由里向外旋 转2-4圈，涂成直径0.8-1厘米大小的圆形均匀血膜。 薄血膜取约1ul血液置于玻片合适位置上，推成宽2厘米、长2.5厘米 的血膜。 同片可制作两个厚血膜，一个薄血膜（见下图）。玻片头可粘 贴患者信 息，亦可在薄片头以铅笔写上患者姓名、编码等。,3. 染色 （1）首先晾干血片，以甲醇或无水酒精固定薄血膜。应用 吉氏染色法，每张玻片约需染液1ml。 （2）配制染色工作液：1ml清洁水（Ph7.0-7.2）+1-2滴吉 氏原液/血片，混匀。须现配现用。 （3）将配好的吉氏染液滴入血片，并均匀分布染色10-20分钟。然后用 清水轻轻将染液冲洗干净，晾干待检。4. 镜检 （1）一般只查厚片，薄片仅作为疟原虫分类参考和编号用。 （2）可先以油镜头配合5X低倍目镜镜检，有疑问时可调换10X目镜进行 观察。 （3）检查时应从厚血膜的上缘开始，按下图示意的顺序方向，视野稍叠 视野地查完整个血膜。,厚血膜镜检示意图,5. 结果报告,阴性：报告“未查到MP”阳性：报告“查到XXXMP”厚血膜疟原虫镜检“记号”报告法： 全血膜同种同期疟原虫10个以内均记实际数，10个以上但还不到平均1个/视野则记为“少”。报告格式如P.v.T . S . G , P.f. R . G 。 平均每个视野同种同期疟原虫： 1-5个 “+” 如P.f.R 6-10个“+” 如P.f.R 10-100 个“+” 如P.v.R. G 100个以上“+” 如P.f.R 注 意： A.抗凝血制作的血片其粘附力差，染色冲洗易于脱落，可 先用生理盐水洗涤2-3次后，再制作厚、薄片。 B.油镜与玻片的清洗： 加清洗液（7份乙醚3份无水乙醇）适量