豆奶粉中蛋白质含量的测定.ppt

豆奶粉中蛋白质含量的测定 凯式定氮法原理 蛋白质是含氮的有机化合物 食品与硫酸和硫酸铜 硫酸钾一同加热消化 使蛋白质分解 碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出 分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵 然后碱化蒸馏使氨游离 用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定 根据酸的消耗量乘以换算系数 即为蛋白质的量 原理 1 有机物中的胺根在强热和CuSO4 浓H2SO4作用下 硝化生成 NH4 2SO4 其中CuSO4做催化剂 2 在凯氏定氮器中与碱作用 通过蒸馏释放出NH3 收集于H3BO3溶液中 3 用已知浓度的H2SO4 或HCI 标准溶液滴定 根据HCI消耗的量计算出氮的含量 然后乘以相应的换算因子 既得蛋白质的含量 1 硫酸钾作为增温剂 提高溶液沸点 纯硫酸沸点340 加入硫酸钾之后可以提高至400 以上 也可加入硫酸钠 氯化钾等提高沸点 但效果不如硫酸钾 沸点提高加速了反应过程 2 硫酸铜作为催化剂 还可以作消化终点指示剂 做蒸馏时碱性指示剂 3 盐酸 mol L 4 2 硼酸溶液5 40 氢氧化钠溶液6 混合指示剂 把溶解于95 乙醇的0 l 溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95 乙醇的0 l 甲基红溶液2毫升混合而成 7 0 05NHCl标准溶液或0 05N硫酸标准溶液 试剂 仪器和设备 凯式定氮瓶铁架台 电炉 通风橱容量瓶 长颈圆底烧瓶 回流装置 冷凝管 锥形瓶 盐酸标准滴定溶液的配制 一 实验步骤 1 配制0 5mol L的盐酸标准滴定溶液 量取45mL盐酸 加水定容至1000mL 摇匀备用 2 标定盐酸标准滴定溶液 准确称取0 8g在270 300摄氏度下干燥至恒重的的基准无水碳酸钠 加50mL水使之溶解 再加10滴溴甲酚绿 甲基红混合指示剂 用本溶液滴定0 05mol L的盐酸标准滴定溶液 至其由绿色转变成紫红色 煮沸2min 冷却至室温 继续滴定至溶液有绿色变为暗紫色 做3个平行样品 同时做试剂空白实验校正结果 二 计算公式 式中 c 盐酸标准滴定溶液的实际浓度 mol Lm 基准无水碳酸钠的质量 mg0 0530 的毫摩质量 g mmol 注意事项 本实验要求的盐酸标准滴定溶液为0 05mol L 由于标准滴定溶液的浓度太小 如果直接配制会导致误差过大 最终影响实验的结果 因此 我们在配制标准滴定溶液时选用了稀释法 首先配制0 5mo L的盐酸标准滴定溶液 然后用无水碳酸钠标定此溶液 最后将标定得出的数据除以10 得出的最终结果为实验所需盐酸标准滴定溶液的浓度 本实验所用的盐酸标准滴定溶液 是用我们配制的0 5mol L的盐酸标准滴定液稀释10倍所配成的 蛋白质测定的分析步骤 1 样品处理 精密称取2g样品移入干燥的500ml定氮瓶中 加入0 2g硫酸铜 6g硫酸钾及20毫升硫酸 稍摇匀后放入消化炉中消化 至液体呈蓝绿色澄清透明后 再继续加热0 5小时 取下放冷 小心加20ml水 放冷后 移入100ml容量瓶中 并用少量水洗定氮瓶 洗液并入容量瓶中 再加水至刻度 混匀备用 取与处理样品相同量的硫酸铜 硫酸钾 硫酸铵同一方法做试剂空白试验 样品消化 蒸馏 滴定 2 安装好定氮装置 于水蒸气发生器内装水约2 3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸 以保持水呈酸性 加入数粒玻璃珠以防暴沸 用调压器控制 加热煮沸水蒸气发生瓶内的水 3 蒸馏 想接收瓶内加入10ml2 硼酸溶液及混合指示剂1滴 并使冷凝管的下端插入液面下 吸取10 0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室 并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内 塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞 将10ml40 氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯 提起玻璃塞使其缓慢流入反应室 立即将玻璃盖塞紧 并加水于小玻璃杯以防漏气 夹紧螺旋夹 开始蒸馏 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内 蒸馏5min 然后移动接收瓶 使冷凝管下端离开液皿 再蒸馏1min 然后用少量水冲洗冷凝管下端外部 取下接收瓶 以0 05mol L盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点 同时吸取10 0ml试剂空白消化液按3操作 回流装置 实验过程视频 结果计算 式中 X 样品中蛋白质的含量 g V1 样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积 ml V2 试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积 ml N 硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度 0 014 1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数 m 样品的质量 体积 g ml F 氮换算为蛋白质的系数 蛋白质结果分析 1 QB T2132 2008规定植物蛋白饮料豆奶 豆浆 和豆奶饮料中蛋白质的含量应大于或等于2 0 100ml 而我们测得的结果为2 09g 100ml 符合标准要求 为合格品 2 本次实验的只有两个样品消化成功 为了减少误差 我们用一个成功样品做了3次平行实验 注意事项 1 硝化时如不容易呈透明溶液 可将定氮瓶放冷后 慢慢加入30 过氧化氢 H2O2 2 3ml 促使氧化 2 在整个消化过程中 不要用强火 保持和缓的沸腾 使火力集中在凯氏瓶底部 以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下 使氮有损失 消化时应注意不时转动凯氏烧瓶 以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下 促进其消化完全 3 如硫酸缺少 过多的硫酸钾会引起氨的损失 这样会形成硫酸氢钾 而不与氨作用 因此 当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时 要增加硫酸的量 4 向蒸馏瓶中加入浓碱时 往往出现褐色沉淀物 这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应 生成氢氧化铜 经加热后又分解生成氧化铜的沉淀 有时铜离子与氨作用 生成深l蓝色的结合物 C