MM_FS_CNJ_0315 出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法.DOC

MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕 脲酶活性 pH增值法 盐酸中和法MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30作用30min后，测定溶液的pH值。2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。按上法调节其pH至7.0。2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于300.5；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60。收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。置于300.5水浴中，记下时间。隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。与上管间隔5min置于同一水浴中。在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。每个试管都在消化30min后，从水浴中取出，倒出上清液于小烧杯中。并在从水浴中取出后恰好5min时，测定pH值读数。注意：pH计测定前须预热30min以上，玻璃电极须在蒸馏水中浸泡活化24 h以上，方可使用；防止所有玻璃容器或电极的污染。如果pH计不能迅速给出稳定的读数，即应查清故障。甘汞电极的多孔组织如蒙上了大豆的可溶性成分，常可引起偶然故障。2.6.结果计算将主体试验的pH值减去空白试验的pH值，其差值作为脲酶活性。2.7.允许差对于蒸熟的或未经蒸熟的产品来说，同一实验室内的双试验结果允许差各自为0.03和0.10pH单位。3.方法二3.1.术语脲酶活性：指在下述操作条件下，试样的脲酶分解尿素释放氨基氮的量，以每克样品每分钟释放的氨基氮的毫克数表示。3.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混匀，在30静置30min后，加入过量盐酸溶液中和所释放的氨，然后用氢氧化钠标准溶液反滴。3.3.主要试剂和仪器3.3.1.主要试剂缓冲尿素溶液：pH6.9pH7.0。将4.45g二水磷酸氢二钠（Na2HPO42H2O）和3.40g磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于水，稀释至1000mL制得缓冲溶液。溶30g尿素（NH2CONH2）于缓冲液。这样制备的缓冲尿素溶液保存期为一个月；盐酸标准溶液：c（HCl）0.1molL；氢氧化钠标准溶液：c（NaOH）0.1molL。3.3.2.仪器标准筛；电势滴定器或pH计：感量为0.02 pH单位，备有自动滴定管和电磁搅拌器；滴定瓶或50mL烧杯；试管：直径18mm，长150mm，配有磨口内塞。其他仪器见2.3.2条。3.4.样品的制备用碾磨器将样品约10g碾至颗粒能全部通过孔径为80目的筛层。在产品特殊的情况下（如高水分和含有高挥发性物质的产品），可先在室温下进行预干燥处理后，再研磨。并在计算结果时，把由于预干燥处理而造成的质量损失考虑在内。3.5.试样的抽取于试管中称取试样约0.2g，准确至0.1mg。对于酶活性非常高的样品，试样可减至0.05g。3.6.过程简述用移液管加入10mL缓冲尿素溶液于盛有试样的试管中，迅速加塞并用力振摇，立即将试管放入300.5的恒温水浴中，保持30min，用精密计时器计时，立即用移液管加入10mL盐酸溶液，迅速冷却至20，并将试管中的内容物无损失地移入滴定瓶中，把试管用每份5mL的蒸馏水冲洗两次。迅速用氢氧化钠标准溶液回滴至pH4.70，最好用电势滴定器。隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。另取同样试管，加入与主体试验等量的样品，再加入10mL盐酸溶液和10mL缓冲尿素溶液，作为空白试验。立刻加塞并用力振摇。随即放入同一水浴中，与主体试验同样的方法，恒温保持30min，冷却至20，移内容物于滴定瓶，用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。3.7.结果计算按式（1）计算脲酶活性U（mgNming样品）：U（V0V1）14T（1）30m式中：V0 空白试验所耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL；V1 主体试验所耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL；T 氢氧化钠标准溶液的浓度，molL；M 试样的质量，g