cho基因敲除细胞系.doc

学习资料收集于网络，仅供参考北京维尚立德生物HO-GS-/-1 is derived from CHO-K1 cell (ATCC ), and Knock-out glutamate-ammonia ligase gene by TALEN, then adapt to suspension culture with serum free culture medium.Cho细胞来源：ATCC CHOK1Genotype sequence：CHO GS WT:GS Knock-out genotype : 5bpMutant:ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTG.TATCTCAGCCCTGTTGCCATGTWT:ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTGACATGTATCTCAGCCCTGTTGCCATGTmycoplasma detection result:1-5: different cell wells sample;NC: negative control;北京安必奇生物Knockout基因敲除细胞或动物模型一直以来是开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶点的重要工具。CRISPR/Cas系统是细菌的一种适应性免疫机制，用来抵抗各种外来核酸的入侵。CRISPR/Cas9技术与ZFN、TALEN相比，更为高效、便捷，成为基因编辑的一个重要工具，在基因工程领域开创了新纪元。改造优化后的CRISPR/Cas9系统由两部分组成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特异性识别靶位点后，Cas9蛋白在靶位点附近进行切割，从而形成DSB。安必奇凭借先进的技术平台、专业的科研团队，将为您提供各种Knockout基因敲除细胞系服务，甚至是难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。我们的一站式服务包括：sgRNA设计、筛选高效的sgRNA、敲除载体构建、敲除效率验证等。我们将会在最短的时间内提供给您高质量的单克隆基因敲除细胞系，以及全面的检测报告，包括靶点设计，靶点基因敲除效率检测，克隆筛选及靶基因检测全部过程。技术流程服务内容 靶点设计-根据目的基因设计相应的靶位点，并构建sgRNA表达质粒。 效率检测-通过Cruiser Enzyme酶切及pool细胞测序对设计的sgRNA进行靶点敲除效率检测。 细胞转染-将cas9和sgRNA质粒转染目的细胞。 克隆筛选-挑选单克隆细胞，检测细胞基因型。 敲除检测-Cruiser Enzyme酶切、TA克隆测序、qRT-PCR 、 Western blot 等。我们的优势 多样细胞种类-在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、 V79、CHO、HepG2 等多个种属细胞中成功构建Knockout基因敲除细胞系。 一站式服务-我们提供从sgRNA设计至敲除结果检测（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服务，满足客户不同的需求。 各种基因位点-敲除效率不受靶位点限制。 敲除效率高- 敲除效率达到高，且脱靶效率低，达到100%的准确率。应用前景 研究基因的功能及表达调控机制。 构建各种基因突变导致的疾病模型如白化病、阿尔兹海默症、镰刀型细胞贫血症等，从而研究疾病的治疗及诊断方法。 染色体敲除或大片段敲除1。 通过设计模版链和同源臂，插入外源基因或修复突变基因，从而进行转基因或突变基因修复实验2。 利用Cas9的突变体（dCas9）只能特异性识别结合靶位点，而不能产生DSB的特点，可以进行基因表达调控的研究3-4以及甲基化等表观遗传学研究5。参考文献1 He Z, Proudfoot C, Mileham A J, et al. Highly efficient targeted chromosome deletions using CRISPR/Cas9J. Biotechnology and bioengineering, 2015, 112(5): 1060-1064.2 Schwank G, Koo B K, Sasselli V, et al. Functional repair of CFTR by CRISPR/Cas9 in intestinal stem cell organoids of cystic fibrosis patientsJ. Cell stem cell, 2013, 13(6): 653-658.3 Perez-Pinera P, Kocak D D, Vockley C M, et al. RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9-based transcription factorsJ. Nature methods, 2013, 10(10): 973-976.4 Gilbert L A, Larson M H, Morsut L, et al. CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcription in eukaryotesJ. Cell, 2013, 154(2): 442-451.5 Konermann S, Brigham M D, Trevino A