药物分析-第十四章-维生素类药物的分析.ppt

第十四章维生素类药物的分析 概述 维生素维持正常生理功能所必需的 微量营养物质 人体不能合成维生素 必须从外界食物中摄取 维生素的发现是20世纪的伟大发现之一 1897年 C 艾克曼在爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚气病 未经碾磨的糙米能治疗这种病 并发现可治脚气病的物质能用水或酒精提取 当时称这种物质为 水溶性B ChristiaanEijkman1929诺贝尔生物医学奖 TheDiscoveryofVitamin 发现简史 必需维生素13种 维生素A 维生素B 维生素C 维生素D 维生素E 维生素K 维生素H 生物素 维生素P 维生素PP 维生素M 维生素T 维生素U 水溶性维生素 分类 A B1 C D E Vitamins Contents 维生素A的简介 是鱼类肝脏中提取的一种不饱和脂肪醇 又称鱼肝油 目前主要采用人工合成 在体内以视黄醇的形式储存 缺乏会影响视色素的合成 导致夜盲症 视力减退 第一节维生素A的分析 全反式 第一节维生素A的分析 结构 共轭多烯醇侧链的环己烯 黄色棱形 62 64 淡黄色棱形 57 58 无定型 28 29 去氢维生素VitA2 去水维生素VitA3 易发生脱氢 脱水 聚合反应 第一节维生素A的分析 溶解性 与三氯甲烷 乙醚 环已烷或石油醚能任意混合 在乙醇中微溶 在水中不溶 不稳定性 含有多个不饱和键 性质不稳定 易被空气中氧或氧化剂氧化 易被紫外光裂解 特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活 第一节维生素A的分析 性质 紫外吸收 共轭多烯醇侧链结构 在325 328nm之间有最大吸收 可用于鉴别 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 天然维生素A主要是反式 CHCl3 可用于鉴别和含量测定 与三氯化锑呈色 三氯甲烷 三氯化锑 不稳定的蓝色 与三氯化锑呈色反应 第一节维生素A的分析 鉴别实验 一 Carr Price反应 蓝色 紫红 第一节维生素A的分析 条件 无水 无醇 SbCl3 水 SbOCl 乙醇可使碳正离子的正电荷消失 第一节维生素A的分析 要求仪器和试剂必须干燥无水 三氯甲烷必须无醇 第一节维生素A的分析 max为326nm一个吸收峰 max为350 390nm三个吸收峰 五个共轭双键 六个共轭双键 最大吸收峰红移 二 UV法 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 维生素A在无水乙醇溶液中溶解 立即进行UV扫描 在360nm处有一最大吸收峰 当盐酸水浴加热30s 迅速冷却 此过程发生脱水反应 扫描时出现三个吸收峰 USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值 BP对照品法显色剂三氯化锑 三 TLC法 第一节维生素A的分析 展开剂 环己烷 乙醚 80 20 均显蓝色斑点 维生素醇 Rf 0 1 维生素醋酸酯 Rf 0 45 维生素棕榈酸酯 Rf 0 7 酸值 取乙醇与乙醚各15ml 置锥形瓶中 加酚酞指示剂5滴 滴加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 至显粉红色 再加本品2 0g 振摇使溶解 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 酸值应不大于2 0 附录VIIH 杂质检查 过氧化值 取本品1 0g 加冰醋酸 三氯甲烷 6 4 30ml 振摇使溶解 加碘化钾的饱和溶液1ml 振摇1分钟 加水100ml与淀粉指示液1ml 用硫代硫酸钠滴定液 0 01mol L 滴定至紫蓝色消失 并将滴定的结果用空白试验校正 消耗硫代硫酸钠滴定液 0 01mol L 不得过1 5ml 杂质检查 第一节维生素A的分析 含量测定 一 UV法 三点校正法 第一节维生素A的分析 维生素A在325 328nm的波长范围内有最大吸收 可用紫外法进行含量测定但维生素A原料常混有杂质如 第一节维生素A的分析 维生素A的氧化产物 第一节维生素A的分析 维生素A在光照下产生的无活性的聚合物 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 测定对象 VitA醋酸酯时 ChP2015规定 第一法等波长差法 第一节维生素A的分析 第二法等吸收比法 测定对象 VitA醇时 ChP2015规定 第一节维生素A的分析 合成的或天然的维生素A均为酯式维生素A 根据供试品中干扰杂质的多少 可采用 1 直接测定法 2 皂化法 第一节维生素A的分析 求 求效价 1 基本步骤 4 测定方法 A选择 A328测定或A328校正 求标示百分含量 1 第一法 直接测定法 适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定 1 方法取样品适量 精密称定 加环己烷溶解在300 316 328 340 360nm测吸收度 以确定最大吸收波长 A328或A328校正 第一节维生素A的分析 b 判断法最大吸收波长在326 329nm之间 且5个波长下的绝对值差值均不超过0 02时 可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数 a 计算吸收度比值 Ai A328 与中国药典的吸收度比值相比较 判断每个差值的绝对值是否超过0 02 第一节维生素A的分析 最大吸收波长在326 329nm之间 计算5个波长下的绝对差值 如果有一个或几个超过0 02 应按以下的方法进行判断 A328校正 3 52 2A328 A316 A340 第一节维生素A的分析 1 第一法 直接测定法 适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定 1 方法取样品适量 精密称定 加环己烷溶解在300 316 328 340 360nm测吸收度 确定A2 计算a 吸光系数E1 1cm 第一节维生素A的分析 b 求效价 IU g 效价指每g供试品所含维生素的A的国际单位数 第一节维生素A的分析 1IU 0 344 g全反式维生素A醋酸酯 IU g 第一节维生素A的分析 每克纯品相当多少个单位 IU 1IU 0 344 g全反式维生素A醋酸酯 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 c 求维生素A占标示量的百分含量 A A328或A328校正D 供试品的稀释倍数换算因子 维生素A醋酸酯在环己烷中1900 维生素A醇在异丙醇中1830W为平均内容物重量 W为称取内容物重量 供试品取用量 L 比色池厚度标示量为处方中规定的每粒中所含的国际单位数 第一节维生素A的分析 VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品 规格10000VitAIU 丸 装量差异项下 平均装量0 08262g 丸 的内容物0 2399g至250ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 精密量取2 0ml 置另一20ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 以环己烷为空白 测定最大吸收波长为328nm 并在下列波长处测得吸收度为 第一节维生素A的分析 A300 0 354A316 0 561A328 0 628A340 0 523A360 0 216 A300 A328 0 555A316 A328 0 907A328 A328 1 000A340 A328 0 811A360 A328 0 299 求本品中维生素A的含量 第一节维生素A的分析 A300 A328 0 564A316 A328 0 893A328 A328 1 000A340 A328 0 833A360 A328 0 344 0 5550 9071 0000 8110 299 0 01 0 010 0 02 0 04 第一节维生素A的分析 第一节维生素A的分析 适用于维生素A醇 等吸收比法 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法 6 7A法 2 第二法 第一节维生素A的分析 水溶性 脂溶性 第一节维生素A的分析 判断 max是否在323 327nm之间 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算 是 否 第一节维生素A的分析 判断A300 A325是否大于0 73 是 否 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325 校正 0 3 3 f 第一节维生素A的分析 高效液相色谱法 流动相 正己烷 异丙醇 997 3 检测波长 325nm系统适用性实验考察分离度 是否能将维生素A醋酸酯顺式和反式分开 第一节维生素A的分析 三氯化锑比色法 max618nm 620nm 标准曲线法 第一节维生素A的分析 优点 简便快速 第一节维生素A的分析 小结 维生素A 共轭多烯醇侧链的环乙烯性质 脂溶性 不稳定 可与三氯化锑呈色鉴别 三氯化锑反应 UV TLC含量测定 紫外 分光光度法 三点校正 三氯化锑比色法 A B1 C D E Vitamins Contents 维生素B1广泛分布于米糠 麦麸和酵母中 具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能 主要用于治疗维生素B1缺乏症 多发性神经炎及胃肠疾病 第一节维生素B1的分析 氨基嘧啶环 噻唑环 亚甲基 氯化4 甲基 3 2 甲基 4 氨基 5 嘧啶基 甲基 5 2 羟基乙基 噻唑鎓盐酸盐 结构与性质 维生素B1 盐酸硫胺 第二节维生素B1的分析 结构与性质 维生素B1为白色结晶或结晶性粉末易溶于水 微溶于乙醇 不溶于乙醚水溶液呈酸性 1 溶解性 性质 噻唑环 嘧啶环共轭双键12 5 g ml盐酸溶液 9 1000 max 246nm 2 硫色素荧光反应 3 UV 杂原子的反应 能与某些生物碱沉淀试剂反应 生成组成恒定的沉淀 可用于鉴别和含量测定 4 与生物碱沉淀试剂反应 5 氯化物的特性 与NaOH共热 形成硫化钠 硝酸铅生成黑色沉淀 6 硫元素反应 7 红外光谱特征 二 鉴别试验 一 硫色素荧光反应 为维生素B1所特有 H2O 溶于丁醇 显蓝色荧光 维生素B1 VitB1 H H H 沉淀反应 H S元素反应 Cl 反应 硫元素反应和氯化物反应 H CompanyLogo 三 含量测定 高氯酸滴定液 0 1mol L 的滴定度 T 为16 86mg ml 喹那啶红 亚甲蓝 紫红 天蓝 非水溶液滴定法 紫外分光光度法 维生素B1分子中具有共轭双键 在紫外区有吸收 注意 维生素B1片的测定 片剂 注射剂 421 每片 相当于标示量的 A ECL ChP 1 1 每ml 相当于标示量的 NaOH 硫色素荧光法 维生素B1的专属性反应 2 方法 小结 维生素B1 盐酸硫胺 氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成季铵盐 性质 水溶性 硫色素反应 可与生物碱沉淀剂反应鉴别 硫色素反应 沉淀反应 Cl S反应含量测定 非水滴定 紫外分光光度法 硫色素荧光法 A B1 C D E Vitamins Contents 第三节维生素C的分析 维生素C是胶原蛋白形成所必需的 有助于保持间质的完整 维生素C缺乏可导致齿龈肿胀 出血 皮下瘀点 关节及肌肉疼痛 毛囊角化 严重缺乏可引起坏血病 所以维生素C又称为抗坏血酸 L 抗坏血酸 有生物活性 L 二酮古罗糖酸 L 去氢抗坏血酸 无生物活性 第三节维生素C的分析 结构与性质 C3 OH的pKa 4 17 C2 OH的pKa 11 57 2 酸性 一元酸 性质 1 溶解性 易溶于水 水中呈酸性 略溶于乙醇 不溶于三氯甲烷或乙醚 L 抗坏血酸活性最强比旋度 20 5 21 5 手性C C4 C5 3 旋光性 含有四个光学异构体 有活性 有活性 无活性 4 还原性 二烯醇结构 与碱反应 5 水解反应 弱碱中生成单钠盐 强碱中水解 糖类的显色反应 50 结构与糖类相似 6 具糖的性质 五碳糖 维生素C 7 UV特征 维生素C具有共轭双键 利用还原性 与氧化剂的反应 鉴别试验 一 与AgNO3反应 去氢抗坏血酸 黑色 二 与2 6 二氯靛酚反应 氧化型 玫瑰红色 酸性 蓝色 碱性 无色 与碱性酒石酸铜反应 与KMnO4反应 三 与其他氧化剂反应 砖红色沉淀 试剂褪色 磷钼酸钼蓝 与磷钼酸反应 四 薄层色谱法 五 糖类反应 H2O 维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下水解 脱羧 生成戊糖 再失水 转化为糠醛 加入吡咯 加热至50 产生蓝色 0 01mol LHCl 五 紫外光谱法 BP2010 杂质检查 一 溶液的澄清度与颜色检查 内酯环水解 糠醛缩合呈色 高于或低于pH 0 6 0 空气 光线 温度 维生素C 脱羧 控制有色杂质 维生素C 二 铁 铜离子 三 草酸的检查 草酸与金属离子作用形成沉淀 所以对Vc的原料 尤其是注射液 要进行草酸检查 加入CaCl2 比浊法 原子吸收分光光度法 二 铁 铜离子 原子吸收分光光度法 四 含量测定 维生素C 维生素C制剂 碘量法 二氯靛酚法 紫外分光光度法 高效液相色谱法 指示剂淀粉指示液 一 碘量法 原理 利用Vc强的还原性 HAc 取本品约0 2g 精密称定 加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解 加淀粉指示液1ml 立即用碘滴定液 0 05mol L 滴定 至溶液显蓝色 在30秒内不褪 每1ml碘滴定液 0 05mol L 相当于8 806mg的C6H8O6 2 方法 原料药 2 酸性环境稀醋酸 1 新沸冷H2O 减慢VitC被O2氧化速度 3 立即滴定 赶走水中O2 减少O2的干扰 3 注意事项 4 附加剂干扰的排除 片剂 过滤 二 2 6 二氯靛酚滴定法 快速滴定 专属性强 用于含VitC的制剂与食品分析 自身指示终点 1 原理 2 方法 2 快速滴定2min内 1 酸性环境HPO3 HAc 稳定VitC 防止其他还原性物质干扰 3 亦可剩余比色测定 定量过量 测剩余染料 3 注意事项 4 二氯靛酚不稳定 须临用前配制并标定 专属性强 多用于含Vc的制剂和食品的分析 配制方法 NaHCO342mg 水 50ml 加二氯靛酚钠二水合物0 5g 水 200ml 过滤 即得 标定方法 用干燥的维生素C对照品进行标定 三 高效液相色谱法 人血浆中VitC浓度的HPLC法测定 小结 维生素C L 抗坏血酸 烯二醇结构性质 水溶性 酸性 旋光性 还原性 水解性糖类性质 紫外吸收特性鉴别 硝酸银反应 二氯靛酚钠反应 氧化反应 TLC 糖类反应 紫外杂质检查 澄清度与颜色检查铁 铜离子检查草酸检查含量测定 碘量法 二氯靛酚滴定法 高效液相色谱 A B1 C D E Vitamins Contents Sources SunlightFoodsFortifiedMilkFishOils Deficiency 佝偻病牙齿松动鸡胸骨质疏松脚成弓形 Function 促进钙 磷的吸收 促进骨骼和牙齿的正常生长 调节柠檬酸的代谢 第四节维生素D的分析 维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称 目前有10多种 都是甾醇衍生物 维生素D2维生素D3 第四节维生素D的分析 维生素D2 D3无色针状结晶或白色结晶性粉末 无臭 无味 遇光或空气均易变质 溶解性 维生素D2在三氯甲烷中极易溶解 在丙酮乙醇乙醚中易溶 维生素D3在乙醇 丙酮 三氯甲烷或乙醚极易溶解 二者均在植物油中略溶 在水中不溶 不稳定性 毒性增强 含有多个烯键 所以极不稳定 宜氧化变质 效价降低 毒性增强 第四节维生素D的分析 旋光性 有五到六个手性碳原子 均具有旋光性 维生素D26个手性碳原子维生素D35个手性碳原子 第四节维生素D的分析 显色反应甾类化合物氯仿溶液黄色红色紫色绿色紫外吸收特性无水乙醇265nm维生素D2为460 490维生素D3为465 495 醋酐硫酸 E 1cm 1 E 1 1cm 二 鉴别试验 一 显色反应 1 与醋酐 浓硫酸反应 氯仿溶液黄色红色紫色绿色 醋酐硫酸 2 与三氯化锑反应 本品 1 2 二氯乙烷 三氯化锑试液 橙红色 粉红色 3 其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇乙酰氯 绿色 二 比旋度鉴别 无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为 102 5 至 107 5 维生素D3 比旋度为 105 至 112 三 其它鉴别方法 薄层色谱法 HPLC法制备衍生物测熔点 紫外 红外吸收光谱 四 维生素D2 D3的区别反应 维生素D2 维生素D3 96 乙醇 10ml 取0 1ml 乙醇1ml和85 硫酸5ml 红色 max570nm 黄色 max495nm 三 杂质检查 一 麦角甾醇的检查 维生素D290 乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀 二 前维生素D的光照产物 三 有关物质检查 Ch P2010 NP HPLC 含量测定 USP34 NF29 化学法 色谱法 微生物法 BP2010 化学法 色谱法 光谱法 四 含量测定 正相高效液相色谱法 一 维生素D测定法 含量以单位表示每单位相当于维生素D0 025 g 注意 计算的是维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量 固定相 硅胶流动相 正己烷 正戊醇 997 3 检测波长 254nm 第一法 用于无维生素A醇及其他干扰的供试品第二法 1 皂化提取 2 净化用色谱柱系统分离收集维生素D 得供试品溶液B 3 按第一法进行测定 第三法 当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后 前维生素D峰仍受干扰时 采用此法 小结 维生素D 抗佝偻病维生素的总称性质 脂溶性 不稳定 旋光性 显色反应 紫外鉴别 显色反应 比旋度 VD2 VD3区别杂质检查 麦角甾醇 前维生素D光照产物 有关物质含量测定 三法 A B1 C D E Vitamins Contents 主要讲解 第五节维生素E的分析 维生素E早在20世纪20年代就被人们发现 Evans和他的同事在研究生殖过程中发现 酸败的猪油可以引起大鼠的不孕症 是与生育有关的维生素的总称1936年分离出结晶体1938年被瑞士化学家人工合成 维生素E的显微照片 维生素E胶囊 维生素E类结构与相对活性 维生素E的结构 2R 4R 8R 3 4 二氢 2 5 7 8 四甲基 2 4 8 12 三甲基十三烷基 2H 苯并吡喃 6 醇醋酸酯 生育酚醋酸酯 生物效价右旋体 消旋体 1 4 10 天然品 合成品 维生素E的性质 性状 黄色或金黄色粘稠状透明液体脂溶性 溶于丙酮 乙醇 乙醚或植物油等有机溶剂中水溶性 不溶于水稳定性 无氧时对热 酸稳定 对碱不稳定 对氧敏感 遇光可被氧化 色渐变深 UV 乙醇溶液中 max284nm 一 硝酸反应 二 鉴别试验 维生素E在硝酸酸性条件下 水解生成生育酚 水解 三氯化铁 联吡啶反应 二 生育酚 对 生育醌 红色 Fe3 O max 284nm min 254nm 0 01 无水乙醇中 薄层板硅胶G 展开剂环己烷 乙醚 4 1 显色剂硫酸 105 5 VitERf 0 7 生育酚Rf 0 5 生育醌Rf 0 9 维生素E合成过程 2 3 5 三甲基对二苯酚 植醇 生育酚 生育酚醋酸酯 三 杂质检查 三 杂质检查 一 酸度 游离醋酸 二 生育酚 硫酸铈滴定液 0 01mol L 二苯胺 亮黄 灰紫 利用游离生育酚的还原性 将硫酸铈还原成硫酸亚铈 三 杂质检查 1 原理 2 试剂 问药典中规定的维生素E中所含的游离生育酚的限量是多少 计算每ml硫酸铈滴定液 0 01mol L 相当于0 002154g的游离生育酚 2 15 限量 三 有关物质的检查 四 残留溶剂 环己烷的检查 四 含量测定 GC法 一 GC特点 1 选择性好灵敏度高速度快分离效能好 挥发性低 不稳定 极性强 衍生化 易受样品蒸气压限制 载气 N2固定液 硅酮 OV 17 担体 硅藻土或高分子多孔小球柱温 265 检测器 氢火焰离子化检测器 FID 内标 正三十二烷n 500R 2 内标法加校正因子定量 2 VitE测定的色谱条件 内标法 供试液 样品 内标 内标物 对照液 对照 内标 是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近 样品 dl 生育酚固定相 十八烷基硅烷键合硅胶流动相 甲醇 水 49 1 检测波长 292nmR 2 6RSD 0