基因工程概念.ppt

DNA重组技术的基本工具 1 原理 2 操作水平 3 又称 4 优点 基因重组 DNA分子水平 DNA重组技术或基因拼接技术 定向改造生物性状 克服远缘杂交不亲和的障碍 育种周期短 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 拼接 导入 表达 基因重组 一 基因工程的概念 二 基因工程的基本工具 看书 思考以下问题 1 基因工程中三种基本工具的作用分别是什么 2 工具酶的作用部位分别在哪 3 具备什么条件才能充当 分子运输车 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具 关键步骤一的工具 关键步骤二的工具 关键步骤三的工具 基因的剪刀 限制酶基因的针线 DNA连接酶基因的运载工具 运载体 一 分子手术刀 限制性核酸内切酶 1 来源 主要来自原核生物 2 特点 具有专一性 特异性 表现在两方面 1 识别双链DNA中特定核苷酸序列 2 从特定部位的两个核苷酸之间切开 3 作用 特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 4 结果 产生黏性末端或平末端 Sma 平末端平末端 EcoR 黏性末端 黏性末端 黏性末端和平末端 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列 无论是6个碱基还是4个碱基 都可以找到一条中心轴线 中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 二 分子缝合针 DNA连接酶 1 种类 E coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 2 作用 可把黏性末端之间的缝隙 缝合 起来 E coliDNA连接酶或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗 T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙 缝合 起来 但效率较低 常用的运载体 质粒 噬菌体和动 植物病毒等 三 分子运输车 运载体 载体必须具备的条件 如果载体对受体细胞有害将怎样 目的基因是否进入受体细胞 没有标记基因我们能否鉴定 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样 作为载体没有切割位点将怎样 作为载体的必要条件 1 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 2 具有多个限制酶切点 以便与外源基因连接 3 具有某些标记基因 便于进行筛选 如抗菌素的抗性基因 产物具有颜色反应的基因等 4 对受体细胞无害 三 分子运输车 运载体 2 种类 1 需要具备的条件 1 在受体细胞中稳定存在 能自我复制 2 有一个或多个切割位点 3 有标记基因 4 对受体细胞无害 质粒 噬菌体 动植物病毒等 以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段 试分析 GC AATTC GC CTTAACG G CG G 1 其中 和是由一种限制酶切割形成的末端 2 和是由另一种限制酶切割形成的末端 反馈练习 在基因工程中 切割运载体和含有目的基因的DNA片段 需使用 同种限制酶B 两种限制酶同种连接酶D 两种连接酶基因工程常用的受体细胞有 1 大肠杆菌 2 枯草杆菌 3 支原体 4 动植物细胞A 3 4 B 1 2 4 C 2 3 4 D 1 2 3 不属于质粒被选为基因运载体的理由是A 能复制 B 有多个限制酶切点C 具有标记基因D 它是环状DNA D 2 下列说法正确的是 A 限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列B 质粒是基因工程中唯一的运载体C 重组技术所用的工具酶是限制酶 连接酶 运载体D 利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为 克隆 审题 3 下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的是 A B C D TCGAGCTTAA AGGTTCCA AGCTTCAG AATTCG 4 下列哪一种酶是基因工程的工具酶 A DNA连接酶B DNA酶C RNA酶D 运载体 记住了 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的 在基因操作的基本步骤中 不进行碱基互补配对的步骤是 A 人工合成目的